152●Foreign Medical Sciences Section on Pharmacy 2002 Jun; 29(3)聚乙二醇化干擾素治療慢性丙型肝炎駱曉梅,彭濤編譯王林校(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所,北京100850)摘要:將聚乙二醇(PEG)化學(xué)連接于治療蛋白質(zhì)能增加血漿半衰期、減少毒性、增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性和溶解性。PEG 結(jié)合蛋白質(zhì)通過減少免疫系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)和攻擊外源物的能力以增加其治療效果。由活化的PEG單體與蛋白質(zhì)偶聯(lián)制備PEG蛋白結(jié)合物,這種偶聯(lián)策略有多種選擇。PEG 化干擾素-a用.于治療慢性丙型肝炎病毒性感染已進(jìn)行了大量臨床研究工作,并獲得肯定的療效。已有3種PEG蛋白結(jié)合物被FDA批準(zhǔn),臨床應(yīng)用于治療嚴(yán)重的復(fù)合性免疫缺陷病和治療各種白細(xì)胞增多癥。關(guān)鍵詞:慢性丙型肝炎;干擾素-a; 聚乙二醇結(jié)合物中圖分類號: R978.7; R512.6* 3文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A文章編號: 1001-0971(2002)03-0152-031聚乙二醇蛋白質(zhì)結(jié)合物結(jié)合的PEG單體的屏障能力可以減少或除去蛋白聚乙二醇(PEC)結(jié)合物是為增強(qiáng)治療蛋白的釋的免疫原性。但對蛋白結(jié)構(gòu)認(rèn)識的不足和對PEC藥于20世紀(jì)70年代得到了發(fā)展。PEG 結(jié)合物在藥單體位點(diǎn)的選擇性不高有可能會阻礙蛋白質(zhì)免疫原代動力學(xué)和藥效學(xué)方面的改善促進(jìn)了腫瘤學(xué)和傳染性的除去。-般的途徑是將PEG單體與蛋白表面病學(xué)在治療領(lǐng)域的應(yīng)用。無論蛋白和非蛋白分子都賴氨酸連接可得到期望的結(jié)果。與此特性相似，能與PEG連接,但研究的重點(diǎn)主要集中于PEG蛋白PEG單體的屏障效應(yīng)可使PEG連接蛋白水解敏感結(jié)合物。PEG 結(jié)合物通過增加蛋白質(zhì)的分子量,減性降低,在使用高分子量分枝結(jié)構(gòu)的PEG分子時，少了藥物的排泄,從而減少了服藥頻率。結(jié)合后熱這些效應(yīng)特別強(qiáng)。將PEG單體與小分子蛋白質(zhì)連穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性的提高,促進(jìn)了蛋白質(zhì)半衰期接可形成一個更大的PEG蛋白結(jié)合物,它將減少腎的延長。PEG 結(jié)合物還可減少蛋白質(zhì)的免疫原性并臟的清除率。上述這些性質(zhì)均涉及增加了蛋白質(zhì)的保護(hù)其免于蛋白分解而降解。由于減少了因每日多循環(huán)半衰期。PEG蛋白在體內(nèi)還表現(xiàn)出分布的變次給藥所致血藥濃度的波動,藥物的毒性得到降低?；?，皮下注射時其吸收取決于PEG單體的分子量。多年來,在食物、化妝品和藥物領(lǐng)域應(yīng)用的經(jīng)驗(yàn)已確證PEG無毒。PEG具有低免疫原性已得到許2聚乙二醇結(jié)合物的化學(xué)多研究的支持。一個有趣的例子是兔在極端的條件將PEG單體與蛋白質(zhì)偶聯(lián),首先需要活化的下產(chǎn)生了抗PEG抗體。但此免疫應(yīng)答無臨床意義,PEG,即將末端羥基轉(zhuǎn)變?yōu)橐子谂c同蛋白表面官能因?yàn)闆]有實(shí)例表明人注射PEC結(jié)合蛋白可產(chǎn)生抗團(tuán)反應(yīng)的基團(tuán)。最常用的方法是將PEG單體上的PEG抗體。研究了不同分子量PEG單體的清除作官能團(tuán)活化為可以與賴氨酸和N端氨基反應(yīng)的官用,結(jié)果表明PEG的清除不涉及結(jié)構(gòu)的改變,其清能團(tuán)。