第21卷第3期精細(xì)化工Vol 21. No. 32004年3月FINE CHEMICALS中藥現(xiàn)代化技術(shù)水蛭乙醇提取工藝的研究劉曄瑋,邸多隆,張建民3,陳曉琴3(1.河西學(xué)院化學(xué)系,甘肅張掖734000;2.中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所甘肅省天然藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,甘肅蘭州730000;3.張掖市藥品檢驗(yàn)所,甘肅張掖734000摘要:以乙醇浸膏得率和浸膏中氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為評價(jià)指標(biāo),選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)、乙醇與水蛭質(zhì)量比、提取時(shí)間為考察因素,利用正交實(shí)驗(yàn)L(3)確定乙醇提取水蛭最佳工藝條件為:g(乙醇)mg(乙醇)=50%初(水蛭)=6,提取時(shí)間1.5h,共提取2次。平均乙醇浸膏得率13.24%,浸膏中平均氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)w(N)=11.05%關(guān)鍵詞:水蛭;乙醇;浸膏得率中圖分類號:R282.74文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1003-5214(2004)03-0168-03Study of Ethanol Extraction Process for Whitmania Pigra WhitmanLIU Ye-wei, DI Duo-long. ZHANG Jian-min, CHEN Xiao-qin(l. De partment of Chemistry, Hexi University, Zhangye 734000, Gansu, China: 2. Lanzhou Institute ofChemical physics, the Chinese Academy of Sciences, Lanzhou 730000, Gansu, China; 3. Institute for DrugControl, Zhangye 734000 Gansu, chinoAbstract: With extraction rate and mass fraction of nitrogen in the extract as aindices, the optimum extracting conditions for Whitmania pigra whitman were studied by theorthogonal design. Thus, extracting for twice (1. 5 h each) with (ethanol )=50% and m(ethanol) 'm( Whitmania pigra Whitman)=6: 1, the average extraction rate and the massfraction of nitrogen in the extract were 13. 24% and 11.05%(n=3)respectively.Key words Whitmania pigra Whitman; ethanol; extraction rate目前已知水蛭科動(dòng)物在全世界共有300多種,的水溶液提取水蛭以兼顧二者。由于水蛭中有效成我國分布有62種,中國藥典2000年版一部收載分比較復(fù)雜,起主要藥理作用的化學(xué)成分尚不十分的藥用品種為水蛭科動(dòng)物螞蟥( Whitmania pigra清楚,在硏究乙醇提取水蛭工藝時(shí)選擇一種或幾種Whitman)、水蛭( Hirude Nipponica Whitman)、柳化合物作為提取工藝的評價(jià)指標(biāo),既存在分析方法葉螞蟥( Whitmania acranulata whitman)的干燥方面的困難,也可能不全面。針對其有效成分大多體。其化學(xué)成分主要含氨基酸和蛋白質(zhì)3,其新是含氮化合物這一特點(diǎn),作者以乙醇浸膏得率和浸鮮唾液中含水蛭素( hirudin)、偽水蛭素膏中氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為評價(jià)指標(biāo),用正交實(shí)驗(yàn)L(3)研( pseudohirudin)、肝素( heparin)、抗血栓素(究乙醇提取水蛭的工藝條件,為合理、有效地提取水a(chǎn)ntithrombus element)等46。目前,水蛭在中醫(yī)蛭有效成分,為新藥研究和工業(yè)生產(chǎn)提供參考。應(yīng)用和中藥制劑生產(chǎn)中基本上是用水單煎或用水與其他藥材共煎,對其乙醇提取工藝研究極少。由1儀器與材料于水蛭中具藥理活性的有效成分既有水溶性部分,1.1也有醇溶性部分。-,用水提取水蛭時(shí)醇溶性有效中國煤化工市英峪予華儀器廠)成分損失嚴(yán)重。因此,作者選擇不同乙醇體積分?jǐn)?shù)RECNMHG海亞榮生化儀器廠)*收稿日期:2003-05-20作者簡介:劉曄瑋(1963—),女,陜西富平人,河西學(xué)院化學(xué)系副教授,理掌碩士,主要從事分析化學(xué)教學(xué)工作和天然產(chǎn)物的分離分析研究,電話:0936-8282045,E-mail:zy8214087@public.1z.gs.cn第3期劉曄瑋,等:水蛭乙醇提取工藝的研究SHB一Ⅲ型水循環(huán)式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)表2正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表及結(jié)果(n=3)有限公司); Vario el元素分析儀(德國 Table2 The design and results of orthogonal experiment(n=3Elemantar);百萬分之一分析天平(德國因素評價(jià)指標(biāo)實(shí)驗(yàn)號Sartorius);GZX45型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(西安市ABCD(空白)乙醇浸膏得率/%(N)/%醫(yī)療器械修造廠)1.2材料232316881螞蟥( Whitmania pigra Whitman,購自蘭州市黃河藥市,經(jīng)蘭州醫(yī)學(xué)院馬志剛副教授鑒定);工業(yè)10.02酒精(甘肅黃羊鎮(zhèn)糖廠生產(chǎn))11.499.4011.2正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選提取工藝011K126.0030.5231.6729.752.1因素水平表K228.7431.8630.7230.20見表1K336,1428.528.4930CT2/9=90.882/9=917.69率R10.143.363.181.18表1因素水平表18.341.901.770.23Table 1 Table of factor levelsK127.3627.7930.5729.21氮K228.429.6128.1428.47量K330.6529.0327.7228.75CT2/9=86.432/9=830.02g乙醇)%m(gZ酶)=50%/m(水蛭)提取時(shí)間/h(空白)數(shù)K3.291.822.850.74SS1.880.571.570.0892.4提取次數(shù)的選擇將陰干的水蛭粉碎為4~8目的粗粒.