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J Con-細(xì)胞因子聚乙二醇修飾物的研究進(jìn)展李曉光,翟所迪*(北京大學(xué)第三醫(yī)院藥劑科北京10083)0摘要:目的綜述細(xì)胞因子聚乙二醇 PEG修飾物的研究進(jìn)展。方法通過 查閱近年來(lái)國(guó)內(nèi)外的相關(guān)文獻(xiàn),從制備、產(chǎn)物穩(wěn)定性及藥物動(dòng)力學(xué)等方面進(jìn)行了總結(jié)。結(jié)果與結(jié)論細(xì)胞因子 聚乙二醇修飾物的穩(wěn)定性與體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特性均有改善其生物活性的發(fā)揮則受多種因素的影響,但可通過定點(diǎn)選擇性修飾、優(yōu)化反應(yīng)條件等手段提高PEG修飾物的生物活性。關(guān)鍵詞聚乙=醇修飾細(xì)胞因子中圖分類號(hào):R944文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1001- 2494( 2003 )5 - 0325 - 04細(xì)胞因子同一般的蛋白多肽類藥物一樣在生物體內(nèi)易醇琥珀酸琥珀酰亞胺酯) SC-mPEQ單甲氧基聚乙=醇琥珀被酶降解或抗體中和而失活并迅速經(jīng)腎清除。這使得此類酰亞胺酯等。此外,PEG的醛基衍生物也有應(yīng)用如單甲氧藥物的體內(nèi)穩(wěn)定性差,血漿半衰期短,從而影響了藥物作用基聚乙二醇丙醛9?；罨腜EG分子往往通過與細(xì)胞因子的正常發(fā)揮。加大劑量、頻繁給藥雖然可以提高療效,但同賴氨酸殘基上的e氨基或N_末端的a-氨基發(fā)生反應(yīng)生成酰時(shí)不良反應(yīng)增加。因此如何提高細(xì)胞因子類藥物體內(nèi)穩(wěn)定胺鍵、次級(jí)胺鍵或脲鍵等形式而共價(jià)結(jié)合。由于賴氨酸殘基性及延長(zhǎng)血漿半衰期已成為人們研究的熱點(diǎn)。最常見的是位點(diǎn)較多反應(yīng)結(jié)果往往難以控制,為此人們研究了一些可利用已有的緩控釋材料或劑型直接與細(xì)胞因子結(jié)合以形成進(jìn)行特殊位點(diǎn)修飾的PEG結(jié)合方法如唐微等10通過基因一些緩控釋 系統(tǒng)如脂質(zhì)體、生物可降解微球、納米粒等。細(xì)定點(diǎn)突變?cè)诓缓瑤€基的重組干擾素分子的糖基化位點(diǎn)97Asa胞因子類藥物通過包封、吸附、插入等方式與這些系統(tǒng)結(jié)合引入半胱氨酸,并使用自制的馬來(lái)酰亞-6-胺基乙酸mPEG并被保護(hù)起來(lái)不僅避免或減少了與體液中酶及抗體的直接酯對(duì)該干擾素分子進(jìn)行定點(diǎn)修飾結(jié)果表明結(jié)合產(chǎn)物的生物接觸還可以實(shí)現(xiàn)緩控釋給藥。另-種重要途徑就是對(duì)細(xì)活性沒有受到修飾的影響,并且穩(wěn)定性、溶解性有所增加。.胞因子進(jìn)行化學(xué)修飾。其目的是在保留細(xì)胞因子生物活性此外還有人在研究中將PEG活化為具有雙官能團(tuán)的分子,的基礎(chǔ).上通過改善分子的理化性質(zhì)來(lái)實(shí)現(xiàn)此類藥物的緩控將細(xì)胞因子和另外-種修飾物結(jié)合起來(lái),如Savva 等1由.釋。可用于修飾的物質(zhì)很多,如PVp1] ,PEC2-51 ,HSA[6]PEG( CO0H)首先合成了DOPE-PEG-COOH ,再通過等但最常用效果也最好的則是PEG修飾。本文對(duì)細(xì)胞因DOPE端與脂質(zhì)體相連rCOOH端與TNF-a結(jié)合而實(shí)現(xiàn)修子聚乙二醇修飾物的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。飾作用。1細(xì)胞因子聚 乙二醇修飾物的制備2細(xì)胞因子 聚乙二醇修飾物的分離、純化與鑒定人們常使用活化的PEG對(duì)蛋白質(zhì)多肽等大分子物質(zhì)進(jìn)PEG修飾細(xì)胞因子的分離與純化主要是基于反應(yīng)產(chǎn)物行修飾,而活化PEG分子主要有兩種途徑①直接將PEG的各組分電荷、分子大小、疏水性的差異利用各種色譜手段而末端羥基轉(zhuǎn)化為適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)②使用具雙官能團(tuán)的物質(zhì)作進(jìn)行的5。