離子替代等相結(jié)合的方法。另外還可結(jié)合胞內(nèi)代謝產(chǎn)物抑[7] Bertaso F, Hendry BM, Donohoe P, Alterations in out ward K制的方法進(jìn)行通道分離和鑒別。再有就是基因篩選克隆并currents on removal of extemal Ca" in human atrial myocytesJ]. Biochem Biophys Res Commun 2000 27x1): 10表達(dá)不同通道亞基的方法能夠達(dá)到分離通道的目的如卵母[8] Koumi s, Backer CL, Arentzen Ch. Characterization of in warily細(xì)胞或人工質(zhì)膜表達(dá)可以作為膜片鉗技術(shù)的輔助手段。隨rectifying K* channel in human cardiae myocytes. Alterations in著對離子通道門控特性和調(diào)控機(jī)理認(rèn)識的深入將有更多channel behavior in myocytes isolated from patients with idio-離和鑒定方法得到應(yīng)用。pathic dilated cardiomyopathy[ J ] Circulation, 1995, 92(28結(jié)語[9] Frazier CJ George EG Jones SW. Apparent changes in ion selec膜片鉗技術(shù)以其實用、快速、靈敏、準(zhǔn)確及重復(fù)性好等技uring w術(shù)優(yōu)勢已經(jīng)在大量的研究中得到證實。這一技術(shù)發(fā)明至今[10] Zhou WG, fontenot1iSea, Modulation of cardiac cal已有20多年歷史國外20世紀(jì)80年代中期用此技術(shù)進(jìn)行channels by propofo[ J]. Anesthesiology ,1997 86670研究井推廣國內(nèi)20世紀(jì)90年代初引進(jìn)這一技術(shù)。但國內(nèi)[11 Nygren A, Fiset C, Fire J W,n. Mathematical model of an目前由于多種原因用此技術(shù)進(jìn)行心血管藥物與心肌細(xì)胞離. Cire res,l9988x1)為3子通道的研究相對還多停留在動物細(xì)胞階段。種屬及組織[12] Priebe l, Beuckelmann DJ. Simulation study of cellar electric差異使得實驗數(shù)據(jù)與人或臨床的聯(lián)系上還有一段距離巫待【131, Wasserstrom ja Furukawa T Clthe sodium current in single human atrial myocyte J ]. Cric Re麻醉藥物肭一個熱點(diǎn)領(lǐng)域。隨著在分子水平上對心臟離子199271(3)535通道門控動力學(xué)及調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識也將使進(jìn)一步揭示心肌[ 14] Schneider M Proebstle T', Hombach V ,et al. Characterization ofthe sodium currents in isolated human cardiocyte[ J]. Pfuegers細(xì)胞的生理和病理生理過程成為可能參考文南[15 Renate H Frank S Stephan H ,et al. Single-channel proper[I]方福德周呂,丁濂,等.