中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志2005年2月第23卷第1期 Chin J Ind Hyg Occup Dis,June2005,vol23,No,1監(jiān)測與檢驗技術(shù)血清中甲醇和乙醇的氣相色譜法測定劉軍生杜書明錢義【摘要】目的建立血清中甲醇、乙醇快速測定的氣相色譜方法。方法抽取靜脈血10ml,取10ml靜脈血,待血液凝固后離心分離血清,取1.0μ血清直接進樣,采用玻璃填充柱分離樣品中的甲醇和乙醇外標(biāo)法定量。結(jié)果血清中甲醇、乙醇最低檢出濃度均為0.50g/ml,線性范圍分別為0.005~0.400和0.10~3.95mg/m,回收率分別為98.0%~102.0%和98.0%~103.7%。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為200%-637%和3.18%~5.83%。結(jié)論血清中甲醇、乙醇的氣相色譜測定方法能將甲醇和乙醇很好分別測定,可應(yīng)用于甲醇、乙醇中毒的臨床診斷和治療【關(guān)鍵詞】甲醇,乙醇,血清;測定,氣相色譜法職業(yè)接觸甲醇和乙醇的工人體檢、酒后駕車事故責(zé)任鑒離度和靈敏度而言,SE54毛細(xì)管柱優(yōu)于不銹鋼柱和玻璃柱,定、臨床上甲醇或乙醇中毒的診斷治療,都需要測定其甲醇但因毛細(xì)管柱內(nèi)徑小柱效容易降低不宜用作血清經(jīng)常測定。和乙醇的血液濃度{。我們建立了血清中甲醇、乙醇快速測我們參考有關(guān)文獻(xiàn)1,從分離度、準(zhǔn)確度和能否用血清直接定的氣相色譜法,以保留時間定性,外標(biāo)法定量,操作簡便,操作為目的,對401擔(dān)體(60~80目,85%)玻璃填充柱進行結(jié)果準(zhǔn)確,能使甲醇、乙醇很好分離。了試驗,結(jié)果在上述條件下,直接用血清1.0進樣可以一、材料與方法到準(zhǔn)確快速分離甲醇、乙醇的目的(圖1)。見甲醇、乙醇標(biāo)1.儀器與試劑:CC9790型氣相色譜儀(浙江溫嶺福立分樣色譜圖析儀器有限公司),FID檢測器,N000色譜工作站(浙江大學(xué)2.線性范圍和檢出限:甲醇線性范圍為0.50-4000智能信息研究所),甲醇、乙醇標(biāo)準(zhǔn)液(色譜純)mg/ml,乙醇線性范圍為10.00~400.00mg/ml,甲醇、乙醇檢色譜條件:填充玻璃柱(2.0m×3.2mmID),填充401出濃度均為0.05mg/ml甲醇回歸方程:y=380x+79.83,r擔(dān)體(60-80目,85%),汽化室溫度200℃,檢測器溫度280=0.9997,乙醇回歸方程:9=480x+35.42,r=0,9987,此方℃,柱溫100℃按30℃/min升至210℃,保留2min,柱前壓法的靈敏度完全可以滿足對臨床酒精中毒的診斷和酒后駕01mPa,氫氣0.1mPa,空氣0.06mPa,高純氮做載氣,衰駛的判斷。減5。3.方法的回收率和精密度:配制0.79mg/m的甲醇和3.標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制:淮準(zhǔn)確吸取甲醇0.10m(79mg)、3.95mg/ml的乙醇血清標(biāo)準(zhǔn)液各50ml,分別加入到甲醇本乙醇0.50ml(395mg)置于100ml容量瓶中,加血清(取自無底值為0.05m/m,乙醇本底值為025mg/ml的兩種標(biāo)準(zhǔn)液未有飲酒史的體檢健康者)至刻度配成100ml甲醇含量為中,使甲醇濃度(理論值)分別為0.10、0.135、0.200.30、0,4079mg/ml,乙醇含量為395mg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)液mg/ml,乙醇濃度(理論值)分別為0.50、1.00、2.00、2.50、3.004.