由于PEG活化分子與球狀蛋白難于分離所以為橋梁分別與PEG及待修飾的物質(zhì)相連。關(guān)于活化PEG.在實(shí)際應(yīng)用中多先利用電荷差異分離除去混合產(chǎn)物中未反分子的研究,已有人作了十分詳盡的綜述7。近幾年的文獻(xiàn)應(yīng)的PS7年甘廣;此列立物再根據(jù)不同PEG化蛋中國(guó)煤化工顯示常用來(lái)修飾細(xì)胞因子類藥物的PEC活化形式主要是一白質(zhì)在MH子排阻色譜等手段分離。些PEG的羧酸酯衍生物8-9]如SS-mPEQ單甲氧基聚乙二國(guó)內(nèi)則CNM!G被硫酸銨鹽析沉淀的方作者簡(jiǎn)介李曉光,男碩士研究生通訊作者:翟所迪,男,副主任藥師,碩士生導(dǎo)師Tel ( 010 >62017691 - 2740 ,Fax X 010 )62050893E- mail zhaisuodi@ 263. net中國(guó)藥學(xué)雜志教揮5月第38卷第5期Chin PharmJ .2003 May.Vol.38No.5 . 325 .法先將白細(xì)胞介素2(IL-2)和PEG修飾的產(chǎn)物與過剩的質(zhì)的改善大大提高了修飾后細(xì)胞因子在體內(nèi)的穩(wěn)定性。PEG修飾劑及其它副產(chǎn)物分離再結(jié)合溶解度色譜效應(yīng)采有文獻(xiàn)表明分析方法的不同會(huì)對(duì)藥動(dòng)學(xué)測(cè)定結(jié)果有一用分子篩色譜將IL-2與PEG-IL-2完全分開12]。PEG 修飾定影響。Pettit 等17使用兩種不同方法考察比較了IL-5 在細(xì)胞因子形成的異構(gòu)體在電荷、疏水性、分子大小上的差異經(jīng)PEG修飾前后藥動(dòng)學(xué)的變化情況結(jié)果表明對(duì)于未修飾均較小所以分離難度很大往往要求特殊的方法或嚴(yán)格的的IL-5而言兩種測(cè)定方法的結(jié)果相差不大而修飾后細(xì)胞控制分離條件。如Monkarash 等13]使用一種磺丙基樹脂,因子的測(cè)定結(jié)果則因方法的不同有明顯的差異。利用各單PEG-IFN 異構(gòu)體局部電荷的微小差異來(lái)進(jìn)行分修飾產(chǎn)物的分子量會(huì)對(duì)藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)產(chǎn)生明顯影響,有研離最終分離得到了11種異構(gòu)體。究表明,以分子量為12000 6000的PEG分子分別單分子PEG修飾細(xì)胞因子的PEG化形式、純度、分子量等有用修飾rhG-CSF ,并將修飾后的產(chǎn)物與rhG-CSF 靜脈注射給的信息可通過SDS-PAGE電泳,HPLC ,SEC(空間排阻色藥發(fā)現(xiàn)隨著3種分子的表觀分子量增加,平均滯留時(shí)間明譜) ,GPQ(凝膠滲透色譜)等手段確定。SDS- PAGE電泳法可顯增加同時(shí)血漿清除率也依次下降14]。Tsutsumi 等18 ]制以用于分析PEG化蛋白的純度、確定PEG修飾程度及產(chǎn)物備了低、中、高3種分子量的PEG-TNF-a發(fā)現(xiàn)與未修飾的細(xì)的比例,但不適于測(cè)定產(chǎn)物的分子量。Niven 等141分別用.胞因子相比,t1/2 分別延長(zhǎng)了14,37 43倍。此外給藥劑量、SDS- PAGE電泳和質(zhì)譜的方法測(cè)定連接了PEGo000 ,PEG2000途徑、方式的不同也會(huì)產(chǎn)生-定影響。有文獻(xiàn)報(bào)道將PEG-的兩種rhC-CSF的分子量,結(jié)果表明同樣條件下電泳法的G-CSF分別以5.96594 ug kg-'給藥后山2分別為1.94及測(cè)定結(jié)果明顯偏大因此宜采用質(zhì)譜法確定真實(shí)的分子量。2.30 IF2]而將PEG修飾的rhG-CSF經(jīng)靜脈注射肺部噴霧3細(xì)胞因子聚乙二醇 修飾物的穩(wěn)定性及肺部支氣管滴注給藥后相應(yīng)的的藥動(dòng)學(xué)行為有明顯不PEG修飾細(xì)胞因子會(huì)由于分子間相互作用而導(dǎo)致聚集,同141。而聚集的難易程度與其連接鍵的形式有關(guān)。