LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL. 21 NO. 3時珍國醫(yī)國藥2010年第21卷第3期芍藥苷的水解動力學(xué)研究劉倩,劉永剛,李繼安°,喇萬英1.華北煤炭醫(yī)學(xué)院河北唐山063000;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,北京100102)摘要:目的考察芍藥苷在不同pH條件下的水解情況。方法 Diamonsil-C1色譜柱(250mmx4.6mm,5μm);流動相為乙腈-0.1%的甲酸水溶液(15:85);檢測波長為230m;進樣量為10μ;柱溫為室溫,流速為1.0ml·min'。結(jié)果芍藥菩對照品在0.0215-0.215范圍內(nèi),進樣量與峰面積間呈良好的線性關(guān)系,r=0.99,并得到不同pH條件下的水解動力方程。結(jié)論芍藥苷的水解符合一級動力學(xué)模型。在不同pH條件下,芍藥苷的水解速度不同。關(guān)鍵詞:芍藥苷;水解動力學(xué);高效液相色譜中圖分類號:R284文獻標(biāo)識碼:A文章編號:10080805(2010)03054301Study on Hydrolysis Kinetics of Paeoniflorinian, LIU Yong-gang, LI Ji-an, LA Wan-ying(1. North China Coal Medical University, Tangshan 063000, China; 2. College of Traditional Chinese Pharma-cology, Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100102, China)Abstract: Objective To investigate the hydrolysis kinetics of Paeoniflorin in different pH values. Methods Diamonsil-Cus column(250mm x 4.6mm, Sum)was used with the use of the acetonitriler-O. 1% formic acid(15: 85)as the mobile phase, theflow rate was 1. 0 ml min" and the detection wavelength was set at 230 nm. Results Paeoniflorin was well separated, the linearrange of paeoniflorin was 0. 021 5-0. 215 ug(r=0.999 9). Hydrolysis kinetics equations in different ph values was obtainedConclusion The degradation follows pseudofirst-order kinetics. Hydrolysis rate is different in various pH values.Key words: Paeoniflorin; Hydrolysis Kinetics; HPLC白芍為毛茛科植物芍藥 Paeonia lactiflora Pall.的干燥根,有20.0m,置100ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取平肝止痛養(yǎng)血調(diào)經(jīng),斂陰止汗的功能。其主要成分芍藥苷上述供試品溶液各10山分別注入液相色譜儀記錄色譜圖,得( Paeoniflorin),具有免疫調(diào)節(jié)抑制腫瘤舒張平滑肌細(xì)胞促進回歸方程為Y=297478X+6.892,r=0.9999。結(jié)果表明,芍藥造血細(xì)胞增殖等方面的作用2,而且能明顯降低鏈脲霉素誘發(fā)苷在0.0215-0.215g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)的糖尿病小鼠的血糖。對芍藥苷的藥理作用及其化學(xué)性質(zhì)已品HPLC圖譜見圖1。有較多研究但芍藥苷的水解動力學(xué)和不同pH下,其水解動力學(xué)的變化未見報道。本實驗對芍藥苷的水解動力學(xué)及不同pH值對水解的影響進行了研究,為含有芍藥苷的中藥及復(fù)方的合理提取方法的選擇提供依據(jù)。1儀器與試劑儀器島津20A系統(tǒng),含在線真空脫氣機、低壓四元梯度泵自動進樣器柱溫箱、二極管陣列檢測器、 DIsolution色譜工作站。芍藥苷(中國藥品生物制品檢定所110753-200212)。乙腈(美國 Fisher公司),甲酸(分析純),水為二蒸水,醋酸鹽、磷酸鹽緩圖1芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖譜沖溶液,臨用現(xiàn)配25精密度分別取芍藥苷樣品液10ml6份,按照實驗方法測2方法與結(jié)果定峰面積。