第24卷第1期分析試驗(yàn)室Vol 24. No. 1Chinese Journal of Analysis laboratory澤瀉乙醇提取物的HPCE分離研究馬少妹“1王巧娥2李琦沈陽(yáng)2王小如21廣西民族學(xué)院化學(xué)化工系,南寧53000602.廈門大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院現(xiàn)代分析科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廈門361005)摘要采用高效毛細(xì)管電泳的膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜的分離模式MEKC)對(duì)澤瀉的乙釀95%湜取物進(jìn)行分離研究。以十二烷基硫酸鈉SS腋束為準(zhǔn)固定相硼砂為緩沖體系甲醇為有機(jī)添加劑,考察了Ss濃度、硼砂濃度、p甲醇用量、電泳電壓、電泳溫度等對(duì)分離的影響。結(jié)果表明:硼砂緩沖體系為運(yùn)行緩沖溶液pH⑨.18~9,20)硼砂濃度3mm/lSs濃度45mmo/1甲醇體積分?jǐn)?shù)30%分離電壓25kV分離溫度25℃時(shí)分離效果最好。在此條件下得到分離度和重現(xiàn)性均較好的澤瀉乙醇提取物的HPCE色譜圖。關(guān)鍵詞澤瀉膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜汾離中圖分類號(hào)x657.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:文章編號(hào):0072200501-000603澤瀉是一味常用中藥有利水濕、化痰飲、降火械廠)澤瀉藥材采于福建建甌經(jīng)鑒定為澤瀉科氣、去濕熱、補(bǔ)陰益氣等功效門歷經(jīng)300多年至澤瀉屬植物 Alisma orientalis(Sam.) Juzep.十二烷今仍具有誘人的開(kāi)發(fā)前景,為世界醫(yī)藥學(xué)所關(guān)注?；蛩徕c(色譜純, sigma公司),NaH2PO4NaOh目前澤瀉主要以23-乙酰澤瀉醇B為質(zhì)控指標(biāo)采硼砂無(wú)水♂醇均為分析純。23-乙酰澤瀉醇B24用薄層掃描泫LCλ高效液相色譜汯HC對(duì)其乙酰澤瀉醇A〔南京中醫(yī)藥大茡植物藥深加工工質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)23程研究中心高效毛細(xì)管電泳HPCE)前正廣泛應(yīng)用于中1.2實(shí)驗(yàn)方法草藥指紋圖譜的研究45廴本文采用高效毛細(xì)管1.2.Ⅰ分析液制備將澤瀉的干燥塊根粉粹過(guò)電泳的膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜的分離模式對(duì)澤瀉的250{m篩混合均勻后準(zhǔn)確稱取5.0g,置于50乙釀95%湜取物進(jìn)行的分離研究得到了分離度mL曆口瓶錐形中加25mL95%乙醇超聲提取2和重現(xiàn)性均較好的澤瀉藥材的HPCE色譜圖譜,為次每次30min。提取液合并離心分離取上清液建立澤瀉藥材HPCE指紋圖譜庫(kù)提供實(shí)驗(yàn)方法和為分析液。依據(jù)從而為全面評(píng)價(jià)澤瀉藥材的質(zhì)量提供參考。1.2.2HE分離按要求配制實(shí)驗(yàn)用操作緩沖實(shí)驗(yàn)部分液運(yùn)行前超聲脫氣15min。毛細(xì)管柱使用前依次1.1儀器與試劑用0.1mol/ L NaOH和水及緩沖液沖洗5min然后HP3DCE型高效毛細(xì)管電泳儀(美國(guó)惠普公在運(yùn)行電壓下平衡30min以后每次進(jìn)樣依次用司),石英毛細(xì)管(60cmⅹ巧5ⅧmX河北永年光纖乙醇、水、0.1mo/ L NaOH溶液和水及緩沖液沖洗廠)828型pH測(cè)試儀美國(guó) Orion公司)SK320H3min進(jìn)樣前在運(yùn)行電壓下平衡5min本實(shí)驗(yàn)采超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司),M-用壓力進(jìn)檥(250kPa),二極管陣列DAD)檢測(cè)器CRO2R臺(tái)式冷凍離心機(jī) Hettich ) MilliQ超純水裝檢測(cè)檢測(cè)波長(zhǎng)202mm置JD-06A型高速中藥粉碎機(jī)溫嶺市大海藥材器收稿日期2003-08-17修訂日期2004-04-19第24卷第1期分析試驗(yàn)室ol.24.No.12005年1月Chinese Journal of Analysis laboratory2005-12結(jié)果與討論pH大于10,遷移時(shí)間延長(zhǎng)分離效果也不好。