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實驗技巧全書(下冊IM]calcium channels from failing human ventricle[J]1. car北京北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1995diovan Res, 1998 37 44597-210[16] Mewes T, Ursula R. L-type calcium currents of human myocyte[2] Kitamura H Yokoyama M Akita H ,et al. Tertiapin potently andfrom ventricle of non-failing and failing hearts and from atriumlectively blocks muscarinic K channels in rabbit cardi[J].J Mol Cell Cardiol 199426 130cyte[ 1.J Pharmacol Exp Ther 2000 293( 1): 196[17] Quadid H, Albat B, Nargeot J Calcium currents in diseased hu-[3] Nenov NI, Crumb WJ, Pigott JD ,et al. Quinidine interactionman cardiac cell[ J]/ Cardiovasc Pharmacol, 199525282with human atrial potassium channels-dleyelop mental aspect[ J]. [18] Li GR Feng JL, Wang ZG , et al. Comparative mechanisms of 4-Circ res,99814(28):122minopyridine-resistant Io in human and rabbit atrial myocyte[4]趙穎胡大一楊新春等肽類血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑對心[J]. Am J Physiol, 995 2638): H463肌細(xì)胞離子通道的影響門中華心血管病雜志20002X1):[19] Li GR Feng JN, Yue Lx , et a, Transmural heterogeneity of action potentials and Itml in myocytes isolated from the human right[5] Hamill OP, Martty A, Neher E ,et al. Improved patch-clampentricle[ J ]. Am J Physiol, 1998<2 Pt 2): H369techniques for high-resolution current recording from cells and [ 20] Amos GJ Wettwer E, Metzger F ,et al. Differences bet ween out-ell-free membrane patched J ] Pfluegers Arch, 98ward current of human atrial and subepicardial ventricular myocyte[ J ]. J Physiol. Lond ) 1996 A91 3electropharmacological studie[ J1. Pharmacol Res 2000 AX 1): [21] Noma A. ATP-regulate K" channels in cardiac mused J1. Nature,l983305:147收稿日期2001-03-05)藥物蛋白的聚乙二醇修飾姜忠義高蓉許松偉王艷強(qiáng)(天津大學(xué)化工學(xué)院天津3002)摘要旳較為系統(tǒng)地了解藥物蛋白的聚乙二醇修飾過程。方法根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)就聚乙二醇類修飾劑選擇、修飾反應(yīng)原理與操作條件、過程設(shè)計與產(chǎn)品純化、生物化學(xué)和生物學(xué)分析定性等問題作出簡要論述。結(jié)果與結(jié)論聚乙二醇修飾后的蛋白質(zhì)被賦予了許多新的物理化學(xué)和生物學(xué)特性以及臨床效果得到了明顯改善顯示了藥物蛋白的聚乙二醇修飾的良好應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞聚乙二醇沘學(xué)修飾藥物蛋白中圖分類號:TQ464.7R977.6文獻(xiàn)標(biāo)識碼∶文章編號:1001-24942002)6-0409-04作者簡介姜忠義男博士副教授Tc(022)7890882Fa(022)3513454 E-mail szhviian@ml, zdnet,com,cn蛋白質(zhì)藥物主要有蛋白質(zhì)激素和干擾素、血漿蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)類生長調(diào)節(jié)因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子、黏蛋白、膠原蛋白、mP5G-O-COCH2CH2O0O-N琥珀酰類CH oC堿性蛋白、蛋白酶抑制劑和植物凝集素、白細(xì)胞介素、集落刺O(CH, CHO)ncHm激因子等1。