生物學(xué)通報(bào)2007年第42卷第8期乙醚、乙醇用于果蠅麻醉的研究郝大翠姚明鏡劉焰(華寧農(nóng)業(yè)大學(xué)植科院遺傳教研室湖北武漢430070)摘要在以果蠅成蟲為材料的實(shí)驗(yàn)中,麻醉劑的使用劑量是實(shí)驗(yàn)成功與否的重要環(huán)節(jié)。木研究結(jié)合乙醚、無水乙醉2種麻醉劑的特點(diǎn),篩選出了乙醚—無水乙醇復(fù)合麻醉的最佳劑量。經(jīng)比較認(rèn)為:醚;無水乙醇=1:1的配方具有安全范國寬、麻醉效果好的特點(diǎn)。并給出了其麻醉劑量、麻醉處理時(shí)間及其對(duì)應(yīng)的麻醉效果等翔實(shí)的數(shù)據(jù)。有很好的實(shí)用性。關(guān)鍵詞果蠅麻醉劑量乙醚乙醇蘇醒率在遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作中,果蠅麻醉是一個(gè)重要記錄開始麻醉時(shí)間、全部果蠅靜止不動(dòng)時(shí)間、第的技術(shù)壞節(jié)現(xiàn)在普遍使用厶醚作果蠅麻醉劑,它具有只果蠅蘇醒時(shí)間、2h蘇醒只數(shù)、全部果蠅蘇醒時(shí)間麻醉快、蘇醒快的特點(diǎn)。但如杲劑量太小,果蠅保持昏計(jì)算昏迷時(shí)間和2h蘇醒率。麻醉時(shí)間是指果蠅從活迷狀態(tài)的時(shí)間短。常需要進(jìn)行第2次麻醉。如果劑量躍狀態(tài)到紛紛墜人瓶底靜止不動(dòng)的時(shí)間;昏迷時(shí)間是過大,昏迷時(shí)間雖然延長,但易造成過度麻薩而死亡。指從全部靜止不動(dòng)至有1只恢復(fù)活動(dòng)能力開始爬動(dòng)麻醉程度的掌握和控制是個(gè)難點(diǎn)。我們在多年的實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。所需時(shí)間用分表示。蘇醒率是2h的蘇醒只教學(xué)及實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備工作巾,發(fā)現(xiàn)用乙醚一乙醇的混數(shù)/被試蠅數(shù)。合溶液作麻醉劑,果蠅靜止不動(dòng),可觀察的時(shí)間長,安1.2.2乙醚、L醇混合液不同比例試驗(yàn)將乙醚、乙全范闈更寬。為此,本試驗(yàn)擬從麻醉劑的配方、用量、醇按1:0、1:1、2:13:1的比例分設(shè)4個(gè)處理,以單的麻醉處理時(shí)間入手,改進(jìn)對(duì)果蠅麻醉的方法,以達(dá)到乙醚為對(duì)照劑量設(shè)定為60μL、120μL、240μL,麻醉延長昏迷狀態(tài)的時(shí)間,并確保較高的蘇醒率的目的。的處理時(shí)間分成3min、5min、7min、9min。與121材料與方法所不同的是,當(dāng)麻醉處理時(shí)間到,迅速拔掉棉塞,將被1.1材料黑腹果蠅( Drosophila melanogaster)野生型試蠅倒入培養(yǎng)皿里計(jì)數(shù)。3次重復(fù)。長中的果蠅數(shù)是3(紅眼,長翅,直剛毛)和突變型(白眼,小翅,焦剛毛)次重復(fù)之和昏迷時(shí)間是3個(gè)重復(fù)的平均值。記錄昏迷1.2方法時(shí)間和2h蘇醒率。1.2.1果蠅對(duì)乙醚、乙醇的耐受試驗(yàn)我們分別將乙1.2.3不同果蠅品種對(duì)乙隧;無水乙醇=l:1混合液的醚、乙睥設(shè)定為30μ60μL、90μ、130μ、170μ反應(yīng)選野生型和突變型果蠅,用乙醚:乙醇=1:1的混5種不同的劑量,麻醉前,選用長12cm,q3.8cm的指合液240μ,麻醉處理時(shí)間7min。麻醉方法和統(tǒng)計(jì)形試管,配上棉塞。在離試管底1cm處作上標(biāo)記,制觀察方法同1.22作出1個(gè)約12cm3的小麻醉室(見下圖)。隨機(jī)取7d2結(jié)果分析2.1果蠅對(duì)乙醚、乙醇的耐受性:從表1可看出果拋對(duì)2種麻醉劑麻醉的速度隨劑量的增加而加快。30μL60μL、90μ、130μL、1705個(gè)不同劑量的乙醚處理,其麻醉的時(shí)間分別為4min、Imin、1min、0.83min0.5min;而無水乙醇處理組30μL~90μL的3個(gè)處理無1只達(dá)到靜止不動(dòng)的狀態(tài)。當(dāng)劑量增加到130μL.、170μL時(shí),分別在19.0min、21.0min被試蠅才慢慢進(jìn)入麻醉狀態(tài)。