152中國生化藥物雜志Chinese Joumal of Biochemical Pharnaceutics 2007年第28卷第3期聚乙二醇化重組復(fù)合干擾素對小鼠免疫功能的影響研究趙媛',趙偉',姚文兵',趙艷玲，高向東'(1.中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇南京210009; 2.解放軍第302醫(yī)院，北京100039)摘要:目的研究聚乙二醇化重組復(fù)合干擾素(PE-IFNcom)對小鼠免疫功能的影響。方法以重組復(fù)合干擾素(IFNcon,商品 名:干復(fù)津)為對照,分別采用雞紅細(xì)胞吞噬法和四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法測定巨嗜細(xì)胞吞噬功能和淋巴細(xì)胞增殖作用,以3H-TdR摻入法測定刀豆蛋白A(Con A)誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖活動。結(jié)果PEG IFNeon能提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能,顯著改善環(huán)磷酰胺所致的小鼠淋巴細(xì)胞功能降低作用,在50~ 150 rg/mL劑量范圍內(nèi)亦能增強(qiáng)小鼠Con A誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。結(jié)論PEC-IFNeon 可顯著增強(qiáng)小鼠免疫功能。關(guān)鍵詞:聚乙二醇化復(fù)合干擾素;復(fù)合干擾素;巨嗜細(xì)胞吞噬;淋巴細(xì)胞增殖;免疫功能中圖分類號:R978.7; R965文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1005-1678(2007 )03-0152-03Study on the effect of pegylatied recombinant consensus interferon onimmuno-function in miceZHAO Yuan' , ZHAO Wei' ，YAO Wen-bing' ，ZHAO Yan- ling2 , CAO Xiang dong'(1. School of Life Science and Technology, China Pharmaceuical University， Nanjing 210009，China;2. No . 302 Hospital of Chinese PLA, Beijing 100039, China )Abstract: Purpose To study the efcts of pegylated recombinant consensus interferon( PEG-IFNcon) onthe immuno-function of rats . Methods The tests were carried out with the PEG- IFNcon by contrast of recombi-nant consensus interferon( Infergen , IFNcon) . The chicken red blood cells( CRBC) phagocytosis assay and theMTT assay were used to evaluate the phagocytic ability of peritoneal macrophage( Mφ )and lymphocyte prolifer-ation respectively. Proliferation of splenocytes in response to ConA was detected by 3 H-TdR labeling.Results PEG- IFNcon significantly increases the phagocytic of peritoneal macrophage( Mq) , remarkably revers-es, the immunological inhibition caused by cyclophosphamide and assists the proliferation of lymphocyte in-duced by ConA at the dose of 50- 150 ug/ mL. Conclusion PEC IFNcon could significantly stimulate the immu-nity function in mice.Key words:pegylated consensus interferon; consensus interferon; the phagocytic ability of M中; lympho-cyte proliferation; immuno-function20世紀(jì)90年代以來，干擾素聚乙二醇化技術(shù)毒作用通過抑制病毒復(fù)制及廣泛的免疫調(diào)節(jié)雙重模發(fā)展迅速,并已成功應(yīng)用于臨床。聚乙二醇化干擾.式對病毒進(jìn)行抑制,其免疫調(diào)節(jié)功能通過包括激活素(PEG-IFNcon)理化性質(zhì)及藥動學(xué)性質(zhì)與未修飾干T 輔助細(xì)胞;激活抗原提呈細(xì)胞等多種途徑進(jìn)擾素相比均有顯著變化叫。與目前臨床常用的乙肝行(23。 本文以相對分子質(zhì)量(M,)為40 000的支鏈治療藥物核苷和核苷酸類似物抗病毒單---作用模式型PEG-IFNcon和未經(jīng)修飾的重組復(fù)合干擾素(IFN-抑制病毒DNA逆轉(zhuǎn)錄不同,a干擾素( IFN-a)的抗病con,商品名:干復(fù)津)為研究對象,觀察對PEG-IFN-col1中國煤化工收稿日期: 2006-05-15; 修回日期: 2006-06-28THC NM !!藥科大學(xué)生命科學(xué)基金項目:“十五*863計劃(No. 20422380作者簡介:趙媛(1981-),女,北京人,在讀碩士研究生，主要從事與技術(shù)學(xué)院,批號:050201;IFNcon注射液(商品名:生物新藥開發(fā)研究;姚文兵,通信作者,教授,博士生導(dǎo)師,Tel; 025-干復(fù)津),日本山之內(nèi)制藥株式會社,批號:040703;83271225, E-mail: wbyao @ cpu. edu. en。谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨中國生化藥物雜志Chinese Joumal of Biochemical Pharmaceutics 2007年第28卷第3期153酶(GOT)測定試劑盒,北京北化康泰臨床試劑有限數(shù)/巨噬細(xì)胞總數(shù))x 100%(1)公司;環(huán)磷酰胺(Cy)粉針劑,江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限吞噬指數(shù)=被吞噬雞紅細(xì)胞總數(shù)/巨噬細(xì)胞公司,批號:01060821;植物血凝素(PHA),Sigma公總數(shù)司,批號:L8754。