典型的是使用單官能團(tuán)PEG(mPEG),因?yàn)檫@除率與分子量成比例。其中低于約20 ku 分子量的種聚合物能抵抗交聯(lián)和聚合。分子經(jīng)腎臟清除，由尿液排出。更高分子量的PEG賴氨酸取代以及PEG分子量的不均勻性在分子經(jīng)腎臟清除速度很慢,隨著PEG分子量的增PEG蛋白藥學(xué)中很重要。通常需要建立一種特殊的加，肝臟的清除速度亦將增加。藥學(xué)方法進(jìn)行測定和復(fù)核。但在某些情況下,可以PEG蛋白結(jié)合物的性質(zhì)與許多天然聚合物相減少或除去取代位點(diǎn)的不均勻性。中國煤化工主要問題是mPEG中似，因此可展現(xiàn)出許多期望的特性,所有這些作用都依賴于結(jié)合PEG 的單體的分子量。常觀察到PEG經(jīng)常MHCNMHGH)。一些制造商生連接對小分子藥物的溶解度具有顯著影響。共價鍵產(chǎn)出含低比率二醇的mPEG,但這些雜質(zhì)總是存在。二醇的含量高達(dá)10% ~ 15%。二醇的活化導(dǎo)致雙收稿日期:2001-12-28官能團(tuán)的混雜,它可產(chǎn)生交聯(lián)和聚合。二醇的出現(xiàn)國外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊2002 年6月第29卷 第3期153●來自于催化環(huán)氧乙烷聚合生成mPEG過程中的水污限的分布體積。這使得給藥方式更為簡便(一周1染,在制備高分子量mPEG中即便使用更低濃度的次,非修飾的IFN-a為一周3次)。現(xiàn)已獲得PEG(40甲氧化物作為誘發(fā)劑，在這個反應(yīng)中水污染和二醇ku)IFN-2a的臨床結(jié)果。曾進(jìn)行了開放式和平行服的形成依然是非常嚴(yán)峻的問題。而且由于二醇鏈可用劑量的全球多中心II期臨床試驗(yàn)。531 名患者隨以在任何一端連接,因此污染的二醇比所期望獲得機(jī)每周1次給予PEG(40 ku) IFNa-2a ,劑量為180的mPEG具有更高的分子量。μg,持續(xù)48周(n=267)或給予每周3次非修飾的PEG結(jié)合物化學(xué)的-一個特征是二醇和其產(chǎn)生的IFNa-2a,每次6 MIU持續(xù)12周后改為每周3次每次雙官能團(tuán)的PEG是不可除去的。因此在終產(chǎn)品中3 MIU再持續(xù)36周(n=264)。結(jié)果顯示,在48周.存在一些蛋白交聯(lián)相應(yīng)產(chǎn)物需設(shè)法除去。另一種可PEG(40 ku) IFNa-2a與非修飾的IFNa-2a 相比較,前選擇的方法是純化活化的PEG試劑并除去雙官能者表現(xiàn)出較強(qiáng)的病毒學(xué)應(yīng)答反應(yīng)(69%對28%,P=團(tuán)物質(zhì)。這種途徑的優(yōu)點(diǎn)是能減少昂貴的蛋白質(zhì)的0.001),在72周有持續(xù)的病毒學(xué)應(yīng)答反應(yīng)(39%對損失。19%,P=0.001)。在271名慢性HCV患者和組織活檢為肝硬化或橋接纖維化的患者中進(jìn)行了另一項(xiàng)3聚乙二醇化干擾素-a開放隨機(jī)的平行劑量臨床研究。病人隨機(jī)接受48慢性傳染性丙型肝炎病毒(HCV)感染是- -種流周IFNa-2a每周3次每次3MIU的治療(n = 88)或每行廣泛的疾病,可致肝硬化和肝細(xì)胞癌。干擾素周1次PEG(40 ku)IFNa-2a ,劑量為90 μg( n = 96)或(IFN)-a蛋白已經(jīng)廣泛用于治療HCV ,但單用IFN180μg(n=87)的治療,隨后是24周的非治療期。.治療僅有少量患者產(chǎn)生持久的作用。這可能是由宿接受劑量為180 pg PEG(40 ku) IFNa-2a組治療的患主的多樣性、病毒因素以及IFN不良的藥代動力學(xué)者到48周結(jié)束時44%有病毒學(xué)應(yīng)答反應(yīng)( P=因素所造成。尤其是單次皮下給予IFN后血清濃度0.001,與IFNa-2a相比),而且30%的患者在72周有在24h以內(nèi)就降到檢出限以下。這樣即使治療方持久的病毒學(xué)應(yīng)答反應(yīng)(P=0.001,與IFNa-2a 相法需要每周皮下注射3次IFN,但病毒在藥物沒有比)。