苜蓿總甙提取工藝的研究魏曉玲’,孫海洲2,盧德勛2,白剛(1內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)與醫(yī)學(xué)學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特010018:2內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特010030;3內(nèi)蒙古鄂爾多斯市三頃地種牛場,內(nèi)蒙古鄂爾多斯014600)隨著人們對苜蓿認識的不斷深入,逐漸發(fā)現(xiàn)苜蓿中的一些生物活性成分,如苜蓿皂甙、苜蓿多糖摘要:筆者研究了苜?？傔暗奶崛」に?通苜蓿黃酮等,其中苜蓿皂甙因為具有溶血特性且味過乙醇濃度、固液比、提取次數(shù)、提取溫度4苦,能夠引起家畜臌氣,被認為是苜蓿中的抗營養(yǎng)個單因素設(shè)定L(34)正交試驗,確定苜?？傄蜃?。Lu等(1987)研究表明,添加2%和4%的苜甙最佳提取工藝:乙醇濃度70%、固液比1蓿皂甙可分別降低瘤胃原蟲34%和66%。劉凱10、提取2次、提取溫度80℃。等(1999報道,苜蓿皂甙能夠明顯促進試驗大鼠關(guān)鍵詞:苜蓿總甙;正交試驗?zāi)懝檀嫉呐判?促使正常培養(yǎng)內(nèi)皮細胞NO的釋中圖分類號:Q946文獻標識碼:A放。叢學(xué)滋等(1988)研究表明,苜蓿皂甙可使家兔文章順序編號:1672-5190(2007)03-0028-02血清總膽固醇明顯下降,降低主動脈壁中總膽固醇的沉積。因此,苜蓿皂甙作為一種生物活性成分具有潛在的開發(fā)價值12.3苜蓿總甙的提取方法:取苜蓿草樣1000g,1材料與方法置于圓底燒瓶中,按照正交設(shè)計的條件進行回流1,1試驗材料提取,正交試驗設(shè)計方案見表2。提取后過濾,濾液111樣品:苜蓿由內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院草原研減壓濃縮,濃縮液用等體積的石油醚、正丁醇分別究所試驗基地提供。萃取3次,然后將正丁醇萃取液合并濃縮,在水浴1L2試劑:無水甲醇、無水乙醇、高氯酸、冰醋鍋上蒸干恒重,用蒸鎦水溶解,并定溶于50mL容酸、香蘭素均為國產(chǎn)分析純;齊墩果酸標品購自北量瓶備用。124標準曲線衷13儀器:78可見分光光度計、分液漏斗、1241溶液配制與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀醫(yī)用真空泵圓底燒瓶球形冷凝管①顯色劑配制:取香蘭素5g,加冰醋酸10等mL溶解搖勻?？?2試驗方法②對照品溶液配制:精確稱取干燥至恒重的12樣品制備:從莖的基部剪取苜蓿地上部分,齊墩果酸標準品545mg,置于5mL容量瓶中,加并于65℃烘箱中干燥后,放入小型粉碎機粉碎,入甲醇定容,搖勻備用。密封保存?zhèn)溆芒蹣悠啡芤褐苽?將上述提取得到的苜?？俵.22正交試驗:采用L(34)正交表,水平設(shè)置見甙,稱取50mg,用水溶解并定容于5mL容量瓶表1,通過正交試驗篩選苜蓿總甙提取工藝。中,搖勻備用。7醴坦驗的因素水平℃,%收稿日期:2007-01-25收稿日期:2007-04-1H中國煤化工作者簡介:魏晚玲(1978—),女,在讀碩士研究生CNMHGO(溫度)D(乙醇濃度)主要研究方向為反魚動物營養(yǎng)與調(diào)控通訊作者:孫海洲(1971—一),男,博士,研究員,主要研究方向為反芻動物營養(yǎng)。E-mail:sunhaizhou@china.com萬第3期垂28試驗矸寬表2正交試驗方案及其結(jié)果℃,%表3方差分析因素變異來源離均差平方和自由度方差處理號A總甙總乙醇濃度20.32362011(固液比)(次數(shù))(溫度)(乙醇濃度)提取率提取溫度002100l1l(l:10)l(60)固液比001514481(1:10)223456l(l:10)3134提取次數(shù)(誤差)001020.0052(1:12)1注:Fos(2,2)=19000;Fm(2,2)=99.000。