第28卷,第4期光譜實(shí)室Vol. 28, No. 42011年7月Chinese Journal of spectroscopy LaboratoryJuly 20 1 1紫草的提取工藝喻錄容韓憲忠①(重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院重慶市沙坪壩區(qū)虎溪鎮(zhèn)大學(xué)城中路401331)a(重慶市第三人民醫(yī)院藥劑科重慶市4000】4)摘要對(duì)紫草提取工藝中各參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,為紫草工業(yè)化提取提供一定的參考;以左旋紫草素含量的測定為工藝指標(biāo),通過正交設(shè)計(jì)試驗(yàn),對(duì)乙醇濃度,乙醇體積浸泡時(shí)間,及滲漉時(shí)間各因素進(jìn)行了考察;紫草最佳提取工藝為:5倍量80%乙醇浸泡16h,再加10倍量80%的乙醇滲漉4h;適宜工藝為:5倍量80%乙醇浸泡12h,再加10倍量80%的乙醇慘漉4h;本工藝設(shè)計(jì)合理,工藝穩(wěn)定,左旋紫草素提取率高質(zhì)量可控,適宜于工業(yè)化生產(chǎn)關(guān)鍵詢紫草;左旋紫草素;正交試驗(yàn);提取工藝中圖分類號(hào):0657.7+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1004-8138(2011)04-2055-041引言紫草甘寒,涼血活血。近年來研究顯示,紫草具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的活性,有明顯的抗過敏作用。臨床用于治療過敏性疾病獲得良效如過敏性紫癜、過敏性鼻炎。主要成分有紫草素、乙酰紫草素等。本文通過對(duì)紫草進(jìn)行提取工藝的研究,為工業(yè)化大生產(chǎn)提供一種質(zhì)量可控、工藝穩(wěn)定的提取方法。2實(shí)驗(yàn)部分21試劑與藥品左旋紫草素對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào):110769-200405);95%乙醇[分析純,重慶川東化工(集團(tuán))有限公司化學(xué)試劑廠];甲酸(分析純,重慶北碚化學(xué)試劑廠);乙腈(色譜純江蘇漢邦科技有限公司)。實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水(自制)2.2實(shí)驗(yàn)儀器agilent110高效液相色譜儀(美國安捷倫公司) agilent8453紫外分光光度計(jì)(美國安捷倫公司); Agilent色譜工作站(美國安捷倫公司);AL-204電子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司);DJ2003電子天平(沈陽龍騰電子有限公司);KQ500B超聲清洗儀器(昆山市超聲儀器有限公司);滲漉柱(φ=90cm×700mm,重慶市渝北區(qū)科教玻璃儀器廠);滲漉柱(φ=70cm×50mm,重慶市渝北區(qū)科教玻璃儀器廠中國煤化工CNMHG①聯(lián)系人,手機(jī);(0)15683815103(0)13251403598;(0)13101327285;EmmJ403,connyurong4976@163.com作者簡介:喻錄容(1976-),女,重慶市人講師碩士,主要從事天然產(chǎn)物研究工作收稿日期:2011-05-19;接受日期:2011-07-012056光譜實(shí)驗(yàn)室第28卷2.3藥材處方所用紫草購自重慶仲景醫(yī)藥有限責(zé)任公司經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)中藥教研室林於副教授鑒定紫草為紫草科植物新疆紫草[ Arnebia euchroma(Ryle) Johnst.]的干燥根,質(zhì)量符合《中國藥典》2005年版一部紫草項(xiàng)下的有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定。2.4實(shí)驗(yàn)方法紫草中主要含萘醌色素類物質(zhì)難溶于水易溶于乙醇、石油醚、氯仿乙酸乙脂等有機(jī)溶劑1-4。參考文獻(xiàn)[5-7],考慮到生產(chǎn)成本和實(shí)際生產(chǎn)情況,本文選擇乙醇作為溶劑進(jìn)行滲漉提取。經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn),選用乙醇濃度、乙醇用量浸泡時(shí)間滲漉時(shí)間4個(gè)因素每個(gè)因素3個(gè)水平,按L2(3)正交表進(jìn)行試驗(yàn),見表1表2。