在88名接受IFNa-2a每周3次每次3MIU治處于治療有效的濃度時還是在復(fù)制。IFN 加利巴韋療的患者中,在48周僅14%有病毒學(xué)應(yīng)答反應(yīng),至林治療HCV可以增加持久病毒學(xué)應(yīng)答的患者數(shù)目72周8%有持續(xù)的病毒學(xué)應(yīng)答反應(yīng)。.(從38%增至43%)。但這種應(yīng)答的增加伴隨著高眾所周知,IFN和抗病毒藥物利巴韋林聯(lián)合治不良反應(yīng)的發(fā)生率,使得- -些患者終止了治療。療比單獨(dú)用IFN治療會提高療效。因此希望提高療IFN的PEG化改善了藥代動力學(xué)特性,因此藥效而將PEC(40 ku)IFNa-2a與利巴韋林合用治療,這效學(xué)也相應(yīng)得到了提高。曾臨床評價了5 ku分子引起人們的興趣。這類臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行之中,并量的mPEG交聯(lián)的1IFNa-2a治療慢性HCV患者的效且在20名患者中已經(jīng)完成PEC(40 ku)IFNa-2a 加利果。每周給予該藥的劑量分別為15,45,90和135巴韋林治療的一項(xiàng)小規(guī)模試驗(yàn)。在20名患者中9puy,沒有發(fā)現(xiàn)比每周用300萬國際單位(MIU)的未修名觀察到持續(xù)的病毒學(xué)和生物化學(xué)應(yīng)答反應(yīng)。感染飾IFNa-2a有增強(qiáng)的效果。最近對由分子量為40HCV基因1型的16名患者中5名有持續(xù)的病毒學(xué)ku的分枝結(jié)構(gòu)的PEG與IFNa-2a交聯(lián)而成的應(yīng)答反應(yīng),并且所有4名感染其他基因型HCV的患PEGIFNa-2a進(jìn)行了臨床評價。這些試驗(yàn)的的結(jié)果者也產(chǎn)生了上述反應(yīng)。令人振奮。此外最近歐盟和美國批準(zhǔn)- -種分 子量為PEG使用mPEG-SC12000為原料制備分子量1212 ku的線性PEG化的IFNa-2b 用于HCV治療。ku的線性PEG化IFNa-2b技術(shù)( PEG IFNa-2b)已獲研究還表明,分子量為40ku的PEG化IFNa-2a得專利。這項(xiàng)工作的特別之處是,在低pH(約pH=可能具有期望的藥代動力學(xué)特征和活性。特別是預(yù)5)條件下經(jīng)由一個可水解的不穩(wěn)定鏈與組氨酸偶聯(lián)測其穩(wěn)態(tài)血藥濃度為常數(shù)。實(shí)際上,試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)中國煤化工的結(jié)果表明，PEG化一周1次的皮下注射血藥濃度幾乎不變。用PEG2-IFNaYHCNMHG的IFNa2b每周給藥NHS40000進(jìn)行PEG化后與原始的IFNa-2a 相比，腎3次進(jìn)行比較,在最佳劑量為1.0 μg*kg~ '時,在PEG廓清率減少到1%，清除半衰期為77 h,原為9 h?；疘FNa-2b組297名患者中25%有持續(xù)的HCV清除PEG(40 ku)IFN-a經(jīng)皮下給藥顯示出持續(xù)吸收和有作用, 而在IFNa-2b組303名患者只有12%顯示出154●Foreign Medical Sciences Section on Pharmacy 2002 Jun; 29(3)持續(xù)的病毒清除作用(P <0.001)。最近報(bào)道了涉度復(fù)合性免疫缺陷病(SCID),這種疾病與一種腺苷及1530名患者的Ml期臨床試驗(yàn)結(jié)果,表明PEG脫氨基酶( ADA)遺傳缺陷病有關(guān)。在培加酶出現(xiàn)之IFNa-2b 組對病毒應(yīng)答反應(yīng)比IFNa-2b 與利巴韋林:前,SCID患者用含有ADA的紅細(xì)胞進(jìn)行部分交換合用組高,雖然兩組差值僅為7%。輸血治療。這些換血療法使得患者處于鐵負(fù)荷過多基于所得試驗(yàn)數(shù)據(jù),很明顯PEG 化的IFNa-2b和與靜脈注射有關(guān)的病毒性感染的危險(xiǎn)中。