2010;30(8)南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)( J South Med Univ)1969苦地丁的提取工藝吳青業(yè)1,關(guān)業(yè)枝1,劉嬋1,黃成安(廣州中醫(yī)藥大學(xué)1科技產(chǎn)業(yè)園,2009屆實(shí)習(xí)生,廣東廣州510445)摘要:目的研究苦地丁的最佳提取工藝。方法采用正交試驗(yàn)法,以紫靈的含量為考察指標(biāo),考察溶劑用量提取次數(shù)、提取時(shí)間對(duì)紫堇炅含量的影響,從而確定最佳提取工藝。結(jié)果確定最佳提取工藝條件為:用8倍量的90%乙醇提取2次,每次3h。結(jié)論此提取工藝簡(jiǎn)便、易行,可用于苦地丁藥材的提取。關(guān)鍵詞:苦地丁;正交試驗(yàn);紫堇靈中圖分類號(hào):R2842文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):16734254(2010)08-1969-02苦地丁又名地丁、苦丁、小雞菜,用于清熱解毒、mm,中性氧化鋁12g,柱長(zhǎng)20cm,濕法裝柱,用30活血消腫,藥理學(xué)研究資料表明主要化學(xué)成分為生ml%5%乙醇預(yù)洗)上,用95%乙醇洗脫,收集洗脫液物堿類,紫堇靈為主要活性成分?？嗟囟∨R床應(yīng)用于25ml,水浴蒸干,殘?jiān)蛹状既芙?加甲醇定容至多個(gè)傳統(tǒng)方劑中,如感冒清熱顆粒、利膽八味散、清血100ml,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),即得。解毒丸、犀角紫草丸、連翹敗毒丸(散)等2。而對(duì)苦地24標(biāo)準(zhǔn)曲線丁活性成分(紫堇靈)的提取工藝研究在國(guó)內(nèi)尚未見精密吸取對(duì)照品溶液0.5,1.0,2.0,4.0,6.0,8.0報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以紫革靈的含量為指標(biāo),對(duì)苦地丁的不ml,分別加甲醇定容至10ml,搖勻。按上述色譜條件同提取工藝進(jìn)行比較,采用正交試驗(yàn)優(yōu)選出適合工業(yè)測(cè)定。以進(jìn)樣量ⅹ(μg)為橫坐標(biāo)峰面積A為縱坐標(biāo),化生產(chǎn)的紫堇靈最佳提取工藝?yán)L制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得冋歸方程為:A=127×10X+11296r-09996,進(jìn)樣量在0.0781.248范圍內(nèi)與峰面積1儀器與試藥呈良好的線性關(guān)系。Waters2695-2996高效液相色譜儀(美國(guó)),Empower色譜工作站;紫堇靈對(duì)照品(111343工藝考察200601):中國(guó)藥品生物制品檢定所;苦地丁藥材3.1提取溶劑考察(20081223):市售;其余試劑均為AR級(jí)。提取生物堿常用的提取溶劑有水、乙醇。分別考察提取溶劑對(duì)提取率的影響2分析方法稱取苦地丁藥材(過(guò)10目篩)50g,共3份,分別2.1色譜條件加人10倍量的蒸餾水、8倍量90%的乙醇(含1%乙色譜柱: Diamonsil C18(5μm,250mm×4.6酸)、8倍量90%乙醇(適量的濃氨水潤(rùn)濕藥材)作為mm);流動(dòng)相:甲醇-0.015molL磷酸鹽緩沖液(pH提取溶劑,分別提取3h。提取液按上述方法處理,計(jì)67)(取磷酸二氫鉀1.58g和磷酸氫二鉀076g,加水算紫堇靈的含量(mgg)。結(jié)果(表1)表明,水、酸性乙l000ml溶解,混勻,用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至醇較堿性乙醇的提取率低,故本試驗(yàn)優(yōu)選堿性乙醇作289mm。理論板數(shù)按紫革靈峰計(jì)算應(yīng)不低于600.提取溶劑。67)(70:30);流速:1.0 mUmin;柱溫:28℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為提取溶劑。表1提取溶劑種類對(duì)提取率的影響2.2對(duì)照品溶液的制備溶劑種類含量(mgg)精密稱取紫堇靈對(duì)照品7.6mg,加甲醇定容至100ml,即得。