江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2009年第1期肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影響因素研究吳海虹!,玄國東2,劉春泉(1江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所江蘇南京2100142山東省產(chǎn)品質(zhì)敏監(jiān)督檢驗(yàn)研究院,山東濟(jì)南250100)摘要:以松果菊苷為標(biāo)準(zhǔn)品,采用紫外分光光度法測定了鹽生肉蓯蓉中苯乙醇苷類化合物的含量,同時(shí)對影響肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取的反應(yīng)溫度、乙醉體積分?jǐn)?shù)料液比、提取時(shí)間以及提取次數(shù)等5個(gè)因素進(jìn)行了分析確定了較佳工藝條件。結(jié)果表明肉蓯蓉中苯乙醇苷類化合物的較佳提取條件為溫度70℃,料液比1:10,乙醇體積分?jǐn)?shù)80%,提取時(shí)間2h,提取次數(shù)2次。關(guān)鍵詞:肉蓯蓉;苯乙醇苷;影響因素;提取工藝中圖分類號:R84.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號:1002-1302(2001-0250-03肉蓯蓉屬多年生根寄生草本植物,是名貴中藥材,具有補(bǔ)為40目,備用。腎、益精、潤腸、抗衰老等功效,由于生長于沙漠環(huán)境,又有1.2.2松果菊苷測定波長的選擇稱取松果菊苷1.5mg,沙漠人參”之美譽(yù)。國內(nèi)外學(xué)者對肉蓯蓉的化學(xué)成分進(jìn)行置于50m容量瓶中,用甲醇定容至刻度搖勻,在波長為230了大量研究迄今為止已經(jīng)分離出約近70種化合物包括苯~450mm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。如圖I所示,在波長為270乙醇苷類、環(huán)烯醚萜類、木脂素類化合物以及生物堿和糖類等-400m范圍內(nèi),松果菊苷均有紫外吸收,其中338m處紫其他成分。其中最主要成分為苯乙醇苷類化合物,以B-外吸收值最高因此在試驗(yàn)研究中選定該波長進(jìn)行松果菊苷葡萄糖為母核的含有酯鍵及氧苷鍵的天然糖苷,廣泛存在于標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制雙子葉植物中,是由苯乙基咖啡?；投鄠€(gè)糖基組成的一類分子量較大、結(jié)構(gòu)相似的水溶性物質(zhì)2,根據(jù)其取代基的不同,可分為肉蓯蓉苷(A、B、C、D)、類葉升麻苷、松果菊苷等。Sao等“藥理學(xué)研究證明,類葉升麻苷、肉蓯蓉苷A和C、松果菊苷等能顯著提高小鼠的性功能,并能增強(qiáng)記憶力。本試驗(yàn)通過對鹽生肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇流提取的影響因素進(jìn)行分析找出了苯乙醇苷類化合物的較佳提取條件,為苯乙醇苷類化合物開發(fā)利用提供一定的科學(xué)依據(jù)。302632963293623954284501材料與方法波長(m1.1材料、試劑與僅器圖1松粟菊苷光譜掃描圖譜材料:鹽生肉蓯蓉,內(nèi)蒙古磴口縣產(chǎn)。1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制稱取松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品20mg,置50m試劑:松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所,純度容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,搖勻。分別吸取上述溶≥99%);Dl01型大孔吸附樹脂(天津南開大學(xué)化工廠);甲液0.20.40.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6,1.8、2.0ml置于25醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯等均為國產(chǎn)分析純ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。以甲醇作測定空白,在主要儀器:T-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通38mm波長測定紫外吸收度(圖2)。經(jīng)線性回歸處理得標(biāo)用儀器有限責(zé)任公司);FW-100高速萬能粉碎機(jī)(北京中興準(zhǔn)曲線:y=46.785x+1.1447。在該方程中,x表示吸光度值偉業(yè)儀器有限公司);FA2104型電子分析天平(上海恒平科(OD值),y表示松果菊苷含量(ug/m)。該方程的回歸系數(shù)學(xué)儀器有限公司);標(biāo)準(zhǔn)分樣篩(浙江上虞道墟路達(dá)儀器廠);r=0.9996,說明自變量與因變量之間存在高度的相關(guān)關(guān)系HH-S恒溫水浴鍋(江蘇金壇恒豐儀器廠);YX-A高速大25y=46785x+1147容量電動離心機(jī)(江蘇金壇環(huán)字科學(xué)儀器廠)。r=09931.2試驗(yàn)方法1.2.1原料的預(yù)處理將烘干的肉蓯蓉進(jìn)行粉碎粉碎粒度收稿日期:2008-11-25基金項(xiàng)目:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科研基金(編號:6510605)。作者簡介:吳海虹(1976—),女,江蘇儀征人,碩士,研究方向?yàn)樘烊恢袊夯ぎa(chǎn)物研究與開發(fā)。E-ml:wuhaihongl6@163.com。CNMHG通訊作者:劉春泉,研究員。