為2.1提取溶劑的選擇確定最佳的硼砂溶液濃度、pH和SDs濃度以色譜據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道6澤瀉的主要藥效成分為三萜醇優(yōu)化函數(shù)-COμ7(其值取決于所有峰的分離度)酮類化合物易溶于醇類等有機(jī)溶劑。制備分析液作為評(píng)價(jià)指標(biāo)分離度小于1作為0處理峰高表時(shí)分別采用無(wú)水乙醇、95%乙醇無(wú)水甲醇、95%示響應(yīng)值的大小)在檢測(cè)波長(zhǎng)202mm,分離電壓甲醇、乙腈、95%乙腈等溶劑進(jìn)行提取結(jié)果表明以25kⅤ工作溫度25℃,甲醇體積分?jǐn)?shù)為30%的條95%乙醇、95%甲醇提取效果為佳?？紤]到甲醇的件下進(jìn)行了三因素三水平正交試驗(yàn)方案I34)毒性最后選用95%乙醇為提取劑。正交實(shí)驗(yàn)的因素、水平以及結(jié)果見(jiàn)表1和表2。2.2毛細(xì)管電泳分離條件的選擇根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果表1)通過(guò)方差分析和顯2.2.1毛細(xì)管電泳模式的選擇澤瀉乙醇提取物著性檢驗(yàn)得岀因素A即SS濃度對(duì)分離效果影大部分是難溶于水的中性分子故選用MEKC非響最顯著因素C即硼砂濃度次之因素B即pH水毛細(xì)管電泳模式分別進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果表明MEKC最小表2)在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了擴(kuò)展試驗(yàn)最終得的分離度優(yōu)于非水毛細(xì)管電泳。出分離澤瀉乙醇提取物的最佳HPCE條件為:SDS2.2.2緩沖試劑的選擇毛細(xì)管的電滲流EOF)濃度為45mmo/L硼砂濃度30mmol/LH9.20,是MEKC技術(shù)的基礎(chǔ)。由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程選擇表面活甲醇體積分?jǐn)?shù)30%分離電壓25kV、分離溫度2性劑Ss為準(zhǔn)固定相因此只有在中性或堿性條℃。件下才能確保膠束最終從負(fù)極經(jīng)過(guò)檢測(cè)器一端)2.3重復(fù)性試驗(yàn)流出。如果p過(guò)小膠束向正極運(yùn)動(dòng)的速度大于在最佳緩沖體系和電泳條件下對(duì)同一樣品進(jìn)EOF速度而無(wú)法分離如果pH過(guò)大EOF增大,可行1天內(nèi)連續(xù)3次和連續(xù)2天檢測(cè)得到遷移時(shí)間能會(huì)使樣品中的組分未完全分離就被洗脫出系統(tǒng)。的日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.31%據(jù)此選擇了磷酸鹽和硼砂緩沖體系進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)和o.43%;峰面積旳日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差果表明弸砂緩沖體系優(yōu)于磷酸鹽緩沖體系。(RSD玢別為0.65%~0.72%和0.97%~1.04%2.2.3甲醇用量在本實(shí)驗(yàn)中,甲醇的主要作用各峰面積與樣品濃度成正比。通過(guò)內(nèi)標(biāo)法對(duì)23-乙是增溶。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲醇的體積分?jǐn)?shù)小于⑩0%時(shí),酰澤瀉醇B24-乙酰澤瀉醇A進(jìn)行定性從圖1可分離效果不好且毛細(xì)管容易堵塞而甲醇的體積分?jǐn)?shù)大于40%時(shí)分離效果也不好這可能是甲醇表1正交試驗(yàn)方案與結(jié)果量過(guò)多影響膠束的形成從而影響分離效果。甲Tab 1 Arrangement and results of orthogonal experiment醇的體積分?jǐn)?shù)為30%時(shí)可獲得滿意的分離。因素A因素B因素C實(shí)驗(yàn)2.2.4電泳電壓的選擇采用了17、20、23、25序號(hào))濃度硼砂濃度電滲流8、30kV不同的分離電壓進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨cA mmol/L) pH c/( mmol/L)著電壓的增大分離時(shí)間縮短但電壓越高分離度3(1)8.