130μ處理下第1只果蠅蘇醒的時(shí)間比同劑量的乙醚處理推遲了124min。復(fù)蘇的情況差異更大。乙醚組130以下劑量處理的在120min以內(nèi)果蠅小麻醉示意圖蘇醒以內(nèi)的健壯成蠅裝入試管里,使每瓶有成蠅30只以14%中國煤化工乙醇8h后才蘇醒了無水乙醇處理8h、上。麻醉時(shí),用移液槍吸取麻醉劑注入棉塞的中央位24hCNMH至低,分別為2.5%和置,迅速將棉塞推到離試管底部Icm處。使棉塞下端2%。由此可見,乙醚麻醉快,蘇醒快,復(fù)蘇率高,昏迷的弧線最低點(diǎn)與離瓶底1cm的橫線相交。置20-25℃時(shí)間短。而乙酵麻醉慢,所需劑量較大,但蘇厘慢,昏迷室溫下麻醉,24h內(nèi)不拔掉棉塞。時(shí)間長,復(fù)蘇率低。2種麻醉劑單獨(dú)使用效果各有短2007年第42卷第8期長。若將這3種麻醉劑的特點(diǎn)結(jié)合將有可能獲得更好22乙醛、無水乙醇混合液使用結(jié)果分析的麻醉效果。221不同劑量、不同時(shí)間、不同比例純乙醚處理果表1果蠅對(duì)乙醚和乙醇的耐受極限比較蠅的麻醉狀況當(dāng)乙(ck)劑量為60μL,麻醉處理蘇醒情況時(shí)間3mn時(shí)昏迷時(shí)間為186min,處理時(shí)間5-9min嘛劑(被試取醉昏迷全蘇2b8b:24b時(shí)昏迷時(shí)間均在20mn以上,這4種處理時(shí)間下的2h果蠅時(shí)間|時(shí)間醒時(shí)蘇醒率均在97%以上。但當(dāng)乙醚的劑量增至120μL時(shí)數(shù)(min)(m間蘇圖蘇醒}蘇程|蘇醒蘇醒蘇醒a(bǔ)im數(shù)+(%)數(shù)伴()數(shù)(麻醉處理3min其昏迷時(shí)間可達(dá)26min以上,但2h蘇醒率降至87.6%,并隨處理時(shí)間延長及劑量的增加2h蘇醒率急劇下降6051121315110046s1222乙醚無水乙醇=3:1的不同劑量不同時(shí)間處理130390.833910139100下果蠅的麻醉狀況由表2可見當(dāng)乙醚:無水乙醇=3:1170440.531156的比例時(shí),劑量為60μL的各處理2h蘇醒率均在4910099%以上,但果蠅昏迷時(shí)間短,均低于14min;當(dāng)劑量無水乙醇16041現(xiàn)象為240μ時(shí)昏迷時(shí)間均在22min以上,但2h蘇醒130491916300714|15/0率急劇降低,處理3mn時(shí)為938%,5mn時(shí)即降為3110070402336341%;當(dāng)劑量為120μL時(shí)處理時(shí)間在5~9min的3個(gè)處理昏迷時(shí)間在21min-33.6min,2h蘇醒率均在表2乙醯、乙醇混合液、不同比例的試驗(yàn)結(jié)果理時(shí)間乙醚:乙酵劑量3 min5 nin蠅數(shù)習(xí)昏迷時(shí)間2h蘇醒率果蠅數(shù)Σ昏迷時(shí)間劉2h蘇醚率果蛹數(shù)Σ昏迷時(shí)間x2h蘇醒率果蠅數(shù)】昏迷時(shí)間x2h蘇醒率60μL15520±1.01002.6±0.6987240101001364.7±0.611120u21390=10100213|2206991m7240±1099187253213517732631353±0.660μL103100101001351161.598495140±069116+0610012714010100174146±23165183±49956240μL159183±2500172220+569812928.0±3087481463±10060160μL1396.0±5.2993114|83±4.711610.0x46100136±2.110010ul1311176+0625277+2.3100185336±0.6:99540μ178226+2393819637.6±063411483861547460μ149186±1510016421.01.09.0132227x2311023.6±21乙磕CK120叫110266±128761142762159.3135270103721052934.2;49.5113.0±93.21391490±130*本處理第3重復(fù)無一只蘇醒,故無法計(jì)算昏迷時(shí)間99%以上,從昏迷時(shí)間及安全性兩方面考慮,此3個(gè)處1:1的混合液劑量為120μL和240μL,處理時(shí)間分別理是可用的配方劑量處理時(shí)間組合。