Tel:(025)84391255;E- mail: leq@js紫外分光光度法松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)曲線吳海虹等:肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影響因素研究251可以作為松果菊苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線使用1.2.4樣品測定稱取肉蓯蓉樣品10.00g(共4份),用70%乙醇回流提取3次,乙醇用量分別為30m,20ml、20ml,每次1.5h。合并提取液,減壓回收乙醇,膏狀物用水10ml混合,用水飽和的乙酸乙酯脫脂3次(每次乙酸乙酯用量為E副爛量N40010m),水層再用水飽和的正丁醇舉取3次(每次正丁醇用量為10m)。合并3次正丁醇萃取液,減壓回收正丁醇,所得稠膏用水5ml溶解加入裝有15ml的Dl01的大孔樹脂柱頂端反應(yīng)溫度(℃分別用水50ml、甲醇50ml洗脫收集甲醇洗脫液45ml,并用圖3反應(yīng)溫度對肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物提取效果的影響甲醇定容至50ml。精密吸取02ml,甲醇定容至25ml,搖勻,為1:14時(shí),苯乙醇苷類化合物濃度為34.18μg/ml,僅增加在338mm處測定吸收值按松果菊苷冋歸方程計(jì)算含量225μg/m。該結(jié)果說明,比較適合的料液比應(yīng)大于1:10,1.2.5肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取蟛響因素研究但考慮到提取溶劑的用量及成本因素,認(rèn)為料液比選擇1:10125.1反應(yīng)溫度對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱比較適合。取5.0g肉蓯蓉干粉加入70%乙醇溶液70m,于40℃、50℃、60℃70℃、80℃恒溫加熱回流提取2:0h,提取液經(jīng)濃縮分離之后測定苯乙醇苷類化合物的含量。1.2.5.2乙醇體積分?jǐn)?shù)對肉蓯蓉苯乙醇背提取效果的影響稱取5.0g肉蓯蓉干粉,分別加入70m體積分?jǐn)?shù)為50%2060%、70%、80%、90%、95%的乙醇溶液,于70℃恒溫加熱回流提取提取時(shí)間及濃縮分離方法同上,測定苯乙醇苷類化合5物的含量。1.2.5.3料液比對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱取50g肉蓯蓉干粉,分別按料液比為1:6、1:8、1:101:12、圖4剩液比對肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物提取效果的影響1:14加入體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇η0ml,提取時(shí)間及濃縮分離2.3乙醇體積分?jǐn)?shù)對笨乙醇苷類化合物提取效果的影響方法同上,測定苯乙醇苷類化合物的含量。圖5顯示,在乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%-80%范圍內(nèi),隨著1.z5.4提取時(shí)間對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱乙醇體積分?jǐn)?shù)提髙提取液中苯乙醇苷類化合物濃度也增加,取5.0g肉蓯蓉干粉,分別加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇70濃度范圍為27.72-3244Hg/ml,且在該范圍內(nèi)提取液中苯皿l,并于№0℃恒溫加熱回流提取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、乙醇苷類化合物濃度的增加不明顯,說明乙醇體積分?jǐn)?shù)為40h,濃縮分離方法同上,測定苯乙醇苷類化合物的含量。50%~80%對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響不明顯。乙1.2.5.5提取次數(shù)對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱醇體積分?jǐn)?shù)超過80%之后,提取液中苯乙醇背類化合物濃度取5.0g肉蓯蓉干粉,分別加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇70開始下降,至乙醇體積分?jǐn)?shù)為95%時(shí),提取液中苯乙醇苷類m,并于70℃恒溫加熱回流提取2h,提取次數(shù)分別為1次、2化合物濃度下降至18.27μg/ml,說明乙醇體積分?jǐn)?shù)超過次3次4次,合并提取液濃縮分離方法同上,測定苯乙醇苷80%之后對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響比較大。因類化合物的含量此,乙醇體積分?jǐn)?shù)選擇80%比較適合。402結(jié)果與分析2.1反應(yīng)溫度對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響30如圖3所示,在反應(yīng)溫度為40~70℃范圍內(nèi)隨著反應(yīng)溫度升高提取液中苯乙醇苷類化合物濃度也增加濃度范圍為30.19~32.9μg/ml,變化比較小,說明在該溫度范圍內(nèi)反應(yīng)溫度對苯乙醇苷類化合物提取的影響不明顯。但反應(yīng)溫度超過70℃之后隨著反應(yīng)溫度升高提取液中苯乙醇苷類化合物濃度降低。說明反應(yīng)溫度超過70℃之后,不利于苯乙405060708090100醇苷類化合物提取。綜合考慮各個(gè)因素之后認(rèn)為選擇反應(yīng)乙醉體積分?jǐn)?shù)(%圖5乙醇體積分?jǐn)?shù)對肉蓯蓉苯乙酵苷類化合物提取效果的影響溫度70℃比較適合。