動(dòng)物學(xué)雜志 Chinese Journal of2aoky20.4(4):125-128中國(guó)小鯢的核型卿立燕②陳勤曾蟯茂∞王一1(①四川師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院成都610101;②中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所成都610041)摘要:中國(guó)小鯢( Hynobius chinensis)被描述于116年前我國(guó)學(xué)者于2005年在模式產(chǎn)地湖北宜昌再次采到標(biāo)本,至此該物種的有效性得以確認(rèn)。以2007年采于模式產(chǎn)地的中國(guó)小鯢胚胎為材料,采用 Giemsa染色方法,對(duì)中國(guó)小鯢的核型進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,中國(guó)小鯢的二倍體染色體數(shù)為56,28對(duì)染色體按大小和形狀可以分為4組:第一組,包括Nos1~9,由大型m,cm,s染色體組成;第二組為中型雙臂染色體組,由Nos.10~13組成包含m,sm染色體;第三組,包括No14-18,由小型m染色體組成;第四組,包括Nos.19~28,由小型t染色體組成。與小鯢屬其他物種相比,中國(guó)小鯢核型與具染色體數(shù)為2a=56的類群核型大致相同,差異出現(xiàn)在染色體分組和相應(yīng)染色體著絲點(diǎn)類型上。關(guān)鍵詞:中國(guó)小鯢;核型;小鯢屬中圖分類號(hào):Q959文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0250-3263(2009)0412504The Karyotype of Hynobius chinensisQING Li-Yand2 CHEN Qin ZENG Xiao-Mao WANG Yi-Ding D(a College of Life Sciences, Sichuan Normal Uninersity, Chengdu 610101:@2 Chengdu Institute of Biology, the Chinese Academy of Sciences, Chengdu 610041, China)Abstract: Hynobius chinensis was re-discovered by Wang et al. from the type locality indescription, which proves that H. chinensis is a true Hynobius species. In this paper, the karyotype of H.chifrom the type locality was described by using embryos and staining with Giemsa. The results indicated that allindividuals had a diploid number of 56 chromosomes and can be divided into four groups: the first group containedlarge biarmed m, sm, st chromosomes( Nos 1-9): Nos 10-13 composed the second, medium-sized group whichcontained m and sm chromosomes; the third group was composed of 5 pairs of metacentric chromosomes(Nos 1418); the fourth group included 10( Nos 19-28 )unarmed microchromosomes. The results indicated that thekaryotype of H. chinensis was similar to that of the other species with 2n= 56 chromosomes. Although there were alstype and grouping, the diploid chromosome number is not changedKey words: Hynobius chinensis中國(guó)小鯢( Hynobius chinensis)是 Gunther但存在較大的形態(tài)差異,并以采自浙江義烏大1889年依據(jù)Prat在中國(guó)湖北宜昌采到的兩號(hào)陳及楂林的標(biāo)本訂立新種義烏小鯢(H標(biāo)本描述的新種。此后超過(guò)100年的時(shí)間 biwaensis)),將浙江義烏、鎮(zhèn)海、蕭山、溫嶺在內(nèi)里,均未在模式產(chǎn)地再發(fā)現(xiàn)過(guò)中國(guó)小鯢標(biāo)本,致使宜昌中國(guó)小鯢的存在成為疑問(wèn)2。