蛋白質(zhì)藥物由于具有作用專一、高效等特點(diǎn)PEG-0-C-N-C-C-OF而在人類健康中發(fā)揮著日益重要的作用。蛋白質(zhì)藥物的原HN—FEG—OHoP5G-O-COO--N異墻雙功能類料有動植物細(xì)胞和微生物細(xì)胞等非人體來源。若將非人體mPEG-O來源的藥物蛋白通過靜脈注射到人體后常常刺激機(jī)體的免甲酰胺類疫系統(tǒng)使之產(chǎn)生特異免疫應(yīng)答產(chǎn)生對該種蛋白的抗體。繼PEG-o-CH-CH-CHmPEG續(xù)注射該種蛋白就會產(chǎn)生過敏性反應(yīng)。即使不產(chǎn)生過敏反mEG=CH-(0CHbh-考應(yīng)免疫應(yīng)答也會導(dǎo)致蛋白質(zhì)的失活或加快蛋白質(zhì)的代謝mPEG= CH3-(OCH, CHz )n-OH從而降低藥物蛋白的療效21蛋白質(zhì)藥物的療效不僅取決圖1常用的PEC類修飾劑于蛋白質(zhì)特定的化學(xué)結(jié)構(gòu)而且還取決于其特定的空間結(jié)和修飾反應(yīng)形成的連接鍵類型有:①羥基琥珀酰胺脂類構(gòu)因此可以通過基因工程、化學(xué)修飾等手段部分或全部解〔NHs酯酰胺鍵)愆環(huán)氧化類(烷基鍵)羰基咪唑類(尿決蛋白質(zhì)藥物的缺陷其中化學(xué)修飾以其靈活多樣、簡便易烷鍵)④硝基苯基碳酸酯類尿烷鍵);三氟乙基磺酸酯類行的特點(diǎn)而得到了較為廣泛的應(yīng)用3烷基鍵)心醛類(N末端chif堿)1聚乙二醇類修飾劑PEG修飾劑通過伯胺基團(tuán)與蛋白質(zhì)的反應(yīng)常常會形成化學(xué)修飾劑與蛋白質(zhì)的反應(yīng)主要有酰化反應(yīng)、烷基化反不均一的偶合物。不均一主要是指蛋白質(zhì)分子中同一基團(tuán)應(yīng)、氧化和還原反應(yīng)芳香環(huán)取代反應(yīng)等。代表性的修飾劑被某一修飾劑修飾時其化學(xué)反應(yīng)性不相同以及不同的基團(tuán)有醋酸酐、乙酰咪唑、乙二醛、右旋糖苷、肝素、葡聚糖、乙二可以與同一種修飾劑發(fā)生同一性質(zhì)的反應(yīng)。為改進(jìn)修飾的酸/丙二酸的共聚物、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚不均一性對蛋白質(zhì)表面的其它官能團(tuán)進(jìn)行修飾的方法也有3乙二醇次甲基醚、乙烯順丁烯二酰肼共聚物聚氨基酸、大量的研究報道。這些官能團(tuán)主要包括游離的半胱氨酸寡多聚唾液酸、環(huán)糊精、聚乙二醇等其中以聚乙二釀PEG淡類糖、羥基等。用作修飾特殊位點(diǎn)的PEG衍生物有①乙烯基修飾劑應(yīng)用最多4磺酸修飾游離的半胱氨酸)碘乙酰胺(修飾游離旳半胱PEG是一種兩親性聚合物由重復(fù)的乙烯氧亞單元組氨酸)馬來酰膠修飾游離的半胱氨酸)正吡啶二硫化成每個乙烯氧亞單元的相對分子質(zhì)量為44PEG活性較物修飾游離的半胱氨酸)酰朓修飾寡糖)⑥異氰酸酯低無毒而且末端有兩個能被活化的OH基團(tuán)。為了獲得(修飾羥基或氨基單功能的PEG,一般將PEG的一端轉(zhuǎn)化為甲氧基或其它的2.2修飾反應(yīng)的影響因素烷氧基。除了線形PEG還有星形PEG,即通過中間物如賴影響PEG修飾過程的主要因素有蛋白質(zhì)濃度、蛋白氨酸、三嗪等將兩上或更多的PEG鏈連接在一起5質(zhì)與PEG修飾劑的摩爾比灣修飾反應(yīng)的pH值和離子強(qiáng)PEG類修飾劑與其他修飾劑相比毒性小無抗原性具有良好的兩親性且生物相容性已經(jīng)得到FDA認(rèn)證特別是度;③修飾反應(yīng)溫度④修飾反應(yīng)持續(xù)時間。通過正交實驗設(shè)計得到適宜的修飾反應(yīng)條件。