第16卷第14期中國實驗方劑學(xué)雜志Vol 16 No. 142010年10月Chinese Jourmal of Experimental Traditional Medical FormulaeOct,2010蹄葉橐吾地上部分乙醇提取物對小鼠急性乙醇中毒的保護(hù)作用于海玲‘,李迎軍,張小杰,劉洋,黃銘揚(yáng),趙瑩(延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實驗中心,吉林延吉133000[摘要]目的:探討蹄葉囊吾地上部分乙醇提取物對小鼠急性酒精中毒的保護(hù)作用。方法:采用一次g給予56度白酒記錄小鼠翻正反射消失(醉酒)至恢復(fù)(醒酒)所需時間(min)及采用52度白酒ig復(fù)制小鼠急性乙醇中毒模型,并檢測其血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性及丙二醛(MDA)、甘油三脂(TG)含最和肝組織中ALT、谷胱甘肽過氧化物酶( GSH-Px)活性及MDA,TG含量,觀察蹄葉橐吾對小鼠急性乙醇中毒的保護(hù)作用。結(jié)果:與模型組相比,蹄葉橐吾組小鼠出現(xiàn)翻正反射消失(醉酒)的潛伏期明顯延長(P<0.05),醒酒時間明顯縮短(P<0.05);蹄葉囊吾組小鼠血清及肝組織中TC含量及ALT活性均明顯降低,CSH-Px活性明顯增高。結(jié)論:蹄葉棄吾對小鼠急性乙醇中毒有一定預(yù)防性的保護(hù)作用。[關(guān)鍵詞]蹄葉橐吾;乙醇中毒;小鼠;甘油三脂;丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶;谷胱甘肽過氧化物酶;丙二醛[中圖分類號]R285.5[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]B[文章編號]100590312010)14014703Protective Effect of Ligularia fischeri Ledeb turnagainst Acute Alcohol Intoxication in MiceYU Hai-ling, LI Ying-jun, ZHANG Xiao-jie, LIU Yang, HUANG Ming-yang, ZHAO YingExperimental Center of Fuctional Science, College of Basic Medicine, Yanbian University, Yanji 133000, ChinaAbstract] Objective: To investigate the protective effect of the ethanol extract of Ligularia fischeri LedebTurcz. in mice on acute alcohol intoxication. Method We recorded the duration from disappearance of rightingreflex( drunk) to restore( hangover)in mice, after given a gavage of 56 degrees liquor. In addition, alcoholinduced liver injury model of mice was established by acute gavage of 52 degrees liquor, and serum alanineaminotransferase( ALT)activity, malondialdehyde( MDA), triglyceride (TG ) content were tested. Activity ofglutamic-pyruvic transaminase(ALT), glutathione peroxidase(GSH-Px), malondialdehyde( MDA), triglyceride(TG )in liver tissue was also determined. Result: The ethanol extract of L. fischeri significantly prolonged theincubation period of righting reflex disappeared drunk )(P<0. 05),reduced hangover time (P <0. 05);significantly depressed TG and ALT levels(P<0.05 )in serum and liver tissue; and significantly increased GSHPx activity(P <0. 01) in liver tissue. Conclusion: L. fischeri may have a protective effect on acute alcoholIntoxication In miceI Key words] Ligularia fischeri; alcoholism; mice; triglyceride; alanine aminotransferase; glutathionealondialdehyd蹄葉橐吾 gularia fischeri Turn(Lfe)為菊科橐吾屬多年生草本植物,又名腎葉橐吾(中藥志)、馬蹄葉要產(chǎn)中國煤化工長白山地區(qū)為主[收稿日期]20100304(002)莖(名為山紫菀RadixCNMHG通訊作者]·于海玲博士,副教授,研究方向:神經(jīng)藥理學(xué)本草依據(jù)和相當(dāng)Tel: 0433-2660559, E-mail hlyue ybu. edu.cn長的用藥歷史,山紫菀已收入吉林省地方藥品標(biāo)第16卷第14期中國實驗方劑學(xué)雜志Vol. 