有研究顯示在5影響細(xì)胞因子 聚乙二醇修飾物生物活性的因素rhG-CSF分子N-末端通過烷基化或酰基化反應(yīng)進(jìn)行單分子5.1聚乙二醇修飾位點(diǎn)的影響PEG修飾并將產(chǎn)物放置8周后,以SEC ,IB(離子交換色譜)細(xì)胞因子自身存在著-些與其生物活性密切相關(guān)的區(qū)的方法分別測(cè)定樣品峰的保留比例發(fā)現(xiàn)以次級(jí)胺鍵連接的域一旦PEG修飾位點(diǎn)占據(jù)了這些區(qū)域或PEG伸展長(zhǎng)鏈形產(chǎn)物保留分別為82%,84%,而酰胺鍵產(chǎn)物的保留僅為.成的空間位阻妨礙了該區(qū)域與受體正常的結(jié)合就會(huì)造成細(xì)37%65%[15]。這可能是因?yàn)橥榛磻?yīng)形成的次級(jí)胺鍵胞因子體外活性的下降。一個(gè)研究結(jié)果顯示制備N-末端、保留了電荷從而增加了PEG化蛋白分子之間的靜電斥力lys35及l(fā)ys41位點(diǎn)單PEG化rhG-CSF時(shí),N-末端修飾產(chǎn)物而使其不易聚集。這說(shuō)明選擇適當(dāng)?shù)腜EG連接形式有利于的活性保留最高進(jìn)-步體內(nèi)活性研究則發(fā)現(xiàn),僅N_末端、使產(chǎn)物更加穩(wěn)定。lys35 位點(diǎn)PEG化的產(chǎn)物有-定延效作用,lys41 位點(diǎn)修飾產(chǎn)大量文獻(xiàn)表明PEG修飾細(xì)胞因子抵抗酶的降解能力有物與未修飾產(chǎn)物的體內(nèi)活性相比并無(wú)明顯差別15]所提高。如Pippo等2將PEG修飾的rhG-CSF和未修飾的5.2聚乙二醇修 飾程度的影響rhC-CSF與胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶- -同放置結(jié)果發(fā)現(xiàn)4h通常修飾程度越高修飾產(chǎn)物生物活性下降就越多。常后僅有小于10%的PEG-rhC-CSF被酶降解,而未修飾的細(xì)遠(yuǎn)等3在研究對(duì)IL-2分子進(jìn)行PEG化修飾時(shí)發(fā)現(xiàn)連接1胞因子不到1h就約有-半被降解。Tsunoda等16]考察了~2個(gè)PEG分子的產(chǎn)物總活性保留為95%連接了4~5個(gè)PEG修飾的TNF-a與未經(jīng)修飾的TNF-a對(duì)胰蛋白酶和組織PEG分子的產(chǎn)物總活性保留為78%而當(dāng)IL-2 的可結(jié)合位蛋白酶的穩(wěn)定性結(jié)果發(fā)現(xiàn)TNF-a迅速被降解消除,而經(jīng)過磯乎被全部修飾時(shí)總活性保留僅為27%另一篇文獻(xiàn)報(bào)修飾的TNF-a則表現(xiàn)出更強(qiáng)的抵抗力并且隨著修飾物分子道2]其制備的PEG-rhG-CSF修飾程度最高時(shí)活性保留僅量的增高抵抗力也隨之增強(qiáng)。這可能是因?yàn)?PEG 長(zhǎng)鏈在為未修飾細(xì)胞因子的9%。修飾后可以形成一定的空間位阻 從而阻礙了酶與細(xì)胞因子影響PEC反應(yīng)修飾程度的因素較多,主要有反應(yīng)時(shí)間、的有效結(jié)合并且隨著修飾程度的升高細(xì)胞因子與酶結(jié)合修飾試劑的加入量、pH值等。通常,反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng)反應(yīng)越位點(diǎn)被掩蔽的可能性也越大故而耐酶性也相應(yīng)增強(qiáng)。充分活性下降越多,但反應(yīng)一旦完成就不再有任何影響。另一方面某些修飾產(chǎn)物會(huì)因?yàn)樗舛环€(wěn)定如用ss-對(duì)于修飾試劑的量而言，量越多修飾率越大活性下降的越mPEG修飾的產(chǎn)物中存在著酯鍵所以可能會(huì)發(fā)生水解，這顯著。pH值的影響與具體的PEG反應(yīng)條件有關(guān)。有人在時(shí)不僅PEG修飾的效果不復(fù)存在,水解后蛋白的免疫原性研究中發(fā)現(xiàn)用分子量為5000的PEG對(duì)干擾素a-2b進(jìn)行初也有所增加。