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取標(biāo)準(zhǔn)儲備液和不飲酒的正常人mg/ml,每個濃度準(zhǔn)確進樣1.0μl做6次平行實驗。結(jié)果表血清配成甲醇含量分別為0.00、0.05、0.10.、0.20、0.40、明:甲醇、乙醇各濃度回收率分別為98.0%-102%和98,0%060、0.79mg/ml和乙醇含量分別為0.00、0.25、0.50、1.00103.7%;相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為2.00%~6.37%和200、3.003.95mg/ml的甲醇一乙醇混合工作液各10.0ml。3.18%~5.83%準(zhǔn)確吸取1.0μ進樣。做6次平行實驗,分別記錄峰面積,65取平均峰面積為縱坐標(biāo)(y),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)濃度(x)為橫坐標(biāo)6055繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品測定:抽取靜脈血1.0ml于試管中,待凝固后以4000r/min離心5min,取血清1.0山l進樣。記錄峰面積,查標(biāo)準(zhǔn)曲線,外標(biāo)法定量。30二、結(jié)果與討論25中國煤化工1.毛細(xì)管氣相色譜法的建立:甲醇、乙醇測定方法很CNMHG多2,如化學(xué)法、酶法和氣相色譜法,但以氣相色譜法較簡便、準(zhǔn)確。通用色譜柱為GDx102(頂空法操作),但就其分作者單位:30000天津解放軍22醫(yī)院毒檢中心(劉軍生、杜書時間(t/min)秀數(shù)擂圖1甲醇、乙醇標(biāo)樣色譜圖中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志2005年2月第23卷第1期 Chin J Ind Hyg Occup Dis, June200Vdl.23,No,14.血清空白試驗:空腹抽取不飲酒的男女各40人靜脈0.5h比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.5),因此血樣采集后應(yīng)血各1ml,按本法色譜條件直接取血清1.0μ進樣。實驗表在3h內(nèi)測定,放置時間超過3h逐漸下降結(jié)果偏低。明,不飲酒者血液中也含有微量的乙醇,且無性別差異。對6干擾實驗:在1ml空腹靜脈血中加進0.10mg/m的甲80名不飲酒的正常人和206名酒精中毒患者血樣分析,甲醇和0.50mg/m的乙醇混合標(biāo)準(zhǔn)液離心后取血清首先做甲醇、乙醇正常參考范圍分別為0~0.8mg/ml和0,05-8.00醇、乙醇測定,而后將1ml血液混勻加入1md冰冷雙蒸水使mg/m(按95%可信限計算),酒精中毒乙醇含量一般為50~其溶血然后配制成含血紅蛋白5、10、20、40gL的溶血樣品,350mg/ml對于因酗酒引起的酒精中毒,血清乙醇含量明離心后分別取1d上清液進樣。結(jié)果顯示,隨著溶血程度加顯增高,對常年接觸甲醇的工人,應(yīng)做動態(tài)的甲醇濃度觀察,大,甲醇、乙醇含量逐步增高,說明溶血對該方法有明顯干擾。甲醇濃度≥20mg/m應(yīng)診斷為中毒。有資料報道甲醇中毒患者血清甲醇量>20mg/ml,酒精中毒患者血清乙醇量>50mg/ml。甲醇、乙醇中毒個體耐受性差異很大,本次報道的正1李影林,盧淑文.中華醫(yī)學(xué)檢驗全書,北京:人民衛(wèi)生出版社1997.3216-3218常參考值和中毒量范圍與有關(guān)資料報道基本一致3。2張黎軍,仲翠蓮氣相色譜法在甲醇和乙醇中毒診斷中的應(yīng)用5.樣品穩(wěn)定性:將做回收實驗所用的5個濃度的甲醇、乙中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2000,34:52-533李煥德,許樹梧.