2.2料液比對菶乙醇苷類化合物提取效果的影響2.4提取時(shí)間對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響圖4顯示,在反應(yīng)料液比為1:6-1:14的范圍內(nèi),隨著中國煤化工圍內(nèi),隨肴反應(yīng)時(shí)間料液比的提高提取液中苯乙醇苷類化合物濃度也增加但在延長也增加,濃度范圍為1:6~1:10的范圍內(nèi)提取液中苯乙醇苷類化合物濃度增加32.25CNMHG圍內(nèi)提取液中苯乙比較迅速濃度為2.8-3193ug/ml;當(dāng)料液比超過1:10醇苷類化合物濃度增加幅度很小,波動幅度僅為3.66之后提取液中苯乙醇苷類化合物濃度增加較緩慢,至料液比μg/ml。說明當(dāng)提取反應(yīng)超過1h之后對苯乙醇苷類化合物252江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2009年第1期3結(jié)論鹽生肉叢蓉經(jīng)乙醇回流提取、濃縮、乙酸乙酯脫脂和正丁醇萃取有效成分等步驟再經(jīng)大孔樹脂D01吸附,甲醇洗脫采用紫外分光光度法測定肉叢蓉中苯乙醇苷類化合物的含量。經(jīng)線性回歸處理得標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=46.785x+1.1447。在該方程中x表示吸光度值(OD值),y表示松果菊苷含量提取時(shí)間(h)(μg/m)。該方程的回歸系數(shù)為0.9906,說明自變放與因變圖6提取時(shí)間對肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物提取效果的影響量之間存在高度的相關(guān)關(guān)系,可以作為松果菊苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線提取效果的影響不大,因此,比較適合的提取時(shí)間為2h使用2.5提取次數(shù)對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響對肉蓯蓉苯乙醇苷回流提取影響因素的試驗(yàn)研究表明,由圖7可見,在提取次數(shù)為1~4次范圍內(nèi)隨著提取次反應(yīng)溫度選擇70℃、乙醇體積分?jǐn)?shù)選擇80%提取料液比選明提取次數(shù)對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響比較大,但拳稱取時(shí)間選擇2h提取次數(shù)選擇2次比較適合。度范圍為3155-5229μg/ml,增加幅度為20.74μg/ml。說過多的提取次數(shù)將消耗很多時(shí)間及能源,綜合考慮認(rèn)為比較1]劉秀華,李蕓張晶.肉蓯蓉屬植物的化學(xué)成分研究進(jìn)展適合的提取次數(shù)為2次。[J].蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,30(3):96-97[2]靖會佐建鋒,李教社,苯乙醇苷類化合物的藥理研究進(jìn)展50[刀].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2006,17(3):40-441[3]宋志宏屠鵬飛,趙玉英,管花肉蓯蓉的苯乙醇苷成分[].中草藥,2000,31(11):808-810.[4]Sato A, Kozima S, Kobayashi K. Pharmacological studies on sistan-20chis herba. I Efects of the constituents of cistanchis herba onnd leaming behavior in chronic stressed mice[ J]. Yakugakuzasshi,985,105(12):l134-1137提取次數(shù)圖7提取次數(shù)對肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物提取效果的影響歡迎訂閱200年《江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)》郵發(fā)r8-10《江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)》是由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院主辦的綜合性農(nóng)業(yè)科技期刊為雙核心期刊(中國科技核心期刊全國中文核心期刊),榮獲第三屆國家期刊獎提名獎第二屆國家期刊獎百種重點(diǎn)期刊獎、全國優(yōu)秀科技期刊、江蘇省雙十佳期刊江蘇省優(yōu)秀期刊、全國農(nóng)口學(xué)會優(yōu)秀期刊華東地區(qū)優(yōu)秀期刊等。主要刊登國內(nèi)最新農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新和研究成果方面的研究論文時(shí)效性強(qiáng)發(fā)表周期短適合農(nóng)業(yè)科研人員、農(nóng)業(yè)行政管理人員、農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣人員、農(nóng)業(yè)企業(yè)管理人員、生物與農(nóng)業(yè)院校師生以及農(nóng)民等閱讀?！督K農(nóng)業(yè)科學(xué)刊載的文章科學(xué)性強(qiáng)論證嚴(yán)謹(jǐn),在學(xué)術(shù)上多有新的見解與發(fā)展而且通俗易懂是您從事農(nóng)業(yè)科研、農(nóng)技推廣、農(nóng)業(yè)管理跟蹤農(nóng)業(yè)科技,實(shí)現(xiàn)科學(xué)致富的良師益友?！督K農(nóng)業(yè)科學(xué)》是雙月刊逢雙月5日出版大16開,320頁。國內(nèi)外公開發(fā)行,刊號:CN32-1214/S、BSN100-1302(國際)郵發(fā)代號:28-10。每期定價(jià)20.00元,全年120.00元,半年60.00元地址:南京市孝陵衛(wèi)鐘靈街50號郵編:20014網(wǎng)址:hp:/ jsnykx..jas.ac.cn電話:(025)84390282E-mail中國煤化工CNMHG