褻1因與水平水平因素A乙醇濃度(%B乙醇體積(倍)C浸泡時(shí)間(h)D滲漉時(shí)間(h)稱取紫草粗粉9份,每份20g按表2安排試驗(yàn),分別接收全部滲漉液滲漉液搖勻過濾,取漶液適量,用0.45m微孔濾膜過濾續(xù)濾液作為左旋紫草素含量測定的供試液。按上述建立方法測定并計(jì)算從藥材中提取出左旋紫草素的含量。藥材中左旋紫草素含量為0.04689%試驗(yàn)結(jié)果見表表2L(34)正交設(shè)計(jì)結(jié)果表因素結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào)B左旋紫草素(%)0.036640.041000.036120.101000.08215085690.113760.114760.109140.109440.107230.112930.10901I0.033670.027380.027360.028560.0297900.037640.036340.008100.01087中國煤化工3結(jié)果與討論CNMHG3.1結(jié)果分析從24節(jié)可以得知影響因素順序?yàn)锽>C>A>D,最佳條件為A2B2CD2。根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)第4期喻錄容等:紫草的提取工藝2057果浸泡時(shí)間12h(C2)和16hC3)只相差3.46%。對(duì)方差分析中由于因素A的離差平方和最小,把其作為誤差項(xiàng),方差分析結(jié)果因素A、B、C、D對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均無顯著差異,可能是由于紫草本身質(zhì)地比較疏松因此有效成分較易提取出來。結(jié)果見表3褻3方差分析表離差平方和均方方差來源自由度F值值(×10-5)×10-5)1.0>0.05ABc19.0>0.05D12.0差A(yù)10.025.0注;Faa1(,)=99.0;Fa(,=19.0考慮到節(jié)約成本和簡化工藝,擬將提取工藝確定為A2BC2D2,并將擬定工藝與最佳工藝進(jìn)行試驗(yàn)比較,結(jié)果見表44最佳工藝和擬定工藝試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)條件序號(hào)左旋紫草素含量(%)04最佳工藝條件0.0433A2B2 C3D31230.0412平均0.0426擬用工藝條件A B.C2Dz0.0122平均0.0122擬用工藝比最佳工藝減少(%)試驗(yàn)結(jié)果顯示,擬定工藝和最佳工藝各指標(biāo)差異不大,左旋紫草素含量最佳工藝比擬定工藝略高,故為了節(jié)約成本縮短生產(chǎn)周期確定采用擬定工藝,即紫草粉碎成粗粉,用5倍量80%乙醇浸泡12h,再加10倍量80%的乙醇滲漉4h3.2驗(yàn)證試驗(yàn)按優(yōu)化擬定工藝條件A2BC2D2重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次結(jié)果見表5表5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)方案Az B2C2D實(shí)驗(yàn)號(hào)左旋紫草素含量(%0.04270.04200.0430平均含量(%)0.0426實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,所選工藝條件合理、可行,工藝穩(wěn)定且重現(xiàn)性好結(jié)論紫草中有效成分含量測定方法《中國藥典》以羥卻V凵中國煤化工方法采用紫外可見分光光度法,測定其含量。但這樣的含量測定顯得比CNMHG中的主要有效成份的含量,本文參考文獻(xiàn)[10-12],采用HPLC測定其中的主要有效成分左旋紫草素,且操作方便,定量準(zhǔn)確,實(shí)用性強(qiáng)。因此,本實(shí)驗(yàn)選用HPLC測定提取液中左旋紫草素的含量。現(xiàn)代研究表明,紫草中所含羥基萘醌色素類物質(zhì)具有較強(qiáng)抗過敏、抗炎作用,調(diào)節(jié)鼻黏膜血管2058光譜實(shí)驗(yàn)室第28卷收縮、舒張功能,以及改善局部血液循環(huán)的作用也具有明顯的抗生育抗腫瘤殺菌抗病毒保肝和免疫調(diào)節(jié)等作用。根據(jù)藥材所含主要活性成分的理化性質(zhì),并結(jié)合工業(yè)化生產(chǎn)實(shí)際要求,選用乙醇來進(jìn)行提取如果選用其他有機(jī)溶劑提取不僅會(huì)增加成本,還有可能帶入有害雜質(zhì)加大了最終產(chǎn)品的毒副作用。通過正交試驗(yàn),以左旋紫草素的含量為測定指標(biāo),優(yōu)選出了紫草提取的最佳工藝條件,并據(jù)此制定出紫草的提取工藝:紫草粉碎成粗粉,用5倍量80%乙醇浸泡12h,再加10倍量80%的乙醇滲漉4h。