中國(guó)煤化工7.5~8.5之間反應(yīng)活性4細(xì)胞因子聚乙二醇修飾物的藥動(dòng)學(xué)較高THCNMH G°由于PEG修飾細(xì)胞因子后分子量顯著增加而使其藥動(dòng)5.3具 他囚系時(shí)影啊學(xué)性質(zhì)相應(yīng)發(fā)生顯著變化,表現(xiàn)為血漿半衰期延長(zhǎng)、腎清除PEG活化酯種類的不同也會(huì)對(duì)PEG細(xì)胞因子的活性造率下降、達(dá)峰時(shí)間延長(zhǎng)等; PEG修飾后所形成的空間位阻也成一定影響在一個(gè)研究中發(fā)現(xiàn)同樣是反應(yīng)1 h ,BSC-PEG可以保護(hù)細(xì)胞因子不被體內(nèi)的酶降解或抗體中和。以上性比SC-mPEG和SS-mPEC對(duì)IFNa-2b 的修飾程度明顯高活326 .萬(wàn)石熬據(jù)armJ ,2003 May ,Vol.38 No.5中國(guó)藥學(xué)雜志2003年5月第38卷第5期性保留明顯低據(jù)分析這主要是因?yàn)锽SC-PEG兩端均有活也是優(yōu)化修飾效果的一個(gè)良好途徑。性基團(tuán),從而易使干擾素在修飾時(shí)發(fā)生交聯(lián)導(dǎo)致修飾程度7結(jié)語(yǔ)明顯增高。對(duì)于SC-mPEG SS-mPEG而言相同條件下,SC-目前多種細(xì)胞因子已被廣泛應(yīng)用于臨床如粒細(xì)胞集mPEG修飾產(chǎn)物則具有更高的活性[8]。此外,還有研究表落刺激因孔( G-CSF )干擾素( 1FN)白細(xì)胞介素(IL)等這明在修飾程度- -定的情況下隨著PEG分子量的增加相些生物制品具有療效高、見效快等優(yōu)點(diǎn),但體內(nèi)穩(wěn)定性差、血應(yīng)修飾產(chǎn)物的活性下降也越多[ 4 ,13]。漿半衰期短仍然是此類藥物乃至大多數(shù)蛋白多肽類藥物進(jìn)6優(yōu)化聚乙二醇修 飾細(xì)胞因子的研究行臨床應(yīng)用的最大障礙。在大量實(shí)驗(yàn)與臨床研究中,PEG修6.1 定點(diǎn)選擇性修飾飾已被廣泛的應(yīng)用于包括細(xì)胞因子在內(nèi)的多種蛋白多肽類通過選擇合適的PEG修飾劑在對(duì)細(xì)胞因子活性無(wú)影響藥物的修飾21]并已經(jīng)被證實(shí)是-種解決上述問題行之有或影響相對(duì)較小的區(qū)域進(jìn)行修飾可以確保產(chǎn)物有較高的活效的方法不僅可以提高上述藥物的體內(nèi)穩(wěn)定性延長(zhǎng)生物性保留同時(shí)也克服了以往PEG化修飾反應(yīng)發(fā)生位點(diǎn)較為半衰期還可以增加某些蛋白藥物的溶解度減弱或消除免隨機(jī)產(chǎn)物形式、活性、毒性不易控制的缺陷。由于天然蛋白疫原性、抗原性、毒性并顯著提高治療指數(shù)等22]這說(shuō)明了中賴氨酸殘基的數(shù)目與位置變化較大,所以N_末端成為了PEG修飾的方法具有廣泛的適用性和廣闊的發(fā)展前景。目進(jìn)行選擇性修飾的良好位點(diǎn)9。此外國(guó)內(nèi)有人在INF-Y 的前,PEG修飾的長(zhǎng)效干擾素( PEGintron )已經(jīng)被研制成功并糖基化位點(diǎn)上引入半胱胺酸,利用特殊的PEG活化酯與巰投入臨床使用相信未來(lái)將會(huì)有更多的PEG修飾細(xì)胞因子基的結(jié)合反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)了定點(diǎn)修飾10]。相繼成為臨床治療的有效藥物更好的為廣大的病人消除病6.2 控制反應(yīng)條件優(yōu)化聚乙二醇修飾效果痛。如前所述,許多因素都影響著PEG修飾產(chǎn)物的體內(nèi)外活性，當(dāng)反應(yīng)修飾物形式、分子量、反應(yīng)方式等-定的條件[1] Kamada H ,Tsutsumi Y ,Tsunoda S ,et al. Molecular design ofconjugated tumor necrosis factor-a isynthesis and characteristics下,PEG的修飾程度將對(duì)產(chǎn)物的活性保留有重要影響。通常of polyvinylpyrrolidone modified tumor necrosis factor-a[ J ].PEG修飾程度升高后產(chǎn)物的體外活性保留是下降的,但與Biochem Biophys Res Commun ,1999 257 2 )448.