此中國(guó)煤化工3m0.080)同學(xué)者曾先后報(bào)道中國(guó)浙江義烏、鎮(zhèn)海、蕭山和dH溫嶺等地發(fā)現(xiàn)中國(guó)小鯢。蔡春抹等“認(rèn)為浙CNMHG;研究方向:兩棲爬行江地區(qū)的標(biāo)本雖與中國(guó)小鯢的原始描述相似,動(dòng)物細(xì)胞遺傳學(xué); E-mail: qingly@cb.,cn收稿日期:2008-1218,修回日期:2009-0427126動(dòng)物學(xué)雜志 Chinese Journal of Zoolog.44卷的小鯢屬動(dòng)物指認(rèn)為該種的分布區(qū)。但該新種充小鯢屬核型資料,并為中國(guó)小鯢及其相關(guān)的的有效性并未得到廣泛的認(rèn)同,部分學(xué)者認(rèn)為系統(tǒng)學(xué)研究提供細(xì)胞遺傳學(xué)的佐證。義烏小鯢應(yīng)是中國(guó)小鯢的同物異名。此后,1材料與方法有關(guān)中國(guó)小鯢的研究由于沒(méi)有采到地模標(biāo)本而停滯不前。2005年王熙等在相隔116年后,11材料以2007年2月采自湖北宜昌的中在中國(guó)小鯢的模式產(chǎn)地湖北宜昌高家堰采得標(biāo)國(guó)小鯢活體胚胎為實(shí)驗(yàn)材料。胚胎分別來(lái)自于本共22號(hào),經(jīng)與中國(guó)小鯢全模標(biāo)本的描述比3對(duì)卵袋。由于小鯢屬每雌鯢一次產(chǎn)卵袋較表明與中國(guó)小鯢的形態(tài)特征一致,故湖北宜對(duì)1),故可以確定本實(shí)驗(yàn)所取材料來(lái)自于3個(gè)昌中國(guó)小鯢的有效性已不容質(zhì)疑。不同的母本。中國(guó)小鯢地模標(biāo)本的再次發(fā)現(xiàn),為展開其細(xì)1.2方法參照曾曉茂等的方法并稍加改胞遺傳學(xué)研究提供了契機(jī)。相關(guān)小鯢屬核型研進(jìn),選擇發(fā)育至尾芽期的胚胎,在生理鹽水中剪究,已有20余種的核型報(bào)道,部分物種深入到了破卵膠囊使胚胎游離,后將胚胎置于05%的秋種下居群。中國(guó)大陸現(xiàn)記載物種東北小鯢水仙素中,18℃左右培養(yǎng)24-96h;用刀片將胚(H. leechii)、安吉小鯢(H. amjiensis)…、掛胎卵黃部分除去置于少量低滲液(生理鹽水蒸榜山小鯢(H. guabangshanensis))、貓兒山小鯢餾水=1:15)中,用巴氏滴管將胚胎搗碎,低滲(H. maoershanensis)y2、義烏小鯢(H, yiuuensis)25min;低滲后以固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)均有報(bào)道。此外,“中國(guó)小鯢”福建武夷山標(biāo)本固定兩次后滴片; Giemsa染色。核型見于1997年,由于未能捕獲成體標(biāo)本,觀察中期分裂相39個(gè),確定中期二倍體染實(shí)驗(yàn)材料源自胚胎。迄今,福建武夷山“中國(guó)色體數(shù)。選取5個(gè)較好的中期分裂相,用 Leica小鯢”的分布記載于Pope、蔡明章等、費(fèi)梁DMRA2顯微鏡對(duì)分裂相放大照相,并對(duì)染色體等3-),然而由于缺乏成體標(biāo)本,福建武夷山進(jìn)行測(cè)量統(tǒng)計(jì)。染色體分類按1964年Lwan的的小鯢屬物種是否為中國(guó)小鯢仍存疑問(wèn)。標(biāo)準(zhǔn)劃分。換言之,福建武夷山的“中國(guó)小鯢”核型并非真正意義上的中國(guó)小鯢核型?；诖?本課題組2結(jié)果于2007年初在模式產(chǎn)地采集了中國(guó)小鯢的成中國(guó)小鯢的二倍體染色體數(shù)為56(表1)體及卵袋標(biāo)本,進(jìn)行了核型分析,旨在完善和補(bǔ)28對(duì)染色體按大小和形狀可以分為4組(圖nc(《).|a中國(guó)煤化工CNMHG圖1中國(guó)小鯢的核型【×630Fig. 1 The karyotype of Hynobius chiensis卿立燕等:中國(guó)小鯢的核型1271):第1組為大型雙臂染色體組(Nos.1~9),包果表明,前者與后兩種小鯢的卵袋形態(tài)差異明括5對(duì)中著絲點(diǎn)染色體( metacentric chromosome,顯。染色體核型比較分析的結(jié)果與費(fèi)梁等的卵m)(Nos.1,2,3,6,9),3對(duì)亞中著絲點(diǎn)染色體袋比較結(jié)果較為一致。這些差異水平所代表的( submetacentric chromosome,sm)(Nos.5,7,8),1福建武夷山產(chǎn)小鯢達(dá)到的分化程度,尚須獲得對(duì)亞端著絲點(diǎn)染色體( subtelocentric chromosome,成本標(biāo)本,并借助其他方面的證據(jù)方可討論。