為5、7、9min時(shí),果蠅的昏迷時(shí)間均在22min以上,最223乙醚:無水乙醇=2:1的不同劑量不同時(shí)間處理長者為9min處理時(shí)的35min,2h蘇醒率均在98%下果蠅的麻醉狀況表3中乙醚:無水乙醇=2:1時(shí),以上,處于昏迷狀態(tài)時(shí)間長、安全性好;當(dāng)劑量為僅有劑量為240μL,處理時(shí)間5min的處理,果蠅的昏60μ時(shí)的各種時(shí)間處理及120μ、240μ3min處迷時(shí)間達(dá)到22min,同時(shí)2h蘇醒率達(dá)98%,從昏迷理下,盡管2h蘇醒率都在97%以上,但昏迷時(shí)間均不時(shí)間和安全性上看此配方劑量/處理時(shí)間組合較適用到20min60μL、120μL劑量下各處理及240μL3min的處理23不同果蠅品種對(duì)乙醚:無水乙醇=l:1麻醉劑的反雖2h蘇醒率在95%以上,安全性好,但昏迷時(shí)間太應(yīng)戀刑里崛葉M乙醚無水乙醇=1:1的短在18.3min以下;240μ/7min及240μL)min處麻醉中國煤化工森醉狀況見表3。野生理雖延長了昏迷時(shí)間,但2h蘇醒率急劇下降,分別型的CNMHG型為256min,2品種為874%和601%,安全性差?；杳詴r(shí)間無明顯差異,其2h蘇醒率均為100%。結(jié)果224乙醚:無水乙醇=1:1的不同劑量不同時(shí)間處理表明乙醚:無水乙醇=1:1的混合液不論是對(duì)生活力強(qiáng)下果蠅的麻醉狀況表2中顯示,當(dāng)乙醚:無水乙醇=的野生型還是對(duì)生活力很弱的突變型果蠅均適用。2007年第42卷第8期表3不同果蠅品種對(duì)乙醚:乙醇=1:1的混合液反應(yīng)是不一樣的。本實(shí)驗(yàn)有16個(gè)配比/劑量/時(shí)間組合1次處理:240H7mn麻醉其昏迷時(shí)間在15-33min、(昏迷時(shí)間在20min品種其效果明顯優(yōu)于“幾滴乙醚,半分鐘”的原方法。其中野生型(紅限、長翅,直剛290±3.6突變型(白眼、短翅、焦以蠅數(shù)(E)昏速時(shí)同mm()2b蘇醒率以上的有10個(gè)組合)2h蘇醒率在98%以上(見表2)256±4500乙醚:乙醇=1:1的配比適用的劑量/時(shí)間組合范圍寬,它不僅適于對(duì)生活力強(qiáng)的野生型果蠅的麻醉,對(duì)生活3討論力很弱的突變型也同樣安全有效。1)在目前使用的多種遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教材中,用于果5)在麻醉空間不變的情況下,麻醉劑的用量,和蠅雜交的麻醉方法一般都是依照“幾滴乙醚、半分鐘”麻醉處理的時(shí)間是可以調(diào)控的。使用者可以根據(jù)實(shí)際的原則其具體操作方法多種多樣,因?yàn)闆]有限定麻醉需要在表2中選取所需要的麻醉劑量及麻醉處理時(shí)劑量和麻醉空間麻醉效果各不相同。我們曾以4、6、8間的參數(shù)。這一結(jié)果,是對(duì)“幾滴乙醚,半分鐘”的原方滴的劑量半分鐘的麻醉時(shí)間做過對(duì)比實(shí)驗(yàn)。其昏迷時(shí)法進(jìn)一步完善,不僅在遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中方便了教師間過短,分別為43min、8.0min、8.3min,難以滿足實(shí)對(duì)學(xué)生完成麻醉技術(shù)的指導(dǎo),對(duì)以果蠅為材料的研究驗(yàn)教學(xué)及實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備的實(shí)際需要工作者也具有一定的實(shí)用價(jià)值。我們認(rèn)為擇迷時(shí)間在20min左右,2h以內(nèi)有6)本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川乙醚、乙醇混合液麻醉后蘇醒的98%以上的被試蠅能蘇醒則該麻醉深度對(duì)雜交親本而果蠅,基本上能正常交配和產(chǎn)卵并繁殖后代。但其對(duì)言是合適的。既能給學(xué)生足夠的操作、觀察時(shí)間,勿需果蠅及后代的生活力、體質(zhì)方面的毒理作用還有待進(jìn)2次麻醉;也能確保高復(fù)蘇率;提供足量、健壯的受試步研究。