此同時(shí)產(chǎn)物的耐酶性增強(qiáng),血漿半衰期延長(zhǎng)使得體內(nèi)活性[2] Pippo KEJ ,W hitcomb KL ,de Prince RB ,et al . Enteral bioavail-ability of human granulocyte colony stimulating factor conjugated反而提高。因此可以通過控制反應(yīng)物加入量、反應(yīng)時(shí)間、反with pols( ethylene glycol IJ] Pharm Res ,1996 ,13( 1):102.應(yīng)pH值等條件找到一個(gè)合適的修飾度。在此基礎(chǔ)上也可進(jìn)3]常遠(yuǎn)唐微鄭仲承等.白細(xì)胞介素-2的PEG化[J].生物化學(xué)雜志,1996 ,12( 4 )445.一步選擇最優(yōu)的PEG相對(duì)分子質(zhì)量,PEG修飾劑種類等以[4] Tsutsumi Y ,Tsunoda s ,Kamada H ,et al . Molecular design of進(jìn)一步完善PEC修飾的效果。如王立夫等19通過控制反應(yīng)hybrid tumor necrosis factor-alpha. II :the molecular size of的條件來(lái)調(diào)整rIL-2修飾度實(shí)現(xiàn)了修飾產(chǎn)物較好的活性保polyethylene glycol- modified tumor necrosis factor-alpha afectsits anti-tumor potencs[ J]. Br J Cancer ,1996 ,74(7 )1090.留。[5] Gaertner HF ,0fford RE. Site-specifie attachment of functional-6.3 保護(hù)活性區(qū)域的聚乙二醇修飾ized poly( ethylene glycol ) to the amino terminus of protein[ J ].Biocongucate Chem ,1996 ,7 38.Tsunoda等16]在制備PEG修飾的TNF-a時(shí),引入了一[6] Paige A G ,Whitcomb K L ,Liu J ,et al . Prolonged circulation of種pH可逆性氨基保護(hù)試劑二甲基馬來(lái)酸酐在PEG修飾反recombinant human granulocyte colony stimulating factor by co-應(yīng)前先使其與TNF-a的一些活性區(qū)域結(jié)合,從而避免了valent linkage t0 albumin through a heteobifunctional polyethy-lene glyco[J]. Pharm Res ,1995 ,12( 12 ):1883.PEG化在這些部位的進(jìn)行。修飾反應(yīng)后再通過調(diào)節(jié)pH使.[7] Zalipsky s. Functonalized poly( ethylene glycol ) for preparation其從活性區(qū)域上解離出來(lái)而實(shí)現(xiàn)活性區(qū)域的恢復(fù)。其結(jié)果of biologically relevant conjugate[ J ] Bioconjugate Chem ,1995 ,顯示經(jīng)該處理后得到的各修飾細(xì)胞因子組分[ mPEG-TNF-a[8]口姚文兵，吳梧桐等.聚乙二醇對(duì)干擾素a-2b的初步化6 :150(+)的活性均比相應(yīng)未經(jīng)處理時(shí)產(chǎn)物[mPEG-TNF-d-)]學(xué)修飾研究J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2000 31( 1 )74.的活性高出20% ~ 40%?？鼓[瘤活性實(shí)驗(yàn)表明mPEG-TNF- [9] Kinster OB ,Brems DN ,Lauren SL ,et al . Characterization andd + )的活性比相應(yīng)的mPEG-TNF-d -高一倍。stability of N-terminally PEGylated rhG-CSF[ J]. Pharm Res ，1996 ,13(7)996.6.4 使用高分子量聚乙二醇分子修飾[10] 唐微常遠(yuǎn)徐C J飛等.