表2含 Urease流出液成分分析CnA經(jīng) Sephadex G-50親和層析后比活提高流出液體積蛋白質(zhì)濃度66.13倍,比活達6976.83IUmg,得率為80.68%純度達到電泳純。220.212.5(onA純度鑒定純化樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳得條蛋白帶,表明所分離純化的樣品已達1B.B.L. Agrawal,eta. pacific binding of concanavalin A到電泳純。rosslinked dextran gels. Biochem. J, 1965, 96: 26ConA分離純化結(jié)釆見表3。2中山大學(xué)生物系生化微生物學(xué)教研室,生化技術(shù)導(dǎo)論表3CoMA分離純化結(jié)果北京:人民教育出版社,1978:2053 B B L. Agrawal, et al. Isolation of concanavalin A by specific分離步驟白質(zhì)得率CH得率比活力純化倍數(shù)adsorption on cnss linked dextran gel. Biochem Biophys.ActH洋刀豆豆子100105.50.00緩沖液提取68.859.724 Irvin E. Liener. 'The photometric determination of the h:mag微濾65.2685,09137.561.30glutinating activity of soyin cnide soybean extracts. Arch親和層析686976.8366.13Biochem. biophys. 1955. 54: 223洋刀豆豆子屮CnA經(jīng)緩沖液提取,微濾澄清5蔣傳葵,等.I縣酶的活力測定,上海:上?？萍汲霭嫔?1982:117后,經(jīng)兩次 Sephadex G50親和層析,純化的ConA血6 Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation凝比活提高66.13倍,得率80.68%。of microgram quantities of prolein utilizing the principle of3結(jié)論teinrdye binding Annal. Biochem 1976, 72: 248筆者用 Sephadex G50親和層析技術(shù)對洋刀豆7張業(yè)旺,等,超濾處理刺五加提取液.水處理技術(shù),提取液中ConA和 Urease進行了分離并對ConA進行2001,27(2):99了純化。Dhubis M Colorimetric method for determination of sugar and re-通過對提取液微濾預(yù)處理,料液的澄清度得到lated substance. Anal. Chem. 1956, 28: 350明顯提高,但ConA和Urae的活性分別損失9 Andrew C.pean.l. Serun protein electrophoresis in acry-6.20%和9.50%,蛋白質(zhì)損失5.21%mide gel: pattens from nomal human subjects. Scit預(yù)處理后提取液,經(jīng)過 Sephadex G-50親和層析147:145l柱,可使提取液中ConA和 Urease得到完全分離(2002-07-21收稿)白芍超聲提取工藝研究R33 A廣州陳李濟藥廠(5I0290)林慶義汪世瓊摘要目的:探討用超聲提取法提取白芍中芍藥甙的工藝條件,為超聲提取在業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用積累參數(shù)方法:設(shè)計正交試驗,對白芍的超聲提取工藝進行研究,確定最佳提取藝條件。結(jié)果:最佳T藝為川1-2m粒藥材,加10倍量水超聲提取兩次,每次90mina關(guān)鍵詞白芍芍藥甙正交試驗超聲提取白芍為毛茛科植物芍約 Pannonia lactifera Pall.劑,從而提高提出率,縮短提取時間,并且免去了高的十燥根,是最常用的中藥材之一,其主要有效成分溫對提取成分的影響。丙此超聲波作為提取的一種為芍藥甙、丹皮酚等。文獻報道白芍傳統(tǒng)水煎煮.手段,具有良好的應(yīng)用前景。本實驗以白芍為研究藝中,芍藥甙損失率高達40%以上,白芍中芍藥對象,以其有效成分芍藥甙為指標(biāo),高效液相色譜法甙在生產(chǎn)過程中含量下降主要是受熱帔壞,因此,工測定其含量,對超聲提取白芍中芍藥甙的藝進行藝過程中應(yīng)盡量避免長期高溫受熱。研究表明,利出立中的應(yīng)川積累參數(shù)。用超聲波產(chǎn)生的強烈振動高的加速度、強烈的空化中國煤化工效應(yīng)、攪拌作用等,都可加速藥物有效成分進入溶CNMHG司,經(jīng)鑒定符合中中藥材第25卷第10期2002年10月國藥典(1995年版·部)白芍項下規(guī)定。芍藥甙對表2正交試驗結(jié)果照品,購自屮國藥品生物制品檢定所。儀器: Shimu-實驗號ABCdaz lc10AD色譜儀, Shimudaz Lc-10AD泵,SPDD)含量(%)0A紫外檢測器(日本島津),CQX2536型超聲波清1.3650洗器(上海必能信超聲有限公司)。試劑:甲醇為色譜純(天津協(xié)和試劑));其它試劑均為分析純。2.31422方法與結(jié)果2.1測定方法2.1.1色譜條件:色譜柱 Turner C18(4.6×200mm1222335山l);流動相:甲醇-水(40:60);流速:Imd/min;檢測23131223312232.18641.3273波長:230mm;柱溫:37℃2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線:配制系列不同濃度的芍藥甙標(biāo)K15.83055.1569402145209準(zhǔn)溶液各進樣10d,以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo),K25.46435.6685.82005.31峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(在18.8-94四/mnl485.35966.3495.599范圍內(nèi)為一直線),回歸得方程:A=93457.987X-H0.94200.50992.32057479.508(r=0.999)。表3方差分析表2.13樣品含量測定:精密量取樣品液各5m加方差來源離差平方和s自由度均方F適量甲醇,振搖,濾過,用甲醇定容至25m,用微孔A0.16330.081722.07作濾膜濾過,照2.1.1所述色諧條件分別進樣10μl,測B043920.02205.93P>0.05得芍藥甙峰面積,計算出樣品中芍藥甙含量C20.49)133.5P<0誤差e20.003722.1試驗因素水平:主要考察提取時間藥材粒和106度、加水量對芍藥甙提取率的影響,方案見表1。32從表3可以看出藥材粒度對結(jié)果影響最大表1試驗因素水平表超聲時間對結(jié)果也有顯著影響,從經(jīng)濟、省時的塬則因素考慮,生產(chǎn)上應(yīng)把藥材的粒度作為關(guān)鍵因素考察。水平A超盧時問B加水量加水量對提出率沒有明顯的影響提取時加10倍量倍)C藥材粒度空白)水是最合適的。3.3本研究旨在對超聲提取的應(yīng)用進行數(shù)據(jù)積5~7累,文獻報道超聲波適川廠提取含生物堿、甙類的藥材。因白門芍中芍藥甙受熱易分解,而超聲提取不需222工藝過程:取白芍2kg9份,分別按I4(34)加熱,故有可能減小芍藥甙的損失,從而可提高藥材正交表試驗,超盧提取兩次,合并提取液,濾過,定的利用率。容得1-9號樣品液,測定芍藥甙含量,結(jié)果見表34超聲提取的影響因素很多,也十分復(fù)雜、表3時間和實驗條件,對超州波功率頻率、提取次數(shù)3討論劑和溫度等因素未作考察,尚待進一步研究。3.1各因素對試驗結(jié)果的影響次序為C>A>B,在木實驗條作下最佳提取條件為A1B2C3,即用1~參考文獻nn粒度的約材,加10倍量的水超聲提取兩次,每次1黃夏敏,等,白芍在中成藥生產(chǎn)過程中芍藥甙含量變化90min。設(shè)定D為空項,R值較小,說明A、B、C三者的研究,中藥新藥與臨床藥理,19%,9(4):236無交互作用。2002-07-17收稿中國煤化工CNMHG中藥材第25卷第10期200年10月