2(1:12)20.72根據(jù)正交試驗結(jié)果,提取工藝優(yōu)化條件為固液2(1:12)3l(60)l(70)l:16)190比1:10,提取次數(shù)2次,溫度80℃,乙醇濃度70%。4.2303(1:16)23結(jié)語3(1:16)30.702571該試驗僅作為苜?？傔疤峁┕に嚨某醪教?9TTTKKK3.8613.2912970l.410索,以期為后來的苜?？傔疤崛」に嚨母倪M提供3.471參考。3.3093.4590.857參考文蔽0970.9900.553〔1〕劉凱,余書勤苜蓿皂甙對膽固醇排泄和內(nèi)皮細胞釋放10231.1631.157一氧化氮的影響[J〕.徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1999,19(6)1.1031.1531.267442-444.0.2640.0660.2772〕叢學(xué)滋,秦孟根,王書安苜?？傇碓嚨奶崛∨c分析[J注:苜蓿總甙提取工藝影響的主次順序為乙醇濃度>提中藥通報,1988,13(9):39取溫度>固液比>提取次數(shù)。〔3〕賀玉薇王松柏王代軍,等苜蓿皂甙提取工藝研究[草原與草坪,2005,11(5):27-291242標準曲線及回歸方程〔4〕秦孟根,劉大躍,姜春根紫花苜蓿不同部位總皂甙含吸取對照品溶液40,50,60,70,80,90μ,水量測定[J中草藥,1999,21(1):38-39浴揮干溶劑,加入顯色劑02mL及高氯酸08(5)賀玉微,王松柏,許俊東,苜蓿天然成分的營養(yǎng)保健功mL,水浴70℃加熱15mn,流水冷卻后加入冰醋能及其開發(fā)前景[A第二屆中國苜蓿發(fā)展大會論文酸5mL,搖勻,靜置10min。以722型可見分光光集C北京:北京出版社,2003度計于545mm處測定吸收度,根據(jù)對照品濃度和6)LnCD, Jorgensen N A. Alfalfa saponins affect site and吸收值可得回歸方程式:C=10.119A+1.5093,其中extent digestion in ruminants [J]Journal of NutritionR2=0.9995,A為吸光度,C(mg/100mL)為濃度。1987,117:919-9271.2.4.3樣品含量測定吸取樣品液100μL,按標準曲線制備項下方法操作,顯色,于545m處測定吸收度,隨行空白坦桑尼亞有49人死于裂谷熱根據(jù)上述回歸方程計算樣品中總甙的總提取率。據(jù)報道:截至2007年4月9日,坦桑尼亞2結(jié)果與分析境內(nèi)已有49人死于裂谷熱病。這一統(tǒng)計數(shù)字試驗設(shè)計采用L4(34)正交表,即四因素三水平是坦桑尼亞總理洛瓦薩9日在多多馬省視察做9次試驗,正交試驗方案及其結(jié)果見表2。時公布的。由表3可知,乙醇濃度對總甙的提取率有顯多多馬省是坦桑尼亞的畜牧大省,飼養(yǎng)有著性影響(P<0.05),而提取溫度、固液比、提取次300多萬頭(只)牛羊,但到目前僅有7萬多頭數(shù)均無顯著影響(P>0.05),由表2可知,隨著溶劑(只)注射了裂谷熱疫苗用量的增加,總甙提取率下降,所以固液比選擇1裂谷熱是東非大裂谷地帶雨季易流行的10;提取次數(shù)在二次浸提時達到最大值1163%V中國煤化工羊中傳播,自所以浸提次數(shù)選擇2次;隨著溫度的升高,總甙提CNMHG動物傳播取率增加,因此提取溫度選擇80℃;乙醇濃度從給人?；颊叨喑霈F(xiàn)急性腹瀉、高燒、腦水腫,并70%增加到90%,但總甙提取率呈下降趨勢,因伴隨肝腎功能嚴重受損,有些病人還會因腦血此乙醇濃度選擇70%為宜。管破裂出血而死亡。(本刊輯)2007年第3期