中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica2013:46)·1l炮制制紫草提取工藝研究談靜',方芳2,鄭琰!,袁強華2摘要]目的:研究不同提取溫度、提取方法對紫草中有效成分的影響,優(yōu)選紫草中蔡醌類成分的提取工藝。方法釆用分光光度法測定紫草提取液中總基醌含量,比較滲漉、回流、溫浸(65℃)、超聲、浸漬方法的提取效率,采用L叭(3正交試驗,以總醌的含量作為指標,以匚醇用量、浸泡時間和浸泡次數(shù)為考察因素,優(yōu)選紫草的醇提工藝條件。結(jié)果:回流對萘醌類成分的破壞明顯,其余4種提取方法以滲漉法、溫浸法(65℃)提取率最高,各方法之間無顯著差別;優(yōu)選的醇提工藝為:加10倍量95%匚醇,浸泡2次,每次1小時。結(jié)論:浸濆法節(jié)約能源,對設備要求低,操作苘便,轉(zhuǎn)移率高,優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、合理、可行,適用于工業(yè)化生產(chǎn)[關(guān)鍵詞]紫草;總蔡醌;正交試驗;提取工藝[中圖分類號]R283[文獻標識碼]A[文章編號]1674926X(201306-00403Study on extraction process for Radix Arnebiae/ TAN Jing I, FANG Fang 2, ZHENG Yanl, YUAN Qiang-hua2 (lAfiliatedhospital of Chengdu university of TCM, Chengdu 610072, Sichuan; 2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075, Sichuan)[Abstract] Objective: Study on the influence of the different extraction temperature and extraction method for effectivecomponents in Radix Armebiae to select the optimal extraction process of naphthoquinone in Radix Arnebiae. Method:Spectrophotometry was used to detect the naphthoquinone in Radix Arnebiae and the extract rates by percolation, reflux, soak(65C), ultrasonic and dip method were compared with L9 (3)4 orthogonal test, the alcohol extraction conditions of RadixArmebiae was optimized with naphthoquinone content as the index, and the amount of alcohol, extraction time, extraction times asthe investigation factors. Result: Among the five methods, naphthoquinone was destroyed by percolation obviously. The extractionrate of naphthoquinone were higher in sample prepared by soak(65"C )and dip methods with no significant difference among thepreparation methods. The optimal alcohol extraction conditions were as following: dipping extracting 2 times with 10-fold 95%alcohol, 12 hours for each time. Conclusion: The dip method is simple and save energy and has lower demands for equipmentsThe optimum extraction process is stable, feasible and reasonableIKey words] Radix Armebiae: naphthoquinone; orthogonal test; extraction process紫草為紫草科植物新疆紫草 amebicα uchoma度影響較大,目前報道多釆用高濃度的乙醇(Roν le)Johnst.