培加酶和PEG(40 ku)IFNa-2a 與未修飾的IFNa-2b 和IFNa-每毫升中ADA活性大約比紅細(xì)胞高1800倍,因此2a相比分別具有更好的效果。具有較高分子量和藥物產(chǎn)生的ADA活性濃度比部分換血高。培加酶分枝結(jié)構(gòu)的PEG化1FNa-2a 可能比較低分子量的可用于治療急性淋巴細(xì)胞白血病、急性成淋巴細(xì)胞PEG化IFNa-2b有更好的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)性白血病和慢性髓性白血病。天然的門冬酰胺酶化合質(zhì),每周1次給藥即可維持足夠的血清IFN濃度,這物與高變態(tài)反應(yīng)和縮短自身中性抗體半衰期的發(fā)展使得更多很難治療的患者也能獲得改善的持續(xù)應(yīng)答有關(guān),難以維持有效的血漿濃度。培加酶能減少酶反應(yīng)。尚需要在PEG(40 ku)IFNa-2a和PEC化IFNa-誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)傾向,這樣就允許對天然酶有高過2b之間進(jìn)行直接的臨床試驗(yàn)。已經(jīng)清楚的是,總體敏癥的患者接受培加酶治療而不產(chǎn)生過敏反應(yīng)。.上PEG結(jié)合物治療蛋白都是有益的,并且IFN的FDA還批準(zhǔn)了用于治療Kaposi肉瘤的PEG結(jié)合的PEG結(jié)合物在不斷增長的被診斷為HCV感染的人多柔比星脂質(zhì)體和用于肺部手術(shù)密封劑的PEC-丙群中有希望能夠增加治療的成功率。交酯~乙交酯-丙烯酸酯。尚有一些重要的PEG結(jié)合蛋白正處于臨床試驗(yàn)的最后階段,包括治療肢端肥4其他PEG藥物結(jié)合物大癥的PEC-生長激素受體拮抗劑、自由基清除劑、一些PEG蛋白結(jié)合物已被美國FDA批準(zhǔn)用于血液衍生藥物、抗腫瘤藥、心血管藥物和抗原藥物。臨床或臨床研究中。培加酶是1990 年批準(zhǔn)用于重預(yù)計(jì)某些將在近年得到批準(zhǔn)。人工病毒載體吳波'編譯仲伯華'王嘉璽2審校(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院1. 毒物藥物研究所，2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，北京100850)摘要:基因傳遞十分復(fù)雜,使用簡單的載體分子難以完成。模擬病毒的重要性質(zhì),設(shè)計(jì)合成多組分載體。有些解決方法,如遞送細(xì)胞錨定分子或正常功能的內(nèi)源性核輸入機(jī)制是直接拷貝自細(xì)菌和病毒的作用過程;另一些方法具有原創(chuàng)性,如由去污劑二聚體化進(jìn)行單分子基因組濃縮,或由質(zhì)子吸附作用引發(fā)核內(nèi)體的破裂,這些效應(yīng)是天然的細(xì)胞侵襲者所不具備的。所有這些功能組分有待裝配成一種獨(dú)特的超分子系統(tǒng),即“人工病毒”。關(guān)鍵詞:人工病毒;基因傳遞;合成多組分載體中圖分類號: Q782文獻(xiàn)標(biāo)識碼: A文章編號: 1001-0971(2002)03-0154-041簡介的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn),使數(shù)十億的基因拷貝中最多只有少數(shù)基因治療依賴于核酸載體。病毒的多樣性可以幾個能夠到達(dá)靶細(xì)胞核。滿足臨床上對基因傳遞的大多數(shù)要求。但病毒和宿主平行進(jìn)化,使外源性蛋白顆粒及受感染的細(xì)胞成2 DNA 濃縮中國煤化工雜的多階段過程,為免疫系統(tǒng)的有效靶位。合成的超分子載體,可以需要多AHC N MH心無- -例外地均設(shè)計(jì)不含有多肽,甚至帶有惰性的衣殼層,藉此逃避是陽離子多聚物,可以誘導(dǎo)DNA聚集。把線狀的多數(shù)的免疫識別。但是,不利的生物分布以及無效DNA分子轉(zhuǎn)變?yōu)榫o密的微粒,提高了化學(xué)和物理穩(wěn)收稿日期:2002-02-01定性。質(zhì)粒DNA被陽離子性的脂質(zhì)體或多聚物壓