16. No 142010年10月Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulaeoct,2010準(zhǔn)2。其根和根莖有鎮(zhèn)咳祛痰、理氣活血等功能。蹄葉囊吾高、中低劑量組(28,14,0.7gkg全草用于丹毒性炎癥和關(guān)節(jié)膿腫,地上部分用于閃d-1)。每天謳給藥1次連續(xù)8d,其中正常組和模型挫傷和痔疾。吉林省延邊地區(qū)民間將其葉作為健組給予等體積蒸餾水給藥容積均為20mLkg胃、開胃藥,化痰藥,而且對酒后胃腸不適及頭痛有于第7天除正常組外均52度二鍋頭白酒12mL較好的緩解作用,并作為野菜經(jīng)多種方法烹飪后為kg;24h后(第8天),重復(fù)ig52度二鍋頭白酒14廣大民眾食用。本研究室也證實蹄葉橐吾地上部分mLkg,末次給藥12h(禁食不禁水)后,小鼠稱重,乙醇提取物具有較好的抗炎作用、抗無水乙醇型胃標(biāo)號摘眼球取血,常規(guī)方法分離血清,-80℃保存潰瘍作用1,但有關(guān)其解酒保肝方面的研究尚未見小鼠脫頸椎處死,剖腹迅速摘取肝臟,切取新鮮肝組報道。本研究將通過藥效學(xué)研究及機(jī)制探討,觀察織200mg,精密稱定,在冰生理鹽水中漂洗,剪碎按蹄葉橐吾地上部分乙醇提取物對小鼠急性乙醇中毒質(zhì)量體積比加入1:9倍的冰生理鹽水,用組織勻漿器的保護(hù)作用。制成10%肝組織勻漿3000r·min-,離心10min1材料與方法上清液,-80℃保存?zhèn)溆谩?.1動物雄性昆明種小鼠,體重22~24g,由延1.5測定指標(biāo)及方法按試劑盒說明書檢測血清邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科提供,許可證號SCXK中ALT活性,MDA,TG含量;測定肝組織中ALT(吉)20020005。GSH-Px活性,MDA,TG含量。蛋白含量測定采用考1.2受試藥物蹄葉衰吾為7月份采自延邊長白馬斯亮藍(lán)法。山地區(qū),由延邊大學(xué)藥學(xué)院劉永鎮(zhèn)教授鑒定。蹄葉L6數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理采用SPSS12.0進(jìn)行單因橐吾地上部分乙醇提取物用95%乙醇加熱回流提素方差分析,兩兩比較用LSD方法。P<0.05有統(tǒng)取,濾液加水放置24h,過濾后用石油醚萃取,水層計學(xué)意義加熱濃縮至浸膏,每克相當(dāng)于75g生藥,實驗時用2結(jié)果其水溶液2.1踹葉囊吾乙醇提取物預(yù)防小鼠醉酒作用由1.3藥品與試劑56度紅星二鍋頭白酒,北京紅表1可知,與模型組比較藥物組醉酒潛伏期明顯延星股份有限公司生產(chǎn),批號20080724;總蛋白定量測長,翻正反射恢復(fù)(醒酒)時間明顯縮短(P<0.05)。試盒,批號200809152,丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)測1葉囊吾對小鼠醉酒溜伏期及酯酒時間的影響(x士3n=12)定試劑盒,批號200809112,丙二醛(MDA)試劑盒,組別醉酒潛伏期醒酒時間·批號200809102,甘油三脂(TG)試劑盒,批號/g·kg1d1/min20080982,谷胱甘肽過氧化物酶( GSH-Px)測試盒,機(jī)型21.4±3.5153.6±11.4蹄葉橐吾5.6116.3±10.81)批號20080932,購自南京建成生物工程研究所;其余117.0±11.7)試劑為國產(chǎn)分析純。注:與模型組比較P<0.05,2)P<0.01(表2~3同)。1.4動物及分組22蹄葉棄吾乙醇提取物對小鼠急性酒精中毒的14.1蹄葉素吾對小鼠醉酒潛伏期及醒酒時間的保護(hù)作用影響36只小鼠隨機(jī)分為3組,模型組,蹄葉囊吾22.1血清學(xué)檢查表2結(jié)果顯示,與模型組相高劑量組(5.6g·kg2·d),蹄葉豪吾低劑量組比,蹄葉橐吾組TG及ALT含量均明顯降低(P<(28g“kgd);每天g給藥2次連續(xù)4d其中0.05);MDA含量則無顯著性差異。正常組和模型組ig給予等體積蒸餾水(含吐溫囊2踏葉膏吾對小鼠血清中TG,MDA,GPT80),給藥容積均為20mL·kg。第4天下午詔給含量的影晌(x,n=12)予相應(yīng)藥物或等體積蒸餾水后30min,均謳I次56°二鍋頭白酒14mL·kg,然后觀察小鼠的活動情組況,記錄各組小鼠翻正反射消失(醉酒潛伏期)時間正常中國煤化工43235.14137及翻正反射恢復(fù)(醒酒)所用時間。模型CNMHG36642.56±5.702±0.3514.19±3.7035.89±7.031.4.2蹄葉橐吾乙醇提取物對小鼠急性酒精中毒的1.41.54±0.41)14.41±5.3736.10±7,09)保護(hù)作用60只小鼠隨機(jī)分為5組,正常組,模型組,第16卷第14期中國實驗方劑學(xué)雜志Vol 16. No 142010年10月Chinese Journal of Experimental Traditional Medical FormulaeOet.2010表3蹄葉囊吾對小鼠肝組織中TG,MDA,ALT, GSH-PX含量的影響(x±,n=12)MDAALTGSH-Px組別/ mmol L“l(fā)/μumol·g“1U·mU·mg0.83±0.182)15.88±2.67142.75±2.912)132.6±14.61)模型1.57±0.4520.59±12.0447.28±3.4883.5±l1.9蹄葉橐吾16.47±2.6644.40±2.37113.4±15,920.99±0.252)16.68±3.8544.42±1.561)110.3±13.420.1.11±0.361)8±18.62)2.22肝組織中生化指標(biāo)檢測表3結(jié)果顯示,與明蹄葉囊吾地上部分乙醇提取物降低酒精對肝臟的模型組相比,蹄葉豪吾組TG及ALT含量均明顯降低損傷作用的機(jī)制,可能與提高機(jī)體抗氧化能力有關(guān)(P<0.05);MDA含量與模型組相比無顯著性差異。