其RSD為0.28%。2.1液相色譜條件色譜柱為 Diamonsil-C1柱(250mm×4.62.6穗定性在常溫下取芍藥苷樣品液在不同時間點(1,2,4,6mm,5μm);流動相為乙腈-0.1%的甲酸水溶液(15:85);流速8h)取樣,測定峰面積其RSD為0%%。為1ml·min“,檢測波長230mm2.7不同pH下芍藥苷的水解動力學(xué)方程求算稱取一定量的2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取一定量的芍藥苷,用甲醇配置芍藥苷4份,按“23”項下方法水解,于0.5,1,2,4,6,8h取樣,測成每毫升含0.1mg的溶液,即得定芍藥苷的峰面積結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同pH下,ln(AUSO/AUS)對t呈2.3供試品溶液的制備精密稱取對照品,少量甲醇溶解后分別線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均大于095,可以推測芍藥苷的水解符合準(zhǔn)加人pH3.0,50,7.0,9.0的緩沖溶液至刻度恒溫加熱回流,并一級動力學(xué)模型對不同p下的芍藥苷的水解動力學(xué)方程進行在不同的時間點(0.5,1,2,4,6,8h)取樣,0.45μm的濾膜過濾,求算。結(jié)果見表1。芍藥苷水解的HPC圖譜見圖2。24線性關(guān)系的考察精密量取對照品溶液2.0,4.0,8.0,10.0,收稿日期:20090420;修訂日期:2000802基金項目:科技部國際科技合作項目(No.2008DFA3105作者簡介:劉倩(1978-),女(漢族),吉林樺甸人,現(xiàn)任華北煤炭醫(yī)學(xué)院中國煤化工講師,博士學(xué)位,主要從事中藥化學(xué)研究工作CNMHG通訊作者簡介:李繼安(1962-),男(漢族),河北廊坊人,現(xiàn)任華北煤炭醫(yī)學(xué)院教授,博士學(xué)位,主要從事中西醫(yī)結(jié)合臨床工作圖2芍藥苷水解HPLC圖請543時珍國醫(yī)國藥2010年第21卷第3期LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL 21 NO. 3表1芍藥苷在不同pH下的水解動力學(xué)方程外一個方面證明了炮制可改變中藥的性質(zhì)InAUSo/AUS=0. 082t參考文獻InAUSo/AUS =0.01831[1]國家藥典委員會中國藥典,I部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社InAUS/AUS =0.0192005:68[2]胡南許惠玉陳志偉等.芍藥苷的藥理學(xué)研究進展[冂齊齊3討論哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,28(9):lo93不同pH值對芍藥苷水解的影響,在實驗過程中,設(shè)置4[3]HsuL,Licw, Cheng JT. Antihyperglycemic effects of paeoniflorin個不同的pH(3,5,7,9),結(jié)果發(fā)現(xiàn),芍藥苷水解在酸性條件下水解更快,該結(jié)果對于含有芍藥苷的中藥及復(fù)方的提取有ctifora[ J]. Planta Med, 1997, 63(4): 323定的指導(dǎo)意義。[4]時維靜儲明明,譚志靜,不問炮制方法對白芍中芍藥苷含氳的影該實驗結(jié)果與白芍炮制的相關(guān)試驗結(jié)果相吻合,本實驗從另響[刀]中國中醫(yī)藥信息雜志,2008,15(12):49纖維素酶在提取長春花堿中的應(yīng)用何際嬋,董志超,王建榮,晏小霞中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所農(nóng)業(yè)部熱帶作物種質(zhì)資源利用重點開放實驗室,海南儋州571737)摘要:目的研究纖維素酶在提取長春花生物堿中的應(yīng)用。方法采用酸水浸提法和酶浸提法提取長春花中的長春堿、長春質(zhì)堿、文多林,高效液相色譜(HPLC)法測定其含量。結(jié)果酸水浸提法和酶浸提法提取的長春堿、長春質(zhì)堿、文多林含量分別為0.0158和0.0052mg/ml:0.0456和0.0204mg/ml;0.0898和0.0421mg/ml。結(jié)論在單位時間內(nèi)酶提法可顯著提高長春堿、長春質(zhì)堿、文多林的收率,可考慮將酶解法用于工業(yè)上長春花生物堿的提取中。