<>本刊特稿<>科技圖向?qū)?011年第09期煤炭液化真菌的鑒定及其對煤炭的液化石開儀陶秀祥洪芬芬(中國礦業(yè)大學(xué)化工學(xué)院江蘇徐州221008)摘要]本文從土壤中篩選出一株具有液化煤炭能力的真菌,通過形態(tài)觀察、185rDNA鑒定并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,發(fā)現(xiàn)該茵為Hyprocrea屬。[關(guān)鍵聞]煤炭液化;真茵;篩選;鑒定;188rDNA煤炭微生物液化是由于具有常溫、常壓和反應(yīng)條件溫和等優(yōu)點,受到廣泛關(guān)注-1。然而,該項技術(shù)未能廣泛地在工業(yè)中應(yīng)用,其主要原因是微生物液化效率低明。本文主要從土壤中篩選出- - 株液化效果高. Hypocra loir tama157 (AB63714pHrpocreo ixi AH(FJ645728)的真菌,并對其進行18S rDNA鑒定。1.實驗材料與方法21| p600[54廠1.1培養(yǎng)基Trchoderme sp V12z 0HQ730130.1)1.1.1篩選培養(yǎng)基:撫順煤粉15g, KH,P0.0.1 g, KHP0,0.1 g27Trichodema aureouride stain T119 (HQ5969581)MgS04-7H2O 0.04g, (NH)SO4 1.0g, NaCl 0.1 g, CaClh 0.01 g, H2O50 Ceorichum asspsses solate T180 (FJ9382921)1000 mL,瓊脂20 g。oos1.1.2 液化培養(yǎng)基:采用SMA培養(yǎng)基或SMB培養(yǎng)基,其組成見參圖1真菌AH的系統(tǒng)發(fā)育樹考文獻[4]。Figure 1 Phylogenetic tree of strain AH1.2篩選過程.2.4煤炭液化研究土壤中含有各種各樣的微生物,實驗中對撫順西露天煤礦附近土在SMB培養(yǎng)基中進行煤炭液化研究,各密度級的液化率如表1壤、森林土壤枯枝敗葉中能液化煤炭的菌種進行篩選。菌種篩選分兩所示。次進行,首先，取土樣1 g,加入到帶玻璃珠的99 mL.去離子水中,即成表1真菌AH對不同密度級的撫順煤的液化率為10--2的稀釋液。吸取1mL稀釋液,均勻涂布到菌種篩選培養(yǎng)基上。Table 1 Liquefaction rate of different density coal放入28 C培養(yǎng)箱培養(yǎng)15d。將平板上長出的菌種,在無菌工作臺中,用滅菌的接種環(huán)挑取少量菌絲,進行劃線分離。密度/g*.cmr'殘煤/g液化率1%1.3菌種鑒定-1.30.99820.550444.86用試劑盒說明書的步驟將真菌AH的DNA提取出來，然后對18S1.3-1.51.03350.841818.55rDNA進行PCR擴增,再用瓊脂糖凝膠回收純化試劑盒(UNIQ-10)對1.5-1.71.04640.95358.88擴增產(chǎn)物中18S rDNA(800 kb)進行純化,接著進行克隆,最后將白色菌落送往.上海捷瑞生物工程有限公司對18S rDNA進行測序。利用1.19276.94BLAST對測序結(jié)果進行比對,并利用Clustal x及Mega 4.0對菌株進未分選煤1.0270 .0.855416.71行發(fā)育分析,并構(gòu)建出系統(tǒng)發(fā)育樹。由表可見,對于密度小于1.3g/em3的煤樣,灰分為3.33%,液化1.4煤炭液化研究采用SMB培養(yǎng)基進行煤炭液化研究,先接種,再加入- -定量的不率為44.86%,可見篩選的菌種具有較高的液化能力。同密度級撫順煤,數(shù)天后分別對殘留煤炭進行洗滌烘干溶煤殘留煤2.5液化產(chǎn)物分析粒。用加入的煤量減去殘留煤量,然后除以加人的煤量就得到液體液對煤炭生物液化產(chǎn)物的總離子流色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)譜圖比對,其可能的主要化合物的質(zhì)譜圖及其結(jié)構(gòu)式如圖2所示。圖中,油酸酰胺(化合采用agilent 6890 -5973N氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析液化產(chǎn)物的物7)是總離子流色譜圖中最大吸收峰所對應(yīng)的化合物。其次是十三酰胺(化合物3).13-二氨基-N1.N1-二丁基-N3-萘基丙烷(化合物8)和組成。2.結(jié)果與分析24,7-三硝基- 9H-芴-9-酮(化合物1)。同時,由圖2還可以證明,產(chǎn)物中也檢測到羧酸、酮、酯等結(jié)構(gòu),與紅外光譜分析的一-致。 此外,液化產(chǎn)2.1菌種篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn)有4種真菌能利用撫順煤作為生長碳源,其中真菌AH長得物中，芳香化合物以1-3個芳環(huán)的為主,并且在芳環(huán)上有取代基團。