急性中毒毒物檢測與診療湖南:湖南科學(xué)技醇血清標(biāo)準(zhǔn)液放置0.5、1.02.0、3.0、4.0h分別測定其含量。術(shù)出版社,2000.450605當(dāng)樣品放置室溫(25℃)4h時,甲醇、乙醇測定結(jié)果與前0.5h(收稿日期:2003-1203)結(jié)果比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。3h測定結(jié)果與前(本文編輯:楊德一)細(xì)菌生化鑒定和藥物敏感性檢測試劑盒的研制邢冬紅陳軍生孟穎胡志東劉曉春劉毅華【摘要】目的研制細(xì)菌生化鑒定與藥物敏感性測定兩項試驗同步進行試驗的試劑盒,達(dá)到簡易快速診斷的目的。方法根據(jù)美國臨床實驗標(biāo)準(zhǔn)化委員會( NCCLS)抗生素最低抑菌濃度(MC)測定法規(guī)山選擇氨芐霉素、頭孢唑啉、慶大霉素、丁胺卡那霉素、氧哌嗪青霉素、妥布霉素、頭孢噻吩、舒氨新、頭孢哌酮、頭孢三嗪和環(huán)丙沙星共12種抗生素和大腸桿菌(ATCC25922)傷寒和鼠傷寒沙門菌、黏質(zhì)沙雷菌、肺炎克雷伯菌,分離自門診及住院患者的大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、陰溝腸桿菌等共9株。取待測菌24h培養(yǎng)物,接種普通肉湯,35℃孵育4~6h,用9孔接種器蘸取菌液與檢測板對合接種。于35℃孵育18-24h后觀察結(jié)果。分別用傳統(tǒng)法(生化鑒定試驗法、藥敏試驗瓊脂稀釋法)作對照試驗。結(jié)果試劑盒法與試管法結(jié)果的符合率為95.4%,用試劑盒法與瓊脂稀釋法平行測定12種抗生素對50株菌種的MC兩種方法MC值符合率為753%,在±1稀釋度范圍內(nèi)的符合率為958%結(jié)論采用試劑盒進行試驗可以滿足臨床診斷需求【關(guān)鍵詞】細(xì)菌鑒定;測定試劑盒細(xì)菌生化鑒定與藥物敏感性測定是細(xì)菌學(xué)檢驗中兩個氨新、頭孢哌酮、頭孢三嗪和環(huán)丙沙星分別為市售商品抗生重要組成部分,長期以來作為兩個獨立試驗分別進行。近年素注射劑。來,國外已有將兩項試驗合二為一同步進行的商品化試劑盒3.菌種來源:(1)標(biāo)準(zhǔn)菌種:大腸桿菌(ATCC25922)、傷供應(yīng)臨床,達(dá)到簡易快速診斷的目的,但國內(nèi)尚無類似產(chǎn)品寒和鼠傷寒沙門菌、黏質(zhì)沙雷菌、肺炎克雷伯菌購自衛(wèi)生部問世。本研究旨在解決這一問題,填補國內(nèi)空白。藥品生物制品檢定所。(2)臨床菌株:分離自天津醫(yī)科大學(xué)、材料與方法總醫(yī)院2000年5-7月門診及住院患者,包括大腸桿菌、肺(一)材料炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、陰溝腸桿菌等共9株。1.聚苯乙烯塑料板:12孔x8孔,孔容量0.4m。(二)方法中國煤化工藥敏試驗MC分界點2.抗生素:根據(jù)美國臨床實驗標(biāo)準(zhǔn)化委員會( NCCIS)抗生素最低抑菌濃度(MC)測定法規(guī)選擇12種抗生素其中表CNMHG每種6個稀釋度),原液氨芐霉素、頭孢唑啉、慶大霉素、丁胺卡那霉素、氧哌嗪青霉?jié)舛葹樽罡咭露鹊?0借。既制后分裝,-20℃保存?zhèn)溆?。?Minibact鑒定系統(tǒng)配方基礎(chǔ)上并參照其他鑒定系素、妥布霉素購自衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所;頭孢噻吩、舒統(tǒng)進行改進。共包括ONPG、精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、苯丙氨作者單位:300203天津醫(yī)科大學(xué)檢驗系免疫教研室酸、H2S、靛基質(zhì)、尿素、伏普、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖、蜜二糖