st)(N.4);第二組為中型雙臂染色體組(Nos衰1中國(guó)小鯢的染色體數(shù)據(jù)10~13),包括1對(duì)m(No.13),3對(duì)sm(Nos.10Table 1 Chromosome characteristics of12);第三組為小型中著絲點(diǎn)染色體組,為Hynobius chinensisNos14~18;第四組為小型端著絲點(diǎn)染色體染色體號(hào)數(shù)相對(duì)長(zhǎng)度臂比著絲點(diǎn)位置組,包括Nos.19~28,10對(duì)端著絲點(diǎn)染色體Relative length Arm ratio Centromere position(telocentric chromosome, t)11.59±0.121.25±0.189.67±0.361.25±0.203討論8.08±0.37129±0.157.44±0.453.66±0.26在分類史上,中國(guó)小鯢的早期分布記載為7.14±0.392.40±0.19湖北宜昌(模式產(chǎn)地)、浙江地區(qū)及福建武夷6.76±0,411.49±0.126.41±0.442.37±0.23山3。后來(lái),部分學(xué)者將浙江地區(qū)記載的中國(guó)5.60±0,462.09±0.20小鯢改訂為義烏小鯢,另一部分學(xué)者則認(rèn)為5.51±0.481.24±0.10義烏小鯢不成立。本文將中國(guó)小鯢地模標(biāo)本4.47±0472.08±0.253.85±0452.15±0.23核型與浙江鎮(zhèn)海的義烏小鯢核型相比較,前2.85±0.372.29±0.27者No.7為sm,后者為m;前者Nos.2,3,11分o1234562.72±0.451.23±0.18別為m,m,sm,后者分別是msm,m/sm,sm/st,表2.13±0.341.22±0.161.70±0.231.22±0.05明二者間存在較明顯的差異。另外,本文作者1.39±0.341.29±0.23等對(duì)中國(guó)小鯢模式產(chǎn)地湖北宜昌標(biāo)本與義烏小03±0.421.26±0.24鯢模式產(chǎn)地浙江義烏大陳的標(biāo)本進(jìn)行了線粒體0.57±0,20122±0.122.66±047DNA細(xì)胞色素b基因序列、COl基因序列分析,1.92±0.37結(jié)果表明二者間亦存在明顯遺傳差異(待發(fā)表)。核型與分子證據(jù)均支持義烏小鯢為有效1.16±0.230.95±0.14物種。0.79±0.08福建武夷山的“中國(guó)小鯢”因缺乏成體標(biāo)8901234570.70±0.08本而無(wú)明確定論。將中國(guó)小鯢地模標(biāo)本核0.60±0.04型與福建武夷山“中國(guó)小鯢”標(biāo)本核型相比較,0.56±0.07前者Nos.5,19分別為sm和t,后者均為m;福m:中著絲點(diǎn)染色體;sm:亞中著絲點(diǎn);睛t:亞端著絲點(diǎn)染建武夷山者核型較之地模核型多出一對(duì)雙臂染色體;t:端著絲點(diǎn)染色體,色體。再將福建武夷山者核型與義烏小鯢核型m: Metacentric chromosome; am: Submetacentric chromosome;相比較,前者N0s.5,7,19分別為m,sm和m,Sutelocentric chromosome: t Telocentric chromosome后者為sm,m和t;福建武夷山者核型較之義中國(guó)小鯢與中國(guó)大陸已知核型的小鯢相烏小鯢核型多出一對(duì)雙臂染色體。由此,福建比中國(guó)煤化工同,為56條,分武夷山者核型與中國(guó)小鯢和義烏小鯢核型間均組情CNMHG多數(shù)相應(yīng)的染色存在明顯的差異。費(fèi)梁等曾將武夷山的小體類型一致,表明中國(guó)小鯇在核型上同小鯢屬鯢卵袋同浙江另兩種小鯢的卵袋進(jìn)行比較,結(jié)物種具有同源性。此外,也存在差異,表現(xiàn)在相128動(dòng)物學(xué)雜志 Chinese Journal of Zoo0bg44卷應(yīng)染色體對(duì)著絲點(diǎn)類型、具體分組上,但其差異兩棲爬行動(dòng)物學(xué)報(bào),1985,4(2):109-114未涉及到染色體數(shù)目的改變,表明臂間倒位式5】趙爾多,A紅K中國(guó)小規(guī)100年,四川動(dòng)物,19,.8的染色體重組是引起著絲點(diǎn)類型和染色體分組(2):18-20[6]王熙,吳敏,張勇等,中國(guó)小鯢在116年后再發(fā)現(xiàn)及其差異的主要原因。有尾類核型進(jìn)化主要途徑是描述.四川動(dòng)物,2007,26(1)由染色體數(shù)多的二型不對(duì)稱核型通過(guò)著絲點(diǎn)融[7]khms, Kuro-o M,Ibec. Cytogenetic and evolution of合、臂間倒位等過(guò)渡到染色體數(shù)少的單型對(duì)稱hynobiid salamanders. In: Green D M, Sessions s K eds型(m型)1,中國(guó)小鯢同中國(guó)大陸的安吉小Amphibian Cytogenetics and Evolution. San Diego: Academi鯢…、貓兒山小鯢2、掛榜山小鯢及義鳥1991,67~888]曾曉茂,費(fèi)梁,葉昌媛等.