最旺盛,其菌落直徑為7.4cm,而對照培養(yǎng)基中菌落直徑僅為1.4cm。因此選用真菌AH作為撫順煤液化微生物。為研究真菌AH對煤炭的作用,將其接種到SMA培養(yǎng)基中,觀察其形態(tài)的變化。發(fā)現(xiàn)前期菌絲為白色,后期變綠。同時,將菌絲放在放大400倍的顯微鏡中觀察,以探索其菌絲形態(tài)產(chǎn)孢子情況等。形態(tài)上觀察,菌株的菌絲為對生分枝,白色透明。孢子梗尖端分生孢子,產(chǎn)生大量孢子。孢子呈球形,透明或半透明,無隔。從形態(tài)上判斷真菌H.lixiiAH為半知菌亞]叢梗孢目木霉屬。2.3 18S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹分析真菌AH的18S rDNA序列已提交至基因庫(序列號為.目o0人δ3目ooFJ645728), 構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹如圖1所示。由圖可知，真菌AH與Hypocrea lixii tama 157 (AB563714)有 很高的相似性,其同源性系數(shù)圖2煤炭液化產(chǎn)物中檢測的幾種主要化合物達(dá)到100%。因此,真菌AH命名為Hypocrea lixii AH。Figure 2 Main compounds detected from GC- -MS(下轉(zhuǎn)第28頁)中國煤化工MHCNMH G基金項目:國家自然科學(xué)基金資助(50374068);國家自然科學(xué)基金委員會創(chuàng)新研究群體科學(xué)基金資助項目(50921002);中國礦業(yè)大學(xué)科技基金資助(E200407); 宿州學(xué)院碩士科研啟動基金資助項目(2009YSS11).1 1..2011年第09期科技圖向?qū)?>高教論述<>響,即三張報表之間計算口徑的不一致,降低了財務(wù)數(shù)據(jù)的可比性與的改革是可行的,必須的。同時,我們還應(yīng)該看到,我國2006年頒布的可靠性。會計準(zhǔn)則已實質(zhì)性趨同或等效于國際會計準(zhǔn)則，且通過對2007年和根據(jù)《財:務(wù)報表列報的初步觀點(討論稿)》的觀點,對海爾公司的2008年新會計準(zhǔn)則運行情況的調(diào)查統(tǒng)計，財政部和證監(jiān)會對新準(zhǔn)則財務(wù)報告的數(shù)據(jù)進行調(diào)整,得到表4。的執(zhí)行情況總體上持肯定態(tài)度。在這種情況下,我國上市公司的財務(wù)表4青島海爾股份有限公司2007- -2009 年調(diào)整后財務(wù)數(shù)據(jù)報告如果采用新的列報模式,企業(yè)需要耗費巨大成本,并對現(xiàn)有體系項目2007年.2008年2009 年進行全面調(diào)整,還需對會計人員進行培訓(xùn)轉(zhuǎn)換成本很高。同時,由于新的列報模式，需要提供更多細(xì)節(jié)的分解信息,也增加了8常的運行凈經(jīng)營資產(chǎn)4.08.66.477.64 5,.408.039,928.18 2,061.974.011.7成本。因此,目前我國不宜立即進行財務(wù)報告制度的改革,應(yīng)堅持漸進凈金融資產(chǎn)| 24.434.05.66 207485.96.88 7503726.472.97式改革的思路，努力做到財務(wù)報告制度和國際財務(wù)報告準(zhǔn)則實質(zhì)的、持續(xù)的趨同。| 凈經(jīng)營資產(chǎn)增長率15.86%-1.65%我們還應(yīng)該認(rèn)識到,趨同不是單方向的靠攏,對于這場變革,我國凈金融資產(chǎn)增長率-61.87%239.92%要利用國際金融危機后西方世界全面反思金融監(jiān)管體制和財務(wù)監(jiān)督注:數(shù)據(jù)來源于EMIS數(shù)據(jù)庫機制的有利機會,努力使國際財務(wù)報告準(zhǔn)則的改革過程充分考慮我國結(jié)合表3和表4,我們可以更清晰地看出,海爾公司2008年和實際情況， 并將我國的成功經(jīng)驗變成國際公認(rèn)的準(zhǔn)則,不斷提高我國2007年相比,資產(chǎn)的增加主要是由于經(jīng)營資產(chǎn)的增加;而2009年和企業(yè)會計行業(yè)和組織機構(gòu)在國際財務(wù)報告組織框架內(nèi)的話語權(quán)?？?008年相比,雖然資產(chǎn)增長了80.41% ,但是這主要是由于金融資產(chǎn)的增加。[參考文獻]對比現(xiàn)行財務(wù)報表和按照分類列報調(diào)整后的財務(wù)報表數(shù)據(jù),我們[1]溫青山,何濤.基于財務(wù)分析視角的改進財務(wù)報表列報效果研究一來自中可以看到,現(xiàn)行的財務(wù)報表只能消極的揭示資產(chǎn)的變動情況,無法揭石油和中石化的實例檢驗.會計研究,2009,10: 10-17.示這種變化的原因及對公司經(jīng)營的持續(xù)性影響,而分類列報改革后的.