或內(nèi)蒙紫草 Arnebia guttata Bunge的干燥提取,但提取方法不一,有回流法、浸漬法、根。性寒味甘、咸,入肝、心經(jīng),具有涼血活血滲漉法等,不同方法對成分的破壞影響差別較解毒透瘀的功效?，F(xiàn)代藥理學研究表明,紫草大”,為了合理有效地進行紫草有效部位的提具有較好的抗炎抑菌、抗生育、抗氧化、抗腫取與制備,主要針對羥基萘醌類總色素的不穩(wěn)定瘤、降血糖、保肝護肝和對心血管系統(tǒng)的作用性,以左旋紫草素為對照品計算羥基萘醌總色抗炎抑菌作用是紫草的傳統(tǒng)藥效,即消炎素含量,比較不同提取溫度、提取方法對紫草中有收斂和解熱的作用,紫草中抗炎成分主要存效成分的影響,并采用正交試驗對紫草的醇提條件在于醇提物中,紫草醇提物的抗炎抑菌效果明進行篩選。顯好于水提物的抗炎效果。乙酰紫草醌紫草醌、去氧紫草素等萘醌類色素為紫草的1儀器與試藥主要有效成分。萘醌類成分極不穩(wěn)定,受溫島津UV-210A紫外分光光度儀(日本島津公司);AS10中國煤化工奧特賽恩斯公作者單位}1成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院,四川成都61002:2司):BP2CNMHO分之一,德國2成都中醫(yī)藥大學,四川成都610075sartorius公司);JA2003電子天平(千分之一,上海收稿日期]2013-07-31精密儀器公司)。中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica2013:4(6左旋紫草素對照品(批號:110769-200405,中時,粉碎(過三號篩),取3份,每份約1.0g,精密國藥品生物制品檢定所);乙醇為色譜純、稱定,置250mL量瓶中,加95%乙醇至刻度,4小時水為蒸餾水,其余均為分析純。紫草飲片購于四川內(nèi)時時振搖,濾過,即可新荷花中藥飲片股份有限公司,質(zhì)量符合《中國藥2.2.2樣品測定按照“2.1.2”項中樣品測定方法,測典》2010年版一部“紫草項下飲片“新疆紫草”的有關(guān)定各工藝條件下紫草中總萘醌的含量,結(jié)果見表1規(guī)定。表1紫草不同提取方法的實驗結(jié)果(x±S,n=3)序號提取方法羥基萘醌總色素含量(mgg)RSD(%)轉(zhuǎn)移率(%)2方法與結(jié)果飲片36.880.392測定方法2滲漉法31.10±0.0.70采用紫外-可見分光光度法,檢測波長3溫浸法(65℃)31.54±0.2516nm回流法1,7579.392.1.1標準曲線的制備取左旋紫草素640mg,精2.3實驗結(jié)果(1)以羥基萘醌總色素含量為評價密稱定,加95%乙醇使溶解并定容至50mL,搖勻,指標,三種方法提取率溫浸法(65℃)>滲漉法>回即得對照品溶液(0.128mg/mL)。精密量取該對流法,但實際三種提取方法的提取率相差不大,說照品溶液05、10、1.5、20、2.5、30mL,分別置明采用95%乙醇作溶媒可以達到較好的提取效果10mL量瓶中,用乙醇定容至刻度;以95%乙醇為(2)三種不同提取方法得到的供試品溶液與空白對照,分別于56m處測定吸光度,以左旋紫飲片供試品溶液和左旋紫草素對照品的紫外吸收光草素含量(mg)為橫坐標,吸收度為縱坐標進行譜比較可知,回流法得到的供試品溶液與左旋紫草線性回歸,計算得回歸方程:Y=22826X+00059素對照品的紫外吸收圖譜不一致。說明乙醇回流溫(r099,結(jié)果表明,含量在00640.384mg范度下易對羥基萘醌總色素產(chǎn)生破壞;滲漉法與溫浸圍內(nèi),其吸收度線性關(guān)系良好。法(65℃)的羥基萘醌總色素提取率差別不大,說2.12樣品測定方法精密稱取紫草飲片,按照各工明紫草醇提可在常溫下進行。因此確定在常溫下采藝方法、實驗條件進行提取,精密吸取各樣品溶液用95%乙醇對紫草進行提取,并進一步對提取的方2mL,置50mL量瓶中,加95%乙醇稀釋并定容至刻法、95%乙醇用量、提取時間、次數(shù)等工藝參數(shù)進度,按照“標準曲線制備”項下方法進行樣品測定,行考察,確定最佳提取工藝。