蛋白質(zhì)定點(diǎn)PEG化研究97 cy8-IFN-r .PEG化細(xì)胞因子體內(nèi)穩(wěn)定性及血漿半衰期的改善主要的疏基專一PEG修飾[ J]生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào),1996 ,依賴于分子量的增加,以往研究中由于使用的PEG分子量[11] Savva M ,.Duda E ,Huang L. A genetically modified recombinant28( 3)312.較小僅幾千所以必須在較高的修飾率下才能達(dá)到可觀的tumor necrosis factor-a conjugated to the distal terminal of liposo-分子量但與此同時(shí)細(xì)胞因子的活性也降低了許多。目前有中國(guó)煤化工ol chain[J] Int J Pharm ,人報(bào)道使用-種分子量為40 000并含有支鏈的PEG分子對(duì)[12]CCHC N M H G質(zhì)分離純化的新方法[ J].生干擾素a-2a進(jìn)行修飾結(jié)果取得了很大的成功。該修飾產(chǎn)物物化字雜志,1996 ,12( 1)73.血漿半衰期延長(zhǎng)了70倍平均滯留時(shí)間提高了50倍并在[13] Monkarash SP ,Ma Y ,Aglione A ,et al. Positional isomers ofmonopegylated interferon a-2b Jisolation characterization ,and bi-相應(yīng)的II期臨床試驗(yàn)中證實(shí)其臨床療效明顯優(yōu)于未經(jīng)修飾ological activity[ J]. Anal Biochem ,1997 ,24x 2) 434.的干擾素20]。這提示人們研制合適的高分子量PEG分子，[14] Nien RW ,Whitcomb KL ,Shaner L ,et al. The pulmonary ab-中國(guó)藥學(xué)雜志2883年5月第38卷第5期Chin Pharm J ,2003 May ,Vol. 38 No.5. 327 .sorption of aerosolized and itrtatracheally intilled rthG-CSFanddue to longer plasma half-ife and higher tumor accumulation[ J ].monoPEGylated thG-CSF[J]. 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Structure function新型給藥系統(tǒng)J ].中國(guó)藥學(xué)雜志2001 36( 5 )292.studies of interleukin 15 using site-specific Mutagenesis ，[22 ] Kozlowski A ,Haris JM . Improvements in protein PEGylation :polyethylene glycol conjugation ,and homology modeling[J] Jpegylated interferons for treatment of hepatitis C[J] J Con-Biol Chem ,1997 272(4 )2312.trolled Release ,2001 ,72 217.[ 18] Tsutsumi Y ,Kihira T ,Tsunoda S ,et al . Molecular design of hy-(收稿日期2002-06-06 )brid tumor necrosis factor-a markedly enhaced antitumor potency真菌耐藥性研究進(jìn)展劉洪濤張軍東曹永兵姜遠(yuǎn)英“(第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室上海200333摘要:目的綜述近年 來(lái)真菌耐藥性研究的最新進(jìn)展。方法從真 菌耐藥性分類、產(chǎn)生機(jī)制和克服對(duì)策三個(gè)方面總結(jié)近幾年國(guó)內(nèi)外相關(guān)文章并加以分析和綜述。結(jié)果真 菌的耐藥性的形成比較復(fù)雜,有多種機(jī)制。結(jié)論解決 真菌耐藥性問題是個(gè)長(zhǎng)期而艱巨的任務(wù)需要更好的研究對(duì)策。