[2]孟完巨.基于企業(yè)價值的財務(wù)報表分析體系及改進財會研究209,18.39-財務(wù)報表則可以動態(tài)的顯示出資產(chǎn)變化的原因,從而提高財務(wù)報表的40.[3]李煦財務(wù)報表分析的局限性及對策探討財政監(jiān)督,2009,8:28- 29.4.結(jié)論及建議[4]于建波.企業(yè)財務(wù)報表附注問題的探討會計之友, 2009.14:24- 25.從以上的分析中,我們可以看到,財務(wù)報表分類列報從理論上可[s]王仲兵論財務(wù) 報表列報方式變革:動因.挑戰(zhàn)與趨同路徑上海立信會計學(xué)以加強財務(wù)報表之間的聯(lián)系,提高信息對報表使用者的價值,可以幫院學(xué)報2010.24(1):48- 53.助報表使用者更好的決策;另-方面 ,在經(jīng)濟全球化、- -體化的背景[6]張金若,宋穎.關(guān)于企業(yè)財務(wù)報表分類列報的探討，會計研究，2009.9:29 -35.下，國際經(jīng)濟交流日趨頻繁，為降低財務(wù)信息理解與利用成本促進資[7]ASB.D. ri Paper Peimin Views " Fim inl Sue Prrlainn本跨區(qū)域流動,客觀上需要-套統(tǒng)- -的財 務(wù)報表格式。因此,財務(wù)報表" "w iboara20(-上接第13頁)計算如下:溢價,無風(fēng)險利率等綜合計算得出。為簡化計算,本文用這-行業(yè)平均(1)稅后凈營業(yè)利潤確定收益率5.67%代替。①利潤總額:142萬元(3)該單位所占用的全部資本的機會成本: .②非經(jīng)常項目涉及的金額:5000x4.17% +6000x5.67%=548.7萬元。補貼收人本年度為0(4)綜上,該單位2009年的EVA數(shù)據(jù)為:營業(yè)外收支凈額. -10萬元294 -548.7= -254.7萬元合計:-10萬元.從計算結(jié)果可以看出:只看利潤,該單位經(jīng)營業(yè)績表現(xiàn)不錯。但采③本期利息費用(利息支出)為:240萬元用EVA指標(biāo),考慮了股東資本和債務(wù)資本的機會成本后,考核結(jié)果就④當(dāng)年創(chuàng)造的稅后凈營業(yè)利潤為:截然不同了。導(dǎo)致EVA小于會計利潤的原因很多,其中很重要的一一點(142+10+240)x(1- -25%)=294萬元就是企業(yè)在經(jīng)營過程中對債務(wù)成本以外的機會成本(如股權(quán)成本)或(2)占用資本的機會成本是自有資金成本的重視程度不足。報業(yè)集團在對下屬單位的業(yè)績評價①生產(chǎn)經(jīng)營所使用的債務(wù)資本:中引入EVA指標(biāo),附帶建立以經(jīng)濟增加值為核心的薪酬激勵機制,可根據(jù)資產(chǎn)負(fù)債表中2009年數(shù)據(jù):以促使下屬單位加以關(guān)注集團運營資金投人的方向?？炊唐诮杩?000萬元長期負(fù)債2000萬元,合計5000萬元09年商業(yè)銀行短期借款利率:5.31%;長期借款利率:5.94% ,可得:(3000x5.31%+2000x5.94% )+5000x( 1-25%)= 4.17%[1]孫娜EVA,企業(yè)業(yè)績評價的里程碑財會學(xué)2007(02).②生產(chǎn)經(jīng)營所使用的權(quán)益資本:[2 ]甘林君經(jīng)濟增加值(EV A)研究評述中國總會計師，2007 ,(08).[3]常永新傳媒集團公司治理北京:中國傳媒大學(xué)出版社2006.少數(shù)股東權(quán)益0、股東權(quán)益6000萬元,權(quán)益資本合計6000萬元[4 劉海貴中國報業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略.世紀(jì)出版集團上海人民出版社.2006.權(quán)益成本的計算,-般根據(jù)行業(yè)選擇不同的貝塔系數(shù)、市場風(fēng)險一●(上接第11頁)3.結(jié)論與討論Liquefaction of Untreated Hard Coal.Resour Consver Ree,1981 ,():251-260.實驗中,從土壤中篩選出的真菌具有將液化撫順煤液化成小分子礦業(yè)大學(xué)學(xué)報,20中國煤化工的能力，為該菌的工業(yè)應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。[3]佟威,孫玉梅CNMHG響因素的研究I.煤炭轉(zhuǎn)化, 1996, 19(3):63YH[4]石開儀,陶秀祥,尹蘇東等撫順褐煤的微生物溶煤J.中國礦業(yè)大學(xué)學(xué)報,330 27[1]Fakoussa R M.Production of water- -soluble Coal Substance by Partial Mierobial 2007 ,36(3):339-342.28.