本工藝設(shè)計(jì)合理,工藝穩(wěn)定,左旋紫草素提取率高,質(zhì)量可控,適宜于工業(yè)化生產(chǎn)參考文獻(xiàn)[1]戴冰周新蓓尹愛武等新疆軟紫草四種溶媒系統(tǒng)提取物紫草素含量測定及急性毒性的實(shí)驗(yàn)研究[]中國中醫(yī)藥科技,200513(3):168-169.[2]劉曉華易建勇紫草提取純化工藝優(yōu)選及穩(wěn)定性研究[.中藥材,2001,24(5):357-358.[3]楊曉笛,盧鋒黃美充等中藥紫草有效成分的提取[]汕頭大學(xué)學(xué)報(bào),2002,17(4):67-70.[4]喬秀文但建明曾憲佳等新疆紫草總萘醌色素的理化性質(zhì)研究[門]廣州食品工業(yè)科技,2004,20(2);70-7.[5]楊秀芳紫草提取工藝的優(yōu)化[門陜西科技大學(xué)季報(bào),2004,22(4):35-37[6]汪征明,利華強(qiáng)孫俊軍正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方紫草袖的制備工藝[]安徽醫(yī)藥,2005,9(8):571-572[7]嚴(yán)炎中徐雯宇曹國建正交試驗(yàn)優(yōu)選紫草素的微波提取工藝[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2005,24(4)1327-328.[8]周俊偉正交試驗(yàn)法優(yōu)選厚樸酚提取工藝[門陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,29(6):5960.[9]姚干,何親玉,方積年黃芩總黃酮提取及純化工藝的研究[門]中威藥,2006,28(11)1568-1571[10]孟憲生沙明曹愛民等HPLC法測定紫草及其制劑紫金油中左旋紫草素的含量[門]中草藥,200134(7)615-61611]伍毅HPLC法測定紫草油中左旋紫草素的含量[]中藥新藥與臨床藥理,2005,16(1)166-68[12]張善玉樸美蘭李梅等高效液相色譜法測定紫草涂膜劑中紫草素的含量[門時(shí)珍國醫(yī)國藥,20,14(12):729-730Extraction Technology of Arnebia Euchroma(Royle)JohnstYU Lu- Rong HAN Xian-Zhong(Institute of Traditional Chinese Medicine, Chongging Medical University, Chongging 401331, P. R. China)a(Department of Pharmacy. The 3rd People' s Hos pita! in Chongqing. Chongging 400014, P. R. china)Abstract The each parameter of the extraction technology of Arnebia euchroma(Royle)Johnsoptimized, in order to provide the certain reference for industrialization extraction of arnebiaeuchroma(royle)Johnst., the various factors, including alcohol concentration, alcohol volume, soakintime and infiltration time, were investigated by the orthogonal design experiment with determinationof L-shikonin content as technology index. The optimal extration technology of Arnebia euchroma(Royle)Johnst was as follows: concentration alcohol of 80% for 5 times, soaking time of 16h andinfiltration time of 4h by 10 times 80% alcohol. The appropriate technology was as follows: soakingtime of 12h by 5 times 80% alcohol and infiltration tin vhnology is rational design, stable technology, high extYH中國煤化工0% alcohol.TheCNMHGn and controlleduality, and that suits to industrialization productionKey words Arnebia Euchroma( Royle)Johnst; L-shikonin; Orthogonal Test; ExtractionTechnology