關(guān)鍵詞真菌耐藥性機(jī)制中圖分類號(hào):R978.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1001 - 2494( 2003 )05 - 0328- 04.抗真菌藥物特別是氮唑類藥物如氟康唑和伊曲康唑的嗎啉類及- -些不相關(guān)的化合物如阿莫洛芬等。問世開辟了真菌病藥物治療的新時(shí)代。近年來(lái)隨著免疫1.2 真菌耐藥性分類 真菌耐藥性可有多種表現(xiàn)形式:①抑制劑的廣泛使用腫瘤放療、化療的普遍開展尤其是艾滋經(jīng)典耐藥性是指在感染部位有高濃度藥物的情況下病原體病患者的不斷增加真菌感染特別是深部真菌感染的發(fā)病率仍會(huì)侵害機(jī)體引起臨床疾病。②原發(fā)耐藥性是指病原體在急劇增加。然而就象細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性一樣隨著沒有接觸藥物之前就已經(jīng)存在的耐藥性。③繼發(fā)或獲得耐唑類藥物應(yīng)用日益廣泛又使真菌耐藥性問題日趨嚴(yán)重給藥性是指病原體接觸藥物之后產(chǎn)生的耐藥性。因此真菌耐抗真菌治療帶來(lái)新的更嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。當(dāng)前對(duì)真菌耐藥性的藥性可以是真菌固有的抗藥能力或真菌耐藥株自然選擇的研究已成為國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者所矚目的熱點(diǎn)。本文從真菌耐結(jié)果和真菌敏感株變異的結(jié)果。藥性分類、產(chǎn)生機(jī)制及克服對(duì)策三個(gè)方面,綜述近年來(lái)真菌此外還有-種耐藥性稱為臨床耐藥性指有些致病真耐藥性研究的最新進(jìn)展。菌盡管體外藥敏實(shí)驗(yàn)顯示對(duì)藥物敏感,但它引起的感染靠臨1抗真菌藥物及真菌耐藥性分類床用藥不能有效控制或停藥一段時(shí)間后能復(fù)發(fā)。臨床耐藥1.1 常用抗真菌藥物現(xiàn)在臨床使用的抗真菌藥物在數(shù)量性也可有多種原因包括機(jī)體免疫功能低下、藥動(dòng)學(xué)特征、藥上遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于抗細(xì)菌藥物原因是真菌感染畢竟不象細(xì)菌感染物劑量不合理或藥物不易到達(dá)的感染部位等。那樣常見而且真菌和哺乳類動(dòng)物細(xì)胞都是真核細(xì)胞藥物2 耐藥性產(chǎn)生機(jī)制作用的選擇性差。目前臨床常用的抗真菌藥物主要有①多導(dǎo)致真菌耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制主要為真菌細(xì)胞攝入/透入烯類:能損害真菌膜脂質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能,如兩性霉素B的抗真菌藥物藥量減少藥物作用的靶酶基因突變或過量表( AmpB)制霉菌素。②唑類抑制真菌羊毛甾醇14a-脫甲基達(dá)將藥物泵出/轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外的能力增強(qiáng)。但不同真菌對(duì)酶干擾細(xì)胞膜脂質(zhì)合成,如酮康唑、氟康唑、伊曲康唑等。不同藥物產(chǎn)生耐藥性的機(jī)制也不同,而且有時(shí)是多種機(jī)制共③烯丙胺類/硫代氨甲酸酯類:能競(jìng)爭(zhēng)性抑制角鯊烯環(huán)氧化中國(guó)煤化工，酶干擾細(xì)胞膜脂質(zhì)合成,如萘替芬、特比萘芬、托萘酯等。2.發(fā)現(xiàn)的AmpB ,它含有一④核苷類能干擾真菌核酸的合成及功能,如氟胞嘧啶。⑤條多雙THCN M H E的親水側(cè)鏈其多雙鍵側(cè)基金項(xiàng)目上海市科技發(fā)展基金資助項(xiàng)目( 98QB14009)作者簡(jiǎn)介 劉洪濤男碩士,講師。通訊作者 姜遠(yuǎn)英男教授博士生導(dǎo)師Tel ( 021 )25070371E-mail Jiangy ycn@ yahoo. com. cn328 .。larm J ,2003 May .Vol.38 No.5中國(guó)藥學(xué)雜志2003年5月第38卷第5期