據(jù)回歸方程計算出紫草樣品中總萘醌的含量。23紫草提取方法篩選22紫草醇提溫度考察23.1不同提取方法樣品制備2.2.1不同醇提溫度樣品及飲片樣品制備方法1:超聲法方法1:滲漉法取紫草適量,粉碎成粗粉(過一號篩),取紫草適量,粉碎成粗粉(過一號篩),取3取3份,每份100g左右,精密稱定,加95%乙醇份,每份100g左右,精密稱定,經(jīng)加95%乙醇,滲3000oL,超聲提取1小時,放置4小時,時時振搖漉2次,24小時/次,15倍/次,合并提取液定容至濾過,收集濾液并定容至3000mL。3000mL。方法2:浸漬法方法2:溫浸法(65℃)取紫草適量,粉碎成粗粉(過一號篩),取3取紫草適量,粉碎成粗粉(過一號篩),取3份,每份100g左右,加95%乙醇300,常溫下份,每份100g左右,精密稱定,加95%乙醇,浸泡2浸泡1次,48小時次,濾過,收集濾液并定容至次(65℃),時時振搖,1小時/次,15倍/次,合并3000mL。提取液定容至3000mL。方法3:滲漉法方法3:回流法取紫草適量,粉碎成粗粉(過一號篩),取3取紫草適量,粉碎成粗粉(過一號篩),取3份,每份101Q5%71nnmL,滲漉2次份,每份100g左右,精密稱定,加9%乙醇,回流24小時次,中國煤化工3000mL。提取2次,第1次2mi,第2次10mim,15倍,合232樣品測CNMH品測定方法,測并提取液定容至3000mL。定各工藝條件下紫草中總萘醌的含量,結(jié)果見表飲片樣品的制備:取紫草適量,在50℃干燥3表3不同提取方法的實驗結(jié)果(x±S,n=3)中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica2013;4(6)13序號提取方法羥基萘醌總色素含量(mgg)RSD%浸漬法30.51±0.330.84KI105.799938941210546滲漉法31.10±0.50K2102.12109.13112.551080323.3實驗結(jié)果3種提取方法得到的羥基萘醌總色K3110.2610966111.5010468素含量以滲漉法最高,但實際差別不大,與文獻2R2.713.436.141.12報道基本一致。超聲提取與浸漬提取相比,雖提取表6紫草醇提正交試驗方差分析時間短,但提取率略低,且超聲提取對設備要求高,方差來源離差平方和自由度方差F值顯著性能耗大,超聲過程影響因素不易控制;浸漬法提取5.545.41略低于滲漉法,但綜合比較來看,浸漬法作為提取萘22.3410.1710.90醌類成分初始提取方法,可以節(jié)約能源,而且對設備35.7134.87要求低,操作簡便,轉(zhuǎn)移率高,更適用于工業(yè)化生D(誤差e)20321021.00產(chǎn),故以95%乙醇為溶媒,釆用浸漬法對紫草進行F005(2,2)=1900,·顯著性,F001(2,2)9900,·極顯著性提取。2實驗結(jié)果由表5直觀分析結(jié)果可知,影響提24紫草醇提工藝優(yōu)選取效果的因素順序為:C(浸泡次數(shù))>B(浸泡根據(jù)紫草萘醌類成分的理化性質(zhì)及上述實驗結(jié)時間)>A(乙醇用量),確定最佳醇提工藝為:果,參考相關(guān)文獻,確定紫草用95%乙醇提取,以A3B3C2;由表6方差分析結(jié)果可知,C因素(浸泡次左旋紫草素為對照品計算羥基萘醌總色素含量,對數(shù))影響顯著,B因素(浸泡時間)與A因素(乙醇常溫下紫草的醇提取方法進行優(yōu)選。用量)無顯著影響;為節(jié)約資源,降低工業(yè)化生產(chǎn)24.1紫草醇提正交實驗選用正交試驗法,以95%的成本,A3調(diào)整為A1,將B3調(diào)整為B1,因此優(yōu)選醇乙醇為溶媒,對影響紫草醇提的主要因素:乙醇用提工藝為ABC2,即加10倍量95%乙醇,浸泡2次量、浸泡時間、浸泡次數(shù)進行考察,上述三個因每次12小時。素,各取三個水平,進行I(3)正交試驗,篩選紫草24、3紫草醇提驗證試驗取紫草250g,共三份,按醇提工藝條件。因素水平設計見表4照正交試驗優(yōu)選的提取工藝進行驗證試驗,濾液定表4紫草醇提因素水平表容至5000mL。結(jié)果見表7。因表7醇提驗證試驗結(jié)果(n=3)A乙醇用量(倍)B浸泡時間(小時)C浸泡次數(shù)(次)D空白試驗號羥基泰醌總色素含量(mgg)平均值(mgg)RsD(%)38.882.2138.21稱取紫草100g,按正交試驗設計表的條件進行結(jié)果:羥基萘醌總色素含量平均值為38,l0mg冷浸提取試驗,提取液濾過,用95%乙醇并定容至RSD=221%,表明該工藝穩(wěn)定可行。