酸性乙醇0.729堿性乙醇2.3供試品溶液的制備將提取液于60℃薄膜濃縮至無(wú)醇味,用2%鹽酸3.2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)調(diào)pH至2.5,濾過(guò),濾液用pH25的鹽酸溶液定容至用90%乙醇(先用適量的濃氨水潤(rùn)濕藥材)提取500ml,精密量取續(xù)濾液50ml,置氧化鋁柱(內(nèi)徑15苦地凵中國(guó)煤化工正交試驗(yàn)表頭設(shè)計(jì)見收稿日期:201006-15CNMHG分析提取苦地丁中紫堇靈的最優(yōu)雜為AB,即8倍的90%乙基金項(xiàng)目:廣州市白云區(qū)科技局項(xiàng)目(2008P03)作者簡(jiǎn)介:吳膏業(yè)(1968-),男,博士,副主任藥師,主要從事中藥制備醇,提取2次,每次3hT藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究33方差分析通訊作者:關(guān)業(yè)枝,電話:02087476093, E-mail: zlll(@ hotmail com對(duì)以上正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析,由結(jié)果(表1970南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)( J South Med Univ)第30卷褻2因素及水平設(shè)計(jì)表行提取,紫堇靈的平均得率為1503mgg,實(shí)驗(yàn)結(jié)果稍高于優(yōu)化的工藝,說(shuō)明選擇的工藝是可行的因素乙醇用量(倍)提取次數(shù)(次)提取時(shí)間(h)空白衰5驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果468試驗(yàn)號(hào)紫萌靈含量(mgg)平均值(mgg)RSD%)0.6l513表3試驗(yàn)結(jié)果(n=2)序號(hào)A蘊(yùn)靈含量(mgg4討論12223323312231045中藥材提取的常用溶劑為水、乙醇,但水的提取0.597范圍廣,選擇性較差,精制困難,且游離的生物堿難溶于水,故不適宜作為提取該藥材活性成分的提取溶劑。而乙醇可以溶解生物堿及其鹽類、蒽醌、黃酮等成分,為本研究以堿性乙醇提取苦地丁的活性成分提供均值11.0050.7301.073了依據(jù)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明堿性乙醇比酸性乙醇更有利均值210111.3640959于苦地丁活性成分提取,原因系苦地丁的活性成分為均值31.1181.0401.102極差0.1130.6340.1430024生物堿,大部分生物堿在堿性乙醇中被游離出來(lái)而易溶于乙醇中,而在酸性乙醇中生物堿與酸成鹽,從而4)看各因素影響主次順序:提取次數(shù)>提取時(shí)間>使提取率降低。分析方法中樣品溶液不采用傳統(tǒng)的三溶劑用量,均為顯著性影響因素(P<001)。確定最佳氯甲烷萃取,而通過(guò)中性氧化鋁柱凈化,具有操作簡(jiǎn)提取工藝為:用8倍量的90%乙醇提取2次,每次3便、省時(shí)、毒性小的優(yōu)點(diǎn)。表4方差分析衰參考文獻(xiàn):方差來(lái)源偏差平方和自由度F比F臨界值品著性[1]呂惠子,崔興日,王廣錄苦地丁的化學(xué)成分與藥理[J]中藥野生19000P00l植物資源,2002,21(4):545.ABc0.603260300019000P001[2]黃閣,趙懷清,李發(fā)美苦地丁的化學(xué)成分分離分析及活性研究00352350000.903P001冂].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,18:4I923誤差[3]國(guó)家藥典委員會(huì)中國(guó)藥典,一部[S]北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:138-9,644.3.4驗(yàn)證試驗(yàn)[4]梁生旺,中藥制劑分析[M]北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2008:75精密稱取苦地丁藥材粗粉500g先用適量的濃5】劉定遠(yuǎn),醫(yī)藥數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法[M]北京:人民衛(wèi)生出版社,20氨水潤(rùn)濕,靜置半小時(shí),加入8倍量的90%乙醇問(wèn)流提取提取2次每次3h,平行做3份,測(cè)定紫繭靈含6]徐盛,邱祖民,劉燕燕,等中藥梔子提取工藝的優(yōu)化門中成藥,2006,28(10):151921量。由表5得知,按照篩選的最佳工藝(ABCD1)進(jìn)[7)張兆旺中藥藥劑學(xué)[M]北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版杜,200:197中國(guó)煤化工CNMHG