主要參考文獻(xiàn)2)若使用單一乙醚作果蠅麻醉,從昏迷時(shí)間和安1余君,遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)北京:農(nóng)業(yè)出版社,91全性兩方面考慮,有必要在“幾滴乙醚、半分鐘”的基2燕慧民,袁靜遺傳學(xué)驗(yàn)武漢:武漢大學(xué)出版社,194礎(chǔ)上減少乙醚用量延長麻醉處理時(shí)間。本試驗(yàn)表2中3盧龍斗,常重杰遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)北京:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版乙醚用量60μL(約2滴)麻醉處理時(shí)間3-7min,昏社,1996迷時(shí)間可達(dá)186-22.7mn,2h的復(fù)蘇率99%以上。4楊大翔遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)北京:科學(xué)出版社,20045工建波方呈祥鄢慧民等遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教程,武漢:武漢大學(xué)出版3)根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果,若乙醚-乙醇混合使用,能在社,2004麻醉速度、昏迷時(shí)間、耐受程度、復(fù)蘇率多方面取長補(bǔ)6劉祖洞汪紹慧灘傳學(xué)實(shí)驗(yàn)第2版北京:高等教育出版社1987短,能起到加強(qiáng)麻醉效果的作用。是較好的復(fù)合麻醉7張貴友吳瓊林琳.洪通遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)北京:清華大學(xué)出版社,4)乙醚和乙醇的配比不同,麻醉昏迷時(shí)間效果也(E-mail:haodacui@mail.hzau.edu.cn)(BF)血液蛋白質(zhì)預(yù)示心臟病風(fēng)險(xiǎn)膽固醇”〈低密度脂蛋白)氧化,導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。它還會(huì)損膽固醇”(高密度脂蛋白對(duì)身體的保護(hù)作用,并減少有時(shí)候,一個(gè)人明明看上去非常健康,其實(shí)患心臟病的風(fēng)液中一氧化氮含量而一氧化氮是放松血管、使其柔欽通暢的險(xiǎn)很高?？茖W(xué)家新近發(fā)現(xiàn)了解釋這種怪現(xiàn)象的一個(gè)線索:血液重要物質(zhì)。中的一種蛋白質(zhì)會(huì)損害心血管系統(tǒng),其含量過高是心臟病的早以往的研究曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)心臟病患者體內(nèi)血清髓過氧化酶含期預(yù)兆。量高,荷蘭科學(xué)家的這項(xiàng)新研究是針對(duì)健康人患心臟病風(fēng)險(xiǎn)與這種蛋白質(zhì)被稱為l清髓過氧化酶(MPO),由血液里的血清髓過氧化酶含量之問關(guān)系的首次大規(guī)模研究。1993-1997白細(xì)胞分泌。它的任務(wù)原本是殺滅有害細(xì)菌,但荷蘭醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)間,英國諾福克郡居民參與了一項(xiàng)關(guān)于癌癥和營養(yǎng)的研究,中心的一個(gè)研究小組在即將出版的《美國心臟病學(xué)院周刊》土這些研究對(duì)象的血樣被冰凍保存下來,荷蘭科學(xué)家在新研充中報(bào)告說,該蛋白質(zhì)會(huì)造成動(dòng)脈發(fā)炎,破壞血液里的保護(hù)性物重,利用了有關(guān)數(shù)據(jù)和血樣在心臟病的典型癥狀出現(xiàn)之前很久,血清髓過氧化酶含量增加后平均又生的時(shí)間甲這批研究對(duì)象中有1138就發(fā)出了有害物質(zhì)積累的信號(hào)人患中國煤化工同、年齡相近的人群中科學(xué)家認(rèn)為,這項(xiàng)成果開辟了心臟病研究和診斷的一個(gè)與末CNMHG年參與研究時(shí)留下的血新領(lǐng)域。詳細(xì)研究相關(guān)病變過程,將有助于利用血液來及早發(fā)樣中血清髓過氧化酶含量明顯更高?，F(xiàn)患心臟病風(fēng)險(xiǎn)較高的人。血清髓過氧化酶會(huì)使人體內(nèi)的“壞輛自《科學(xué)時(shí)報(bào)》2007年7月5日