4000mL。正交試驗結(jié)果見表5,方差分析見表6表5紫草醇提正交試驗結(jié)果n=3)3討論因素試驗結(jié)果關(guān)于紫草的提取方法,曾有不少文獻報道采用ABcD羥基萘醌總色素含量Y(mg)乙醇回流的方法提取,乙醇濃度從65%-95%不等,2886本文采用高濃度乙醇回流的方法得到的提取率達到279.39%,但回流法得到的供試品溶液與左旋紫草782素對照品的紫外吸收圖譜不一致,可見羥基萘醌總33.52色素已被破壞,單純采用吸光度計算羥基萘醌總色素含量的中國煤化工中有效成分的得31.92失,應結(jié)合HHCNMH GLO圖譜進行比較37.00分析(下轉(zhuǎn)第4頁)44中藥與臨床 Pharmacy and Clinics of chinese Materia Medica2013;4(6)性峻力猛以攻邪,即腫瘤防治中常用的“以毒攻毒導意義。并且中醫(yī)藥學的在歷史上有著不可替代的之法”。臨床上可根據(jù)患者具體情況,在正氣尚未衰地位,研究整理李時珍《本草綱目》對腫瘤疾病的竭而能耐攻的情況下,可借其毒性抗癌,但是由于經(jīng)驗,硏究具有一定的價值和實用性,然而治療腫腫瘤病人正氣多已受損,其治不耐一味猛烈攻代,瘤疾病的藥物與治法的研究涉及面很廣,任重而道故有毒之藥的應用,應適可而止。要根據(jù)患者的體遠,仍有許多工作要努力去完成。質(zhì)狀況和耐攻承受能力,把握用量、用法及用藥時間,方能收到預期的治療效果。另外,以毒攻毒法參考文獻]應較少單獨全程用于治療腫瘤,宜多在扶正培本的1]明李時珍本草綱目M北京人民衛(wèi)生出版社200基礎(chǔ)上佐以有毒藥物配伍使用,總之應慎而用之。[2]劉偉勝,徐凱腫瘤科專病中醫(yī)臨床診治M北京人民衛(wèi)生出版社,20053.4結(jié)語[3]李家庚屈松柏中醫(yī)腫瘤防治大全[M]北京科學技術(shù)文獻《本草綱目》中蘊含大量對今后研究腫瘤相關(guān)出版社,19944[4]楊金坤現(xiàn)代中醫(yī)腫瘤學M]上海:上海中醫(yī)藥大學出版社,疾病以及抗腫瘤藥物的開發(fā)方面有確切而有價值的2007,8386內(nèi)容,對現(xiàn)今后的腫瘤疾病的研究都有著重要的指(責任編輯王家葵)(上接第13頁)參考文獻[6]吳學淵劉萍正交試驗設計優(yōu)選紫草的醇提工藝門中國醫(yī)[帥冬華紫草中化學成分及藥理作用的研究進展[門中外醫(yī)院用藥評價與分析,2008,8(10):750.療,2009,(22):103η]校合香,萬明陳洪燕等均勻設計優(yōu)化紫草的醇提工藝[[2]劉虹陳海生新疆紫草化學成分與藥理作用的研究進展中國醫(yī)院藥學雜志2008,28(1):381藥學實踐雜志,2009,27(3):16[8]劉曉華,易建勇紫草提取純化工藝優(yōu)選及穩(wěn)定性研究[J中[3]趙雪梅王桂玲紫草有效成分的提取及其抗炎作用的研究藥材,2001,24(5):3571[中藥藥理與臨床,2008,24(4)-369]楊秀芳正交實驗法優(yōu)選紫草的提取工藝[J中成藥,[4]趙雪梅鄧文紫草不同提取物抗炎及抑菌作用實驗研究門2005,27(3)35l1時珍國醫(yī)國藥,2008,197):1603[l0馮文文李國玉,譚勇等新疆紫草中萘醌類成分的提取工[5]陰健郭力弓中藥現(xiàn)代研究與臨床應用[M]北京學苑出版藝研究[石河子大學學報(自然科學版)201129(1):67社,1993:6341(責任編輯:胡慧玲)(上接第33頁)成分分析居多。本實驗在藏醫(yī)藥理論指導下,結(jié)合[參考文獻]其功效,通過實驗證明渣馴對小鼠無水乙醇型胃潰索南鄧登童麗袁冬平等傳統(tǒng)藏藥渣馴的文獻研究[]中瘍模型有治療作用,能明顯降低胃蛋白酶活性,而國民族民間醫(yī)藥2012,2(4):8.降低胃液總酸度作用較小,推測可能與藥物降低胃2]蔣毅萍吳航宇朱漢等胃可寧對實驗性胃潰瘍的影響J中藥藥理與臨床,2003,195):37.液分泌總量而降低胃蛋白酶活性有關(guān)。渣馴抗無水B周源,劉英交郭智等獐芽菜菩苷對乙醇致小鼠臂潰瘍的保乙醇胃潰瘍的作用機制與其它功效有關(guān)藥理作用有護作用[J中國新藥雜志,2008,17(20):1768待于進一步研究。(責任編輯:陳思敏)中國煤化工CNMH