通過對當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過PEG類修飾劑修飾后修飾劑的許多優(yōu)良性個或多個操作因素的控制就可以得到所需的連有單個質(zhì)也會隨之移植到修飾蛋白中。常用PEG類修飾劑見圖1。兩個、三個或多個PEG的蛋白質(zhì)偶合物。不同種類的PEG修飾劑表現(xiàn)在都能較容易地合成出來或直接購買但不同的修飾劑化學(xué)反應(yīng)性和純度等均有所不同。2.3PEG修飾過程設(shè)計蛋白質(zhì)的PEG修飾反應(yīng)可以在固相和液相中進(jìn)行據(jù)估計能阻礙腎和細(xì)胞清除的最佳PEG相對分子質(zhì)2.3.1液相反應(yīng)在典型的液相PEG修飾反應(yīng)中蛋白質(zhì)量為4萬~6萬6PEG與蛋白質(zhì)偶合時有三種不同的方式71單個大分子量PEG修飾蛋白質(zhì)的單一位點(diǎn)星形PEC與PEG的摩爾比一般為1:3~5反應(yīng)pH值維持在7-8之間溫度保持在4~8℃反應(yīng)持續(xù)8~16h然后用冰醋酸調(diào)兩個或更多的中等分子量PEG通過交聯(lián)連接在一起修飾節(jié)pH值到45來終止反應(yīng)。反應(yīng)混合物用水稀釋后在陽離蛋白質(zhì)的單一位點(diǎn)汎幾個小分子量PEG修飾蛋白質(zhì)的多個子交換柱上進(jìn)行吸附分離將剩余的PEG和反應(yīng)副產(chǎn)物洗位點(diǎn)。理論上因為在受體結(jié)合域內(nèi)受體與PEG結(jié)合的機(jī)掉。修飾蛋白與未修飾蛋白可以通過提高緩沖液中鹽的濃會減少單一位點(diǎn)被PEG修飾的蛋白質(zhì)應(yīng)該有較高的活性。度來分離。典型的純化方法如下所示。多位點(diǎn)的PEG修飾或大分子量PEG的應(yīng)用往往會導(dǎo)致蛋白質(zhì)部分或全部失去生物活性8-11聚乙二醇修飾反應(yīng)→酸化→亠稀釋→陽離子交換→洗濾→過濾→干燥2修飾反應(yīng)2.3.2固相反應(yīng)在固相的PEG修飾反應(yīng)中蛋白質(zhì)被吸2.1修飾反應(yīng)的類型與途徑12-13最常用的修飾反應(yīng)是親電活化的PEG修飾劑與賴氨酸附到離子交換柱上在規(guī)定的時間內(nèi)PEG修飾劑不斷地循F氨基或帚白質(zhì)N末端的氨基反應(yīng)典型的PFG修飾劑環(huán)流過柱子。反應(yīng)結(jié)束后用緩沖液將過量的PEG和其它變緩沖液中鹽的濃度將修飾蛋白脫附下來。分析洗脫液確藥物蛋白被PEG修飾后在臨床應(yīng)用中顯示岀優(yōu)良性質(zhì)。具定蛋白質(zhì)的修飾度。柱子用相同量的未修飾蛋白再生以便體體現(xiàn)有物理和熱穩(wěn)定性的增強(qiáng),對酶降解敏感程度的降下次循環(huán)操作時能夠保持相同蛋白質(zhì)濃度。同上所述,低溶解度的增大在體內(nèi)循環(huán)半衰期、清除時間的增長免PEG再一次循環(huán)進(jìn)行修飾反應(yīng)然后再修飾蛋白脫附下來。疫原性和抗原性的降低及毒性的減小等。另外修飾的作用在固相PEG修飾過程中反應(yīng)、分離、提純能夠在同一根柱還表現(xiàn)在體內(nèi)活性提高而體外活性降低。該作用在集落刺子上進(jìn)行并且能重復(fù)多次激因子( GM-CSF白介素2(2廂和白介素6I16)腫瘤3修飾蛋白的分析與表征壞死因子TNFa)γ干擾素IFNy及其它生物分子上也得3.1蛋白濃度的測定151到了體現(xiàn)24類似與普通的蛋白質(zhì)濃度測定紫外分光光度法、 LowryPEG修飾后的蛋白還具有下述優(yōu)點(diǎn)生物分配行為變法、二寧可辛酸BCA法、 Bradford法或其它一些更可靠和準(zhǔn)化生物學(xué)性質(zhì)變化灣膜的滲透性提高。很小劑量就能確的氨基酸組成分析方法等均可用于修飾蛋白的濃度測定。取得持久臨床效應(yīng)從而提高了生命質(zhì)量降低了治療成本。3.2 SDS-PAGE分析般PEG偶合的生物大分子與未修飾的分子相比呈按照 Laemmle所敘述的方法進(jìn)行 SDS-PAGE實驗,首現(xiàn)出不同的物理、化學(xué)性質(zhì)。這些改變的性質(zhì)包括構(gòu)象、空先對凝膠進(jìn)行特異性染色針對PEG的染色方法采用改進(jìn)間位阻、靜電結(jié)合性質(zhì)、疏水性、賴氨酸的pK可用來衡量可的 Kurfurst方法。 SDS- PAGE凝膠用蒸餾水淋洗后漫泡在逆反應(yīng)的完成程度和等電點(diǎn)。