2.4 PEG-IFNcon 對Cy導(dǎo)致的免疫低下小鼠腹腔巨二氧化碳孵箱,Shel-Lab公司;培養(yǎng)瓶,Tunclon噬細(xì)胞吞噬功能的影響公司;培養(yǎng)板96孔板, Corming公司。實驗設(shè)正常對照組、Cy模型組、Cy+IFNcon組、BALB/c小鼠,體重18~22 g,雌雄各半,中國生Cy+ PEG-IFNcon組。每組10只，腹腔注射給予小鼠物制品檢定所動物中心,動物合格證號:SCXK11-00-Cy 15 puy/kg,1次/d,Cy連續(xù)處理4d后皮下注射給0010。藥,每次0.4 mL/只,Cy + IFNcon 組1次/d,Cy +2方法PEG-IFNcon組1次/2d。給藥第6天處死動物取2.1 PEG-IFNcon體外對正常小鼠淋巴細(xì)胞增殖反樣。取樣及測定方法同2.3項。應(yīng)的影響2.5數(shù)據(jù)分析取健康成年雌性小鼠脾臟,制備單細(xì)胞懸液,以試驗數(shù)據(jù)以(無士s)表示,以t檢驗法計算各組20%小牛血清的RPMI 1640液稀釋細(xì)胞至5x 106/間數(shù)據(jù)差別的統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.05差異顯著,P0.05);各組心、對ACE有抑制作用,但在體內(nèi)不能發(fā)揮降壓作用，腦、腎等臟器ACE活性比較無顯著性差異其原因主要是多肽被體內(nèi)消化酶(消化系統(tǒng)等)降解(P>0.05)?；虿荒鼙晃誟7]。本研究表明玉米降血壓肽能明顯2.4玉米降血壓肽對 SHR血漿AngII 的影響抑制體內(nèi)外ACE活性,而且對不同部位的ACE抑制連續(xù)給藥12周后,對照組、卡托普利組及玉米作用不同,其原因尚需通過進(jìn)一步的藥物吸收及代降血壓肽低、中、高劑量組SHR血漿中AngII濃度分謝動力學(xué)研究來闡明。別為:(1 278土141),(567 士75),(598土63),(764土參考文獻(xiàn):26),(965土61)pg/mL(n=8)?？梢?玉米降血壓肽[1]趙海珍,陸北新,劉戰(zhàn)民.天然食品米源的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑各劑量組和卡托普利組SHR血漿AngI濃度顯著低制肽的研究進(jìn)展[J].中國生化藥物雜志,00.25(5);315-317.[2] Yamanoto N. E Masahiro, M Seichi. Biogenic peptides and their polen-于對照組(P<0.01),與卡托普利組比較,玉米降壓tial use[J] Curr Pharm Desi ,2003 ,9(1): 1345-1355.肽高劑量組Ang II濃度無顯著性差異(P> 0.05),中.[3] 曹文紅，秦九明，章超樺,等.中國毛蝦ACE抑制產(chǎn)物的酶法制劑量和低劑量組則差異顯著(P<0.01)。備及其降低原發(fā)性高血壓大鼠血壓的效果[J].中國生化藥物3討論雜志,2005.26(6) :39-343.ACE催化AngI轉(zhuǎn)化成具有強(qiáng)收縮血管作用的.[4]陳河如,徐志誠.測定心血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑體外抑制動力學(xué)的反相HPLC法[J]分析測試學(xué)報，199,18(1):69-.1.AnglI ,導(dǎo)致血壓升高,而ACEI通過抑制ACE活性[5] Owens G K, Radinovich P S,Schwartz s M . Smoouh muscle cell hyper-而抑制血壓升高。ACEI 對ACE為競爭性抑制，但.trophy versus hyperplasia in hypertension[J]. Proe Natl Acad Sci,AHP對ACE的抑制機(jī)制文獻(xiàn)報道不一,作者認(rèn)為其1981 ,78(12) :79-77636.抑制機(jī)制可能與降血壓肽的結(jié)構(gòu)關(guān)系密切15-6)。本[6] Corvol P, Michaud A,Soubrier F,et al. Reent advances in knowledge研究表明,玉米降血壓肽對ACE為競爭性抑制。of the structure and function of the angiolensin I convering enzyme[J].J Hypetens, 1959.13(3) :S3-S7.ACE主要存在于血管、腎、腦、肺等的內(nèi)皮細(xì)胞、[7] Fujia H, Yokoyama K, Yoshikawa M. Casficationin and anihyperten-上皮細(xì)胞、神經(jīng)上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、血漿和體液.sive of angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides derived from中,種屬變異不大。研究證明,許多降血壓肽在體外food proteins[J].J Food Sc:,000,65(4) :564-569.(上接第154.頁)[3] Brassard D L, Grace M J, Bordens R W, Interferon-alpha as an im-infection[J]. Expert Opin Pharmacother ,2005 ,6(8) : 1373-1380.munotherapeutic protein[J].J Leukoc Biol ,2002,71(4) :565-681.[8] Chan H L, Leung N w ,Hui A Y,et al. Aranomized, cotroldl trial of司傳平.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,999:659. .， fnr crhmonie hentitis B:comparing pegylated inter-[s]陳奇. 中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 1993:中國煤化工。aone[J]. Anm Imtem Med,750.751.YHCNMHG[6] 萬漠林.慢性乙型肝炎治療的現(xiàn)狀及前景[J].中華傳染病雜[9] FeldJ,LeeJ Y,Locarmini 5. New targets and possible new therapeutic志,2002 ,20(1):57.approaches in the chemotherupy of chronic hepatitis B[J]. Hepatology,7] Cooksley W C. Peginerferon alpha2a for the treatment of hepatis B2003 ,38(3):545-553.