第四軍醫(yī)大學學報990240第四軍醫(yī)大學學報資源系統(tǒng) JOURNAL OF THE FOURTH數(shù)字化期刊 WANFANG DATA (CHINAINFO) MILITARY MEDICAL UNIV ERSITY DIGITIZED PERIODICAL1999年第20卷第2期Vol.20No.21999聚乙二醇對人源ABO定型血清效價的影響楊世明楊棖林關鍵詞:聚乙稀二醇類;定型血清ABO血型系統(tǒng);效價中圖號:R457.11文獻標識碼:B0引言實驗觀察與應用表明聚乙二醇(PEG)能增強酶法配血和間接抗人球蛋白試驗的敏感性,縮短了配血試驗和不完全抗體的檢測時間[1.為了解PEG能否提高人源ABO定型血清的效價,我們用PEG濃縮人源ABO定型血清對PEG不同分子量、不同濃度、不同濃縮時間和溫度對血清效價的影響以及濃縮后不同層次的血清效價進行了實驗比較和應用1材料和方法1.1試劑與器材PEG試劑,日本進口天津天秦精細化學品有限公司分裝批號930109.pH7.0磷酸鹽緩沖液(PBS),9g/L生理鹽水單抗血清扭力天平離心沉淀器低溫離心機水浴箱玻璃試管和瓶子等1.2實驗與應用方法收集獻血員化驗檢查肝功合格的標本血清置4℃冰箱48h吸收冷凝集素離心分離血清置56℃水浴箱30min活用50m/新鮮紅細胞懸液測定原血清基礎效價.上述血清加入等量PEG溶液,混勻放15min~60min,3000r/min離心10min~30min棄去上清液沉淀物按100g/L加入生理鹽水稀釋再測定濃縮后的血清效價、親和力和特異性,合格后置-20℃冰箱保存;將因故不輸?shù)难菏占蜏仉x心30min,分離血清置56℃水浴1h以3000r/min離心30min,分離上層血清測定其效價、親和力和特異性后按上述方法濃縮.1.3結果判定測定PEG濃縮前、后血清效價、親和力和特異性所有試驗重復3次測定10份標本濃縮后血清效價均增高2個滴度和積分均增加13以上判為效價提高.2結果2.1不同PEG分子量對血清效價的影響將種不同分子量的PEG粉劑均按200mL/濃度配制加入等量血清攪拌濃縮分離血清測定效價結果顯示PEG6千提高血清效價的效果非常明顯,PG-1萬和PEG-2萬效果較差(表1)2.2Peg濃度對血清效價的影響用PBS將PEG-6千粉劑分別配成200g/,150g/L和100g/L的濃度,用不同濃度的PEG溶液濃縮抗A血清結果表明150mL/L的PEG濃度提高血清效價的效果最好(表2)第四軍醫(yī)大學學報990240表1不同PEG分子量濃縮前/后效價的比較PEG分子量效價積分親和力/s2萬32/3237/37>30/>301萬32/3237/37>30/>300.6萬32/12837/85>30/<15表2不同PEG濃度濃縮前/后效價的比較PEG濃度/ml'L-1效價積分親和力/s20032/6437/59>30/>2015032/51237/95>30/<1010032/3237/47>30/>252.3不同層次血清效價的比較將150溶液與血清等量混勻30min后,3000r/min離心30min,測定不同層次的血清效價結果沉淀物效價為512積分95親和力<10明顯高于1/2和下1/3層的血清效價(表3).表3PEG濃縮后不同層次血清效價的比較血清層次效價積分親和力/s1/24813>30下1/323>25沉淀物51295<102.4濃縮時間對血清效價的影響將PE溶液與血清混勻分別濃縮15min,30min和60min,結果15min,30min效價均為256積分83,60min效價為512積分95.2.5不同濃縮溫度對血清效價的影響將PEG溶液與血清混勻后分別置4C,22℃和37℃濃縮,結果4C效價512積分95,22C效價256積分83,37效價128積分71.2.6血清抗體特異性測定將濃縮后的定型血清分別與A型、B型、O型和AB型各10名獻血員紅細胞作凝集試驗證實特異性合格.3討論高質量的ABO定型血清是正確鑒定血型確保輸血安全的前提近年來發(fā)達國家已有用單抗血清取代人源ABO定型血清的趨勢但國內該工作起步較晚且單抗血清還存在著因其特異性強而只能判別一個抗原決定族可能會使一些A、B亞型漏檢因其濃度高就有大得多的機會與另一些非特異性分子發(fā)生假陽性反應[2]以及單抗血清本身也易被細菌污染而造成血型誤定等缺點[31,目前還不能完全取代人源ABO定型血清因此對人源ABO尤其是稀有定型血清進行最適制備、保存和提高其效價的方法學研究仍有重要意義.我們研究結果發(fā)現(xiàn)PEG-6千及其150g/L濃度提高血清效價的效果最明顯PEG提高人源ABO定型血清效價可能與血清抗體是免疫球蛋白PEG是線形大分子物第四軍醫(yī)大學學報990240質,具有極強的親水性加入反應體系后經(jīng)離心力的作用致使血清蛋白濃縮和沉淀[4],從而顯著提高血清效價.我們先后收集A,B型血清各800mL(效價32)用此方法濃縮后血清效價均提高到256~512積分83~95親和力s~12s出現(xiàn)凝集,3min時凝塊大于1.5mm2經(jīng)與傳統(tǒng)方法制備的ABO定型血清和單抗血清進行8000余人次的試驗比較同時用PEG溶液作陰性對照結果符合率為100%用PEG濃縮法提高人源ABO定型血清效價方法簡便效果明顯,不需特殊儀器設備PEG容易購買毒性低長期貯存不變質此法具有廢物利用節(jié)約血液資源降低成本費用提高經(jīng)濟效益等優(yōu)點.作者簡介:楊世明,男,43歲,主管技師作者單位:楊世明楊棖林第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院輸血科陜西西安710038參考文獻1楊世明楊棖林洪炳炎聚乙二醇快速檢測不完全抗體及其應用第四軍醫(yī)大學學報,199516(1):74-752李振才紅細胞血型及血型診斷試劑研究進展見:全軍輸血專業(yè)管理委員會編.輸血與輸血相關領域研究進展.北京軍事醫(yī)學科學出版社,1996:17-203方志明沈光趙桂珍.超濃縮法制備人源抗血清定型試劑的質量觀察中國輸血雜志,19958(3):131-1324桂勇陳宏礎黃天祿.用PEG分離血清高密度脂蛋白膽固醇及其亞組份的方法學探討臨床檢驗雜志,19875(4):170-172編輯王小仲收稿日期:1998-02-17;修回日期:1998-06-15