中國生物制品學(xué)雜志2000年第13卷第!期 Chin I Biological20,ol.3No.聚乙二醇6000對 Tween-80含量測定的影響沈琦劉大英(中國藥品生物制品檢定所,北京100050【摘要】目的了解聚乙二醇6000對測定Twen80含量的影響。方法將被檢樣品加95%乙醇沉淀蛋后,上清加二氯甲烷再加銨鈷硫氰酸鹽溶液用紫外分光光度計(jì)測A吸收峰。結(jié)果PC6000含量>500pgm時(shí),干擾 Tween80含量測定。結(jié)論一定濃度的PEG6000對測定Twn80含量有干擾【關(guān)鍵詞】聚乙二醇600(PEC600)吐溫80(Twen-80)凝血酶原復(fù)合物(PC)PFC6000為無毒的水溶性合成聚合體。是3.不含Twen80的不同濃度PEG6000對檢種性質(zhì)溫和的蛋白沉淀劑,已被廣泛地用于人血漿測結(jié)果的干擾的蛋白分離,特別是凝血因子類蛋白的分離。我國對不同濃度的PEC6000溶液按方法處理,在目前有數(shù)家單位采用PEC6000結(jié)合其他分離蛋白620m波長比色,5種濃度均能測出 Tween-80,但實(shí)的方法生產(chǎn)人凝血酶原復(fù)合物(PCC)。在生產(chǎn)工藝際不含Twee80。PEC6000濃度在500ml時(shí)影中采用SD病毒滅活方法。根據(jù)1995版的《中國生響更大,見表1。物制品規(guī)程》要求,在PCC的成品中應(yīng)檢測Twen4.不同濃度的PEG6000對檢測結(jié)果的影響80和PEC6000殘留量。筆者在研究用顯色法測定在已知Twn-80含量的標(biāo)準(zhǔn)液和含 Tween80rwcn80殘留量2時(shí),發(fā)現(xiàn)一定濃度的PC6000對的PCC樣品中加不同濃度的PEC600,計(jì)算回收Twen80含量的測定有影響。率,結(jié)果表明PEG6004004g/ml時(shí)不影響Twen材料與方法80的含量檢測,見表2、表3。1.試劑0000A95%乙醇、氯化鈉、二氯甲烷、硝酸鉆、硫氰酸銨0080均為AR級國產(chǎn)試劑;PEC6000進(jìn)口分裝,用水配0.60成0.1%; Tween80進(jìn)口分裝,用水配成0.1%;凝血酶原復(fù)合物,由R血制品公司和H生物工程有限公0.020司提供。220.0300.0400.02.方法a:0,1%PEG6000樣品加入95%乙醇沉淀蛋白,離心,上清液在7000am-0.004A0.10055℃水浴中吹去乙醇加入二氯甲烷,最后加入銨鈷硫氰酸鹽溶液。用紫外分光光度計(jì)測Aa的吸收0000220.0300.0400.01.試劑處理前的光譜掃描b: Dichloromethane700.0nm0.001A對0.1%PEC600、0.1%Twen-80和二氯甲烷3種溶液分別進(jìn)行光譜掃描。在620nm處均無光吸牧峰,見圖1(a、b、c2.3種溶液處理后的光譜掃描YHcNM煤化工對含 Tween-80的PC、100g/mlTw80標(biāo)準(zhǔn)0.U220.0300.0400.0500.0600,0700.0溶液和500 ug/ml PEG600溶液分別按方法進(jìn)行處e: 0. 1%Iween-s0理、二氯甲烷萃取,最后進(jìn)行全波長掃描。以上3種圖1試劑的光譜掃描溶液在620m波長均有吸收峰,見圖2(A、BC)。中國生物制品學(xué)雜志2000年第13卷第1期 hin J Biologicals20,vol.13.No,1700.00.032A表3不同濃度的PEG600對含Twen80POC樣品檢測0.1000.080的影響0.060Tween -80廠家批號回收率(%)0.040(ug/ml)970618 onegin2300300.04000500.0600.0700.0A: Tween-80(100ug/ml)7000nm0.057A045PCC樣品中Twe80與PEG6000殘留量的關(guān)系0.000230.0300.0400.0500.0600.0700.0按《中國生物制品規(guī)程》方法對18批PCC樣B:PGE6000(5004g/m)品Twen-80和PEC6∞殘留量檢測結(jié)果進(jìn)行追0.I700.00m0.028A蹤。R公司生產(chǎn)的前6批PCC,PEG6000含量分布0.080在192~368g/ml范圍,后6批PEC6000含量均<100g/m,Twe80含量均10gml,全部不合格。2300300.0400.0500.060后3批 PCC PEG6000含量<100ygml,Twen80含C:PCC(ugm,含we80)量全部合格,見表4。圖2含Twea80的PCC樣品、Twem80標(biāo)準(zhǔn)溶液和PEG6000溶液按方法處理后的光譜表4PC樣品中Twem80與PEG6000殘留量的關(guān)系家批號PEC6000pyml) Tween-80(pgm)表1不同濃度PFCG6000對檢測結(jié)果的干擾R9410l6PEG-6 000(/ml)Tween-80(ug/ml)94l018214970330表2不同濃度的PEC600對Twem-8標(biāo)準(zhǔn)液檢測的影響970824Fwxm-80標(biāo)準(zhǔn)液濃度 PEG-6m Tween80回收率42.6(eym)濃度(rm)(%98092452.921247.360.312140060.3中國煤化工20067.790.3CNMH117.39810015159.398l001611830.2130中國生物制品學(xué)雜志200年第13卷第1期 Chin j biradicals200,vol13No1生產(chǎn)工藝中去除Twen-80,才能使最終產(chǎn)品 Tween80含量不超標(biāo)我們的研究結(jié)果顯示PEC6000含量>5004(對華物工力肌位同志和中美合資上海萊主血mnl于擾Twen-80含量測定。對近幾年18批PCC中國煤化工持深致謝意!)PEC6000含量檢測結(jié)果的追蹤,PEG6000含量呈CNMHG明顯的下降趨勢,均<10)1gml,對Twen:0含量檢1中作人民共和國衛(wèi)生部中倒生物制品規(guī)程(-部),195測影響不大。H公司生產(chǎn)的前3批 PCC Tween-80含2沈琦,陳繼亭,劉大英.三種凝血子制品中Twem8殘留量測定量超標(biāo),PEG6000千擾的可能性不大,而是制品本方法的研究和建立中國生物制品學(xué)雜志,19,12(2):i8-121身 Tween-80含量高。所以要考慮改進(jìn)生產(chǎn)工藝,在(19903-18收稿,19904-19修阿)