另外,該實驗結(jié)果表明,蹄葉毫吾地上部分乙醇3討論提取物可以延長小鼠醉酒時間(潛伏期),縮短翻正該研究參照趙敏等的實驗方法并略加改進(jìn),反射恢復(fù)(醒酒)時間。說明蹄葉囊吾乙醇提取物成功的復(fù)制出小鼠乙醇性肝損傷動物模型。乙醇所對小鼠醉酒實驗有一定的預(yù)防性保護(hù)作用,也間接致肝損傷的重要機(jī)制之一是激活氧分子產(chǎn)生氧自由提示了蹄葉橐吾地上部分乙醇提取物對小鼠急性乙基導(dǎo)致肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化。MDA是氧自由基醇中毒起到一定保護(hù)作用。攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸而形成的脂質(zhì)過氧化物MDA含量的高低可反應(yīng)氧自由基水平和脂質(zhì)過[參考文獻(xiàn)]氧化的強(qiáng)度與速率。因此對MDA的檢測可反映出[1]李麗波,王玉祥孫連平等.蹄葉橐吾乙醇提取物抗機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化和機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的損傷炎作用的實驗研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2004,11程度。正常時轉(zhuǎn)氨酶主要存在于細(xì)胞內(nèi),血清中(5):285的活性很低組織器官中心肝活性最高。當(dāng)某種原2吉林省衛(wèi)生局吉林省藥品標(biāo)準(zhǔn)M97:3[3]曲香芝,于海玲.蹄葉囊吾乙醇提取物抗?jié)冏饔醚幸蚴辜?xì)胞膜通透性增高或細(xì)胞破壞時,轉(zhuǎn)氨酶大量究[冂]J.時珍國醫(yī)國藥,2006,17(7):1190釋放入血,造成血清中轉(zhuǎn)氨酶活性明顯升高因此測[4]趙敏,池莉平,王鳳巖,等,小鼠急性酒楠性肝損傷模量血清及肝組織中ALT含量,可以反映出肝臟受損型的建立及應(yīng)用[]華南預(yù)防醫(yī)學(xué),2005,31(1)程度6。肝臟是合成TG的主要場所,肝細(xì)胞能合成脂肪,但不能儲存脂肪。TG在肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成后與[5]孫玉芹高天蕓周姆等川芎嗪對小鼠急性肝損傷載脂蛋白及磷脂、膽固醇結(jié)合生成極低密度脂蛋白性脂肪肝保護(hù)作用的研究[J]中國臨床藥理學(xué)與治(VLDL),由肝細(xì)胞分泌入血而運(yùn)輸至肝外組織。如療學(xué),2007,5(6):540[6 Muller A, Sies H. Inhibition of ethanol-and aldehyde因中毒等原因TG不能形成LVDL分泌人血時,則聚induced release of ethane from isolated perfused rat liver集在肝細(xì)胞漿中,形成脂肪肝。因此,測量血清及肝by pargyline and disulfiram [J]. Pharmacol Biochem臟中TG含量可以反映肝臟受損情況切。本實驗中Bhav,1983,18(1):429蹄葉橐吾地上部分乙醇提取物可以降低小鼠血清及[7] Strubelt o, Younes M, Pentz F. Enhancement by肝組織中TG含量及ALT活性,說明蹄葉橐吾地上glutthione depletion of ethanol-induced acute部分乙醇提取物對小鼠急性乙醇中毒可能具有一定hepatotoxicity in vitro and in vioo[ J ]. Toxicology, 1987的保護(hù)作用。45(2):213GSH-Px是體內(nèi)一種重要抗氧化酶,具有清除體[8] PAN Lu-qing, REN Jia-yun, ZHENG De-bin, et al.Effects of benzo( a)pyrene exposure on the antioxidant內(nèi)脂質(zhì)過氧化物,保護(hù)細(xì)胞膜及生物大分子結(jié)構(gòu)的enzyme activity of scallop Chlamysfarreni [ J]. Chin J生物學(xué)功能,它能特異性催化還原型谷胱甘肽Oceanol Limnol, 2009, 27(1):43(GSH)轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸凸入赘孰?GSSG),將有毒害作[9]YnwP.JmB.LmCH.ctal. Antioxidant activity用的脂質(zhì)過氧化物(RoOH)還原成無毒害作用的羥中國煤化工基化合物(ROH),使H2O2分解,而且還能防止這些CNMHG rats[J].World J過氧化物的自由基重新發(fā)揮過氧化作用。因為Gastroenterology, 2009, 15(11): 1339蹄葉橐吾可升高小鼠肝臟組織中CSH-Px活性,表[責(zé)任編輯聶淑琴]