稱取452.2正交實(shí)驗(yàn)方法及數(shù)據(jù)g,提取條件為:g(乙醇)=50%,m(g(乙醇)=50%將陰干的水蛭粉碎為4~8目的粗粒,稱取45加n(水蛭)=64,提取時(shí)間1.5h,共提取3次。將第,用L(3)正交表安排實(shí)驗(yàn)(見表2),加熱回流提1、第2次提取液的濾液合并后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮取。將第1、第2次提取液的濾液合并后在旋轉(zhuǎn)蒸(60C,0.08MPa)濃縮液移入100mL容量瓶中發(fā)儀上濃縮(60℃,0.08MPa)濃縮液移入100mL涼至室溫后定容,測定前充分搖勻后精密吸取20的容量瓶中,涼至室溫后用水定容,測定前充分搖mL供測定。第3次提取液同法濃縮、定容、精密吸勻,按2.3.1、2.3.2節(jié)方法分別測定乙醇漫膏得率取。分別按2.3.1、2.3.2節(jié)測定第1、第2次提取和浸膏中氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)液的合并液和第3次提取液的乙醇浸膏得率和浸膏2.3樣品測定中氮質(zhì)量分?jǐn)?shù),結(jié)果見表3。2.3.1乙醇浸膏得率測定表3提取次數(shù)的選擇(n=3)精密吸取2.2節(jié)制備的樣品液20mL,置已干Table 3 Option for times of extraction(n=3)燥至恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,于105C干燥5h,乙醇浸膏得率/%(N)/%置干燥器中冷卻1h,迅速稱量,得浸膏質(zhì)量m1,按第1、第2次提取下式計(jì)算醇浸膏得率,測定結(jié)果見表2。第3次提取0.82第3次提取所占比例①/%乙醇漫膏得率(%)=m×100×100指第3次提取的浸膏得率、浸膏中氮質(zhì)量分?jǐn)?shù),分別占總浸膏式中:m為浸膏質(zhì)量,m2為樣品質(zhì)量。得率、浸膏中總氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的百分?jǐn)?shù)2.3.2浸膏中氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,以乙醇浸膏得率為考察指標(biāo),第取上述浸膏樣品,置于研缽中研細(xì)后,精密稱取次提取所占比例為10.78%;以乙醇漫膏中氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)約3mg,在元素分析儀上測定氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)。測定條為考中國煤化工例為6.82%;說明兩次件為:燃燒管溫度1150℃,還原管溫度850C,高純CNMHG醇提取兩次工藝。氦氣流198mL/min,高純氧氣流2mL次,測定結(jié)2.5方差分析果見表2。將表2中正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析,結(jié)果見表4、170精細(xì)化工 FINE CHEMICALS第21卷表4乙醇漫膏得率方差分析表提取工藝條件為:g(乙醇)=50%,m(g(乙醇Table 4 Variance analysis of extract rate in ethanol50%m(水蛭)=64,提取時(shí)間1.5h,共提取2次誤差來源F經(jīng)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)確認(rèn)提取工藝條件可行。18.340.05(2)由于水蛭中有效成分主要是含氮化合物,在B7.920.05選擇工藝評價(jià)指標(biāo)時(shí),考慮到建立分析方法的復(fù)雜性和對照品缺乏的困難,在其有效成分尚不十分清注:F0.05(2,2)=19.00;Fo.01(2,2)=99,00楚的情況下,選擇乙醇浸膏得率和氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)間接評價(jià)其提取效果,簡單、易表5氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)方差分析表(3)中藥提取工藝條件的篩選,其評價(jià)指標(biāo)的選Table 5 Variance analysis of the mass fraction of nitrogen擇十分關(guān)鍵。僅僅用浸膏得率評價(jià)工藝條件尚不完誤差來源S全,有必要選擇與藥效相關(guān)的有效成分或指標(biāo)成分880.9420.9<0.0作為評價(jià)指標(biāo),這方面的工作有待進(jìn)一步研究0.576,44參考文獻(xiàn)20.7917.6>0.05[1]宋大祥,螞蟥[M北京:科學(xué)出版社,1978.11誤差0.0890.045[2]中華人民共和國國家藥典委員會(huì),中國藥典(2000年版一部)注:F.05(2,2)=19.00;F0.01(2,2)=99,00(第1版)M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1999.2253]王本祥,現(xiàn)代中藥藥理學(xué)[M].天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社以乙醇浸膏得率為考察指標(biāo),由表2中極差可知,各因素依次為A>B>C;由表4方差分析結(jié)果表[4]《中國藥用動(dòng)物志》協(xié)作組.中國藥用動(dòng)物志(第1冊)[M].天津:天津人民出版社,1979.8明,A因素的影響具有顯著性意義(P<0.05),B因素5歐興長.水蛭素的臨床進(jìn)展[J.中國藥學(xué)雜志,1991,26(7和C因素?zé)o顯著性意義(P>0.05),以A3B2C1為最佳;以氮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為考察指標(biāo),由表2中極差可知,各[6 Electricwala A, Sawyer, Roy T, et aL. 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