關(guān)鍵詞:長春花;長春堿;長春質(zhì)堿;文多靈;纖維素酶中圖分類號:R284.2文獻標(biāo)識碼:A文章編號:10080805(2010)03054402Extraction of Alkaloid from Catharanthus roseus by Enzymatic MethoHE Ji- chan, DONG Zhi-chao, WANG Jian-rong, YAN Xiao-xiaGermplasm Research Institute of Tropical Crops Genetic Resources Institute, Chinese Academy of Tropical Agri-cultural Sciences, Key Laboratory of Tropical Crops Germplasm Utilization, Ministry of Agriculture P. R. of China, danzhou, Hainan 571737)Abstract: Objective To study the effect of cellulose enzyme on extraction of alkaloid from Catharanthus roseus. Methods HPLOmethod was used to determine the contents of vinblastine, catharanthine and vindoline from C. roseus. Results Compared with thetraditional acidic water extraction, the enzymatic method extraction yield of vinblastine, catharanthine and vindoline was increaserespectively. Conclusion The yield of vinblastine, catharanthine and vindoline from C. roseus can be effectivelIt is available to use enzyme in extraction alkaloid from C. roseus.Key words: Catharanthus roseus: Vinblastine; Catharanthine; Vindoline; Cellulose enzyme長春花 Catharanthus roseus( Linnaeus)G.Don是夾竹桃科纖維素酶的應(yīng)用日益廣泛,特別是在提取天然產(chǎn)物中的有效成( Apocynaceae)長春花屬一種重要的藥用植物。長春花植株中含分,纖維素酶可將植物細(xì)胞壁破壞并將纖維素軟化,能使細(xì)胞內(nèi)有極其復(fù)雜的萜類吲哚生物堿家族,其中的長春堿( Vinblastine)的有效物質(zhì)充分釋放出來較大幅度提高天然植物中有效成分的為目前應(yīng)用最廣泛的天然植物抗腫瘤藥物之一,可用于治療何杰提取率。本實驗用纖維素酶浸提長春花粉末提取長春花生物金氏病惡性淋巴腫瘤等疾病2。而長春質(zhì)堿( Catharanthine)、堿,顯著提高了長春堿、長春質(zhì)堿、文多林的提取率,縮短了提取文多林( Vindoline)是半合成另一癌癥治療一線藥物長春瑞濱的時間,且用纖維索酶提取長春花生物堿尚無同類報道。原料引。目前工業(yè)上長春花生物堿的提取方法主要為酸水浸提1儀器與試藥法該方法存在著有效成分提取率低耗時較長的問題。近年來,1.1儀器 Waters1525型高效液相色諧儀2487型紫外檢測器;電子天平BT2202(日本島津);PB20型精密pH計(上海雷磁儀收稿日期:20090428;修訂日期:20008-21器廠)?；痦椖?“中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費專項資金和“農(nóng)業(yè)部1.2試藥纖維素酶(天津奧凱實業(yè)有限公司);長春堿、長春質(zhì)熱帶作物種質(zhì)資源利用重點開發(fā)實驗室開發(fā)基金”資助(No.堿、文多林(純度≥98%),均為自制;長春花采于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所南藥種質(zhì)圃:甲醇、乙腈為色譜作者簡介:何際(196),女(漢族),廣西玉林人現(xiàn)任中國熱帶農(nóng)#純氨水學(xué)院熱帶作物品種資源勳理研究員,碩士學(xué)位,主要從事南藥化季成分的磷酸*公壞她也二吹燕餾水;所有試劑在使用前中國煤化工農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所研沱賈,博士學(xué)位主要從事南藥化1/2通訊作者簡介:黃志超(196),男(漢族),澌江嵊縣人,現(xiàn)任中國熱番2CNMHGC1(4.6mm×250mm,學(xué)威分的研究與開發(fā)工作5μm)柱;流動相為380m水-二乙胺(986:14,用磷酸調(diào)pH