與受體連接的親和力經(jīng)常受5%的氯化鋇溶液10min再用蒸餾水將氯化鋇洗掉漫泡在到這些物理化學(xué)性質(zhì)變化的影響因而以細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外0.1modL- I TitrisolTs(碘溶液)0min然后再用蒸餾水將活性檢測測得值有所降低。藥物蛋自在體內(nèi)的生物活性與Titrisol「洗掉將凝膠浸泡在蒸餾水中裝入經(jīng)過熱密封的偶合的PEG量有著正比的關(guān)系。然而體外的生物活性卻Kapak/ Scotchpak袋中避光保存。與偶合的PEG量呈反比見圖1。蛋白質(zhì)被PEG修飾后延由于PEG分子的反常泳動性,以蛋白質(zhì)的標(biāo)記物作為遲了它在腎臟中的清除反過來又延長了它的循環(huán)半衰期。對照時 SDS-PAEG分析得到分子量要比實際的分子量要在以細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外活性檢測時,于培養(yǎng)時間是固定高。為了避免這個問題,可以采用PEG作為標(biāo)記物同時進(jìn)的PEG修飾后的生物分子半衰期的提高并不能得到顯示。行針對PEG的凝膠特異性染色。在相對較短的培養(yǎng)時間內(nèi)PEG修飾后的蛋白質(zhì)與受體間的3.3分子量的測定和分析161親和力較低導(dǎo)致活體外生物活性降低。質(zhì)譜是確定不同種類PEG修飾蛋白分子量的一種較為理想的方法。新近研究岀的基質(zhì)輔助激光解析飛行時間質(zhì)譜方泫(英文縮寫 MALDI TOF MS不僅能夠研究PEG修飾蛋白的分子量還能分辨出修飾蛋白的具體種類3.4修飾位點(diǎn)和位置異構(gòu)體的檢澌17-181修飾位點(diǎn)和位置異構(gòu)體的檢測一般是各種技術(shù)綜合分PEG相對分子質(zhì)量/×103析的。這些技術(shù)包括離子交換液相色譜、分子排阻色譜、肽圖、 Edman序列、氨基酸分析及 MALDT TOF MS。PEG修圖1體內(nèi)外生物活性與PEG摩爾質(zhì)量的關(guān)系飾后的蛋白質(zhì)分子可能出現(xiàn)的位置異構(gòu)體可以用下列公式由未修飾的蛋白質(zhì)、偶合了單個、二個、三個和更多PEG計算。的蛋白質(zhì)組成的混合物復(fù)配使用可能會更好。理論上修飾對于有N個位點(diǎn)可被修飾的蛋白質(zhì)假定一次修飾K度越高吸附速率越低延長了循環(huán)持續(xù)時間)受體的飽和個位點(diǎn)那么可能的位置異構(gòu)體數(shù)目等于N![(N-k)!度越低。由于吸附速率的不同而導(dǎo)致的上述混合物呈現(xiàn)重迭生物活性見圖2。3.5蛋白質(zhì)的PEG修飾的指導(dǎo)原則19~201制備蛋白質(zhì)的PEG修飾時應(yīng)當(dāng)考慮以下幾點(diǎn):出發(fā)原料蛋白質(zhì)和PEG修飾劑)的性質(zhì)要了解清楚;PEG修飾后的蛋白質(zhì)是一種新型分子:它既不是蛋白質(zhì),也不是PEG而是兩者的雜合物③PEG修飾位點(diǎn)和化學(xué)計量關(guān)系應(yīng)該確定恿應(yīng)保持制備過程的批次一致性修飾劑和修時間/min飾蛋白的制備應(yīng)該通過認(rèn)證。4修飾蛋白的生物學(xué)特性4.1生物活性21-221圖2耦合不同PEG數(shù)目(0,12,3個)蛋白質(zhì)的體內(nèi)生197年, Abuchowsk等23羥經(jīng)實驗證明PEG修飾后的物活性重疊示意將PEG修飾后的蛋白質(zhì)注射到動物體內(nèi)時,呈現(xiàn)出比[10] Rameshraja P, Huashan W,Anil G. Current aspects in pharmacol未經(jīng)PEG修飾的蛋白質(zhì)更好的藥動學(xué)性質(zhì)。由于血清循環(huán)ogy of modified hemoglobin[ J]. Ade Drug Delin Review 2000半衰期和血漿保留時間都比未修飾的蛋白質(zhì)高得多因而生[11]印春華張敏蛋白質(zhì)和多肽類藥物的PEG結(jié)合物物活性保持時間更長。