中國(guó)生物制品學(xué)雜志200年第13卷第期 hin I Biologicals2000yul.13No,1聚乙二醇6000對(duì) Tween-80含量測(cè)定的影響沈琦劉大英(中國(guó)藥品生物制品檢定所,北京100050【摘要】目的了解聚乙二醇6000對(duì)測(cè)定Twe80含量的影響。方法將被檢樣品加95%乙醇沉淀蛋白后,上清加二氯甲烷再加銨鈷硫氰酸鹽溶液,用紫外分光光度計(jì)測(cè)Ax吸收峰。結(jié)果PC6000含量>00pgm時(shí),干擾 Tween-80含量測(cè)定。結(jié)論一定濃度的PEC6000對(duì)測(cè)定Twen80含量有干擾?！娟P(guān)鍵詞】聚乙二醇600(PEC6000吐溫-80(Tw80)凝血酶原復(fù)合物(PCC)PEC6000為無(wú)毒的水溶性合成聚合體。是3.不含 Tween80的不同濃度PEG6000對(duì)檢種性質(zhì)溫和的蛋白沉淀劑,已被廣泛地用于人血漿測(cè)結(jié)果的干擾的蛋白分離,特別是凝血因子類蛋白的分離。我國(guó)對(duì)不同濃度的PEC6000溶液按方法處理,在目前有數(shù)家單位采用PEC6000結(jié)合其他分離蛋白620mm波長(zhǎng)比色,5種濃度均能測(cè)出 Tween-80,但實(shí)的方法生產(chǎn)人凝血酶原復(fù)合物(PCC)。在生產(chǎn)工藝際不含Twen.80。PEC6000濃度在500m時(shí)影中采用SD病毒滅活方法。根據(jù)1995版的《中國(guó)生響更大,見表1。物制品規(guī)程》要求,在PCC的成品中應(yīng)檢測(cè)Twer不同濃度的PEG6000對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響80和PEC60殘留量。筆者在研究用顯色法測(cè)定在已知Twen-80含量的標(biāo)準(zhǔn)液和含 Tween80rwcn80殘留量2時(shí),發(fā)現(xiàn)一定濃度的PEC6000對(duì)的PCC樣品中加不同濃度的PEC600,計(jì)算回收Twe-80含量的測(cè)定有影響。率,結(jié)果表明PEG600<400yyml時(shí)不影響Twen材料與方法80的含量檢測(cè),見表2、表3。1.試劑0000A95%乙醇、氯化鈉、二氯甲烷、硝酸鈷、硫氰酸銨000均為AR級(jí)國(guó)產(chǎn)試劑;PEC6000進(jìn)口分裝,用水配成0.1%;Twen80進(jìn)口分裝,用水配成01%;凝血0.04酶原復(fù)合物,由R血制品公司和H生物工程有限公0.020司提供。0.000220,0300.0400.05000600.070002.方法a:0,1%PEG6000樣品加入95%乙醇沉淀蛋白,離心,上清液在7000am-0.004A55℃水浴中吹去乙醇,加入二氯甲烷,最后加入銨鈷硫氰酸鹽溶液。用紫外分光光度計(jì)測(cè)Ax的吸收0.020結(jié)果0000220.0300.0400.05000600.0700,01.試劑處理前的光譜掃描b: Dichloromethane700.0nm-0.001A對(duì)0.1%PEC600、0.1%Twem-80和二氯甲烷0.1900.0803種溶液分別進(jìn)行光譜掃描。在620mm處均無(wú)光吸0.060收峰,見圖1(a、b、c)0.0402.3種溶液處理后的光譜掃描020對(duì)含 Tween.80的PC、10Og/ ml Tween-80標(biāo)準(zhǔn)220.0300.0400.0500.06000700.0溶液和500r/mlPE600溶液分別按方法進(jìn)行處e: 0. 1%6lween-8O中國(guó)生物制品學(xué)雜志2000年第13卷第1期 Chin J Biologicals20,vol13.N,14770000.032A表3不同濃度的PEG600對(duì)含Twe80POC樣品檢測(cè)01000.080的影響0.060PEG-600ween-廠家批號(hào)回收率(%)0.040R 970618 onegin2300300.04000500.0600.0700.0A: Tween-80(100ug/ml)800290.100700.0nm0057A5PCC樣品中Twem80與PEG4000殘留量的關(guān)系0.000230.0300.0400.0500.0600.0700.0按《中國(guó)生物制品規(guī)程》方法對(duì)18批PCC樣B: PGE-6000(50OHg/ml)品Twen-80和PEC600殘留量檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行追700.0mm0.028A蹤。R公司生產(chǎn)的前6批PCC,PEG6000含量分布在192-368gm范圍,后6批PEC6000含量均<0.060100g/m,Twen-80含量均10uyml,全部不合格。230.0300.0400.0500.0后3批 PCC PEG6000含量<100pg/m,Twen80含C:PCC(ugm,含wea80)量全部合格,見表4。圖2含 Tween80的PC樣品、Twe80標(biāo)準(zhǔn)溶液和PEG6000溶液按方法處理后的光譜表4PC樣品中Twen80與PEG6000殘留量的關(guān)系批號(hào)PEC6000pg/ml)Twee80(rgm)表1不同濃度PEC6000對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾R940l6PEG-6 000(ug/ml)10184997011520.83497061119624.097061849.0表2不同濃度的PC600對(duì)Tem-8標(biāo)準(zhǔn)液檢測(cè)的影Fe80標(biāo)準(zhǔn)液濃度PDC6mTmn-80回收率( re/ml)濃度(pqym)(%)98091625.139.952.947.3H9801003197.56080.69801005200I17.3981001440076.99810015159.320098l0016中國(guó)生物制品學(xué)雜志200第13卷第1期 Chin j biradicals20,vol.13.No1生產(chǎn)工藝中去除Twen80,才能使最終產(chǎn)品 Tween80含量不超標(biāo)我們的研究結(jié)果顯示PEG60含量>50048(對(duì)華牛物工程有限公馬力等幾位同志和中關(guān)合資上海菜血ml于擾Twe.80含量測(cè)定。對(duì)近幾年18批PCC制品有限公司干堅(jiān)等同志對(duì)該工作的支持深致融意!)PEC6000含量檢測(cè)結(jié)果的追蹤,PEC6000含量呈參考文獻(xiàn)明顯的下降趨勢(shì),均<109m,對(duì)Twe:80含量檢1中作人民共和國(guó)衛(wèi)生部中倒生物制品規(guī)程(-部、195測(cè)影響不大。H公司生產(chǎn)的前3批 PCC Tween-80含2沈琦,陳繼亭,劉大英.種凝血閃子制品中Twm8殘留量測(cè)定