三種小鯢和極北鯢的核型小鯢(浙江鎮(zhèn)海)相似,有較少的m而有較多動(dòng)物學(xué)研究,1997,18(3):341-345的t,保留了相對(duì)較多的原始核型特征;而東北[9]馬連第,高意,馬德坤,千山產(chǎn)東北小鯢的染色體組小鯢(遼寧桓仁)和福建武夷山的“中國(guó)小型.動(dòng)物學(xué)雜志,1992,27(6):35~37鯢”則有較多的m和較少的t,具更進(jìn)化的核10 tebe C, Gu H Q, Ruan R W,“a. Chromosom型特征。Hynobius chinensis Gunther and Hynobius amjiensis Gu from有關(guān)小鯢屬核型,日本學(xué)者有大量的研究China, and comparison with those of 19 other hynobiusspecies. Zoological Science, 1998, 15: 981-987報(bào)道。根據(jù)二倍體染色體數(shù)目,日本學(xué)者將分(]xmgL.ingL,ZgxM,da. Karyotype of布于日本、韓國(guó)、中國(guó)臺(tái)灣的小鯇分為三組:第Hynobius guabangshanensis( Urodela: Hynobiidae). Sichuan組2n=56,第二組2n=58,較之第一組核型多出一對(duì)微小染色體對(duì),第三組僅有一個(gè)物種[12] Qing L Y, Wang Y D, Zeng XM, et al. The karyotypeof滯育小鯢(H. retardates),2n=40。日本學(xué)者經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),小鯢屬各物種基本可歸屬于池塘,2009,18(3);129-135和高山溪流兩大生態(tài)型,前者主要生活在低山[13] Pope H C. Notes on Amphibians from Fukien[=Fan]區(qū)并在池塘中產(chǎn)卵,后者生活在中、高山區(qū),主Hainan, and other parts of China. Bulletin of the American要在溪流中產(chǎn)卵。有意義的是,上述小鯢屬M(fèi)useum of Natural History, 1931, 61(8): 379-6l1的核型分組與其生態(tài)型大致吻合,即池塘型物[14]蔡明章,張健,林丹軍,中國(guó)小鯢胚胎發(fā)育的初步觀察.兩棲爬行動(dòng)物學(xué)報(bào),1985,4(3):177~種多具2m=56核型而溪流型物種多具2n=58(s費(fèi)梁,胡淑琴,葉昌媛等,中國(guó)動(dòng)物志兩棲綱(上卷)核型(。中國(guó)小鯢也不例外,其核型2m=56,總論蚓螈日有尾目.北京:科學(xué)出版社,2006,143-生態(tài)特征基本與日本的池塘類型相符。[16]費(fèi)梁,葉昌媛,江建平等,中國(guó)兩棲動(dòng)物檢索及圖解成都:四川科技出版社,2005,30致謝感謝本室劉志君老師幫助采集標(biāo)本感[17] Levan A, Fredga K, Sandberg A A.Nomenclature for謝張淑君女士在實(shí)驗(yàn)技術(shù)上的指導(dǎo)。centromeric position on chromosomes. Hereditas, 1964, 52201~220參考文讞[18]卿立燕,王一丁,曾曉茂,小鯢屬染色體研究進(jìn)展.兩棲爬行動(dòng)物學(xué)研究,2007,11:251[1] Gunther A. Third contribution to our knowledge of reptiles and[19] Morescalchi A. Comparative karyology of the amphibia. Bollfishes from the Upper Yangtze- Kiang[ Chang Jiang river]Zoology,1971,38:317~320Annals& Magazine of Natral History, 1889, 6(4): 218-229[2]趙爾宓胡其雄中國(guó)西部小鯢科的分類與分布,兼記201sm01. A MonographJapanese Urodeles. Osaka:新屬.兩棲爬行動(dòng)物學(xué)報(bào),1983,2(2):29~35Nippon Shuppan-sha[21][3] Adler K, Zhao E M. Studies on hynobiid salamanders, with中國(guó)煤化工description of a new genus, Asiatic Herpetological ResearchCNMHGa). Zoological Science1990,3:37~45[4]蔡春抹.浙江有尾類兩棲動(dòng)物及小鯢屬一新種描述805-807