新型給藥系統(tǒng)J]中國藥學(xué)雜志2001365)292.4.3免疫原性12 Zalipsky S, Menon-Rudolph S. Hydrazide derivatives of polyPEG修飾后的蛋白質(zhì)的免疫原性會有顯著地降低當(dāng)修(ethylene glycol and their conjugates[ A ] In: Harris JM edn ethylene glycol ) Chemistry Biotechnical and Biomedical飾度超過一定值時免疫原性會消失。Application M ]. 2nd ed. New York Plenum press, 19983194.4毒性13 Abuchowsky A Coy JR Palezuck CN ,et al. Alteration of immuPEG修飾后蛋白質(zhì)的毒性一般都比未修飾后的蛋白質(zhì)logical properties of bovine serum albumin by covalent attachment的毒性低。但是使用低分子量的PEG作為修飾劑時,修飾of poly ethylene glycol I J]. J Biol Chem 1997 2 3578蛋白有時還是存在一定毒性。靜脈注射或肌內(nèi)注射少量[141 Nathan A Zalipsky S Kohn. trategies for covalent attachmentPEG時并未觀察到毒性。只有長期和大量地使用PEG時(ether urethane I J ].J Bioact Comp Pol 19949 239才有可能引發(fā)毒性。所以PEG修飾蛋白如細(xì)胞素、酶、荷爾[15] Habeeb AFSA. Determination of free amino groups in proteins by蒙一般不會呈現(xiàn)毒性。trinitrobenzensulphonic acid J ] Anal Biochem, 1966, 14 328[16] Gotoh Y, Tsukada M, Minoura N Chemical modification of silk5結(jié)語fibroin with cianuric chloride-activated poly ethylene gly-col經(jīng)過PEG修飾的藥物蛋白不僅較高地維持原藥的生物analyses of reaction site by H-NMR spectroscopy and conforma-tion of the conjugate J ] Bioconjug Chem. 1993 A.54活性而且能夠有效地降低或消除其免疫原性和毒性。同[17] Veronese FM Sacca B Schiavon o et al. PEG-Peptide and Pro時由于分子量和交聯(lián)度的增加,修飾后的藥物蛋白的循環(huán)ein Delivery a Procedure to Identify the PEG ylation Site.半衰期顯著延長。從而顯示了藥物蛋白的PEG修飾的良好26th Proc[ M ]. Boston: Int Symp Controlled Release Bioact的應(yīng)用前景。[18 Snyder SL ASobocinsky PZ. An improved 2 4, 6-trinitroben-ne參考文獻(xiàn)sulphonic acid method for the determination of amined[ J ]. Anal[1]周文孝袁慶輝聚乙二醇在生化藥物化學(xué)修飾中的應(yīng)用JBiochem 1975 64 284國藥學(xué)雜志19973x(3)132[19] Bovara R ,Ottolina G CareaG et al. Modification of lipase from[2]畢愛華醫(yī)學(xué)免疫學(xué)M]北京民軍醫(yī)出版社,199593Psendomonas sp. with poly acryloyl morpholine )and study ofroperties in orgamic solvent[ J ] Biotechnol Lett[3] Kodera Y, Matsushima A, Hiroto M ret al. Pegylation of proteins199416:1069and bioactive substances for medical and technical applications [201 Kozlowski A, Harris JM. Improvements in protein PEG ylation[JJ. Prog Polymer Sci, 1998 23: 1233rylation interferons for treatment of hepatitis a J IJ Con Rel[4] Veronese FM. Peptide and protein PEG ylation: A review of200172217problems and solution J ]. Biomaterials 2001 22 :05[21 Abuchowski A, Van ET, Palczuk NC, et al. Alteration of im-[5] Pasacal B, Wolfgang B. Polyethylene glycol-conjugated pharma-unological properties of bovine serum albumin by covalent atceutical protein J]. PSTT, 1998,1(8)352tachment of polyethylene glycol[ J ]. Biol Chem,1977,252[6] Katre NV, The conjugation of proteins with poly ethyleneglycoland other polymers. Altering properties of proteins to enhance [22 Hershfield MS Biochemistry and immunology of poly( ethylenetheir therapeutic potentia[ J]. Adv Drug Deliv Rev 1993,10glycol )Modified adenosine deaminase[ A ]. In Harris JM Zalip-sky eds. S-Pol( ethylene glycol )Chemistry and Biological Ap-[7] Monfardini CS Branched monomethoxypoly ethylene glycol )forplication( M ]. Washington: American Chemical Society, 1998protein modification J ] Bioconj Chem 1995 6]2[8] Veronese FM, Morpurgo M. Bioconjugation in pharmaceutical[23]洪民宋文俊聚乙二醇大分子化豬血紅蛋白對其攜氧特性的chemistr[ J]. Inter J Pharmaco 1999 54 497影啊J]生物工程學(xué)報200016(1)22[9] Zalipsky S Chemistry of poly ethylene glycol )conjugates with [24] Farruggia B, Nerli B, Nuci HD ,et al. Thermal features of thebiologically active molecule JJ Adv Drug Deliv Rev 1995,16bovine serum albumin unfolding by polyethylene glycol J]. Inter Biological Macromol, 1999 223收稿日期2001-01-18)醫(yī)藥信息裕隆世紀(jì)文化傳播中心擁有龐大的醫(yī)療資訊數(shù)據(jù)庫能夠為您提供醫(yī)藥特別是生物醫(yī)藥全方位的信息咨詢服務(wù)。內(nèi)容包括藥物研究發(fā)展動態(tài)信息國外有關(guān)生物制藥公司產(chǎn)品、市場分析數(shù)據(jù)相關(guān)藥物競爭情報:場研究報告醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展分析報告醫(yī)藥研究成果資料知識產(chǎn)權(quán)信息包括醫(yī)藥產(chǎn)品專利信息和商標(biāo)信息。該公司還可接洽專項生物醫(yī)藥研究發(fā)展項目咨詢服務(wù)包括項目論證、醫(yī)藥產(chǎn)品研究發(fā)展立項、市場調(diào)研等。聯(lián)系電話(0102117390:1364103262(手機(jī))聯(lián)系人杜云;mailseliawoc@yaho.com刊訊