(1)151)30.96越低。綜合考慮選擇25kV為分離電壓3(1)9.02)252)53.631)9.53)353)2.2.5電泳溫度的選擇實(shí)驗(yàn)觀察了分離溫度為2)8.1)22)5220、23、25、28、30℃時(shí)的遷移時(shí)間和分離效果。結(jié)3(2)9.02)353)果發(fā)現(xiàn)溫度對(duì)遷移時(shí)間和分離效果的影響均不明32)9.53)1(1)41.顯。所以選擇接近室溫的25℃。40(3)8.51)353)2.2.6硼砂溶液濃度、pH和SDs濃度的選擇根40(3)9.02)151)61.99據(jù)初步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果翮砂溶液濃度、pH、SDs濃度對(duì)40(3)9.53)2(2)64K1340.8646HPCE分離影響顯著。當(dāng)SDs濃度小于35mml/L時(shí)23-乙酰澤瀉醇B和24-乙酰澤瀉A不分離。當(dāng)K3/349.32SDS濃度大于50mmol/L時(shí)或硼砂濃度大于409.22l1.91組合第24卷第1期分析試驗(yàn)室Vol 24. No. 1Chinese Journal of Analysis laboratory表2方差分析表Tab 2 Variance analysis方差來(lái)源平方和自由度均方差顯著性613.62306.81117.69153.51218.08109.04誤差)K總和)990.4FC,.)Foo22)=99F0o(22)=19tionalities, Nanning 530006), WANG Qiao-e, LI QiSHEN Yang and WANG Xiao-ru( The key Laboratory ofAnalytical Science of Moe, Xiamen University , Xiamen361005), Fenxi Shiyanshi,2005,241):8~10Abstract: The separation of the compounds extractedfrom rhizoma of Alisma orientalis( Sam. Juzep usingary chro-matography MKCC ) with sodium dodecyl sulphate( SDS )as the micellar phase borax as a buffer and圖1澤瀉藥材的毛細(xì)管電泳譜圖methanFig. I Electrophorograms of alisma orientalisas an organic additive was studied, which es-1-24-乙酰澤瀉醇A;2-23-乙酰澤瀉醇Btablished a fingerprint technique for the rhizoma of Alisma orientalis. The effects of sds micellar and borax看出24-乙酰澤瀉醇A較23-乙酰澤瀉醇B先洗脫 concentration, pH buffer, methanol volume fraction,p出來(lái)plied voltage and temperature on the separation werevestigated by the orthogonal test using chromatography參考文獻(xiàn)optimization function( COF )as the evaluation index. It[1]中華人民共和國(guó)藥典[M]北京:化學(xué)工業(yè)出版社. was found that the optimal separation conditions of these2000.184components might be achieved by using a fused silica[2]彭國(guó)平潘林梅文紅梅.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然 capillary with60 cm long and75mm, in which30科學(xué)版)2001,K3):154mmol/L borax buffer solution( ph 9. 20) containing 45[3]文紅梅李偉彭國(guó)平.中藥材,9982K12)595mmol/L SDS and 30 methanol was filled under the[4]謝培山.世界科學(xué)技術(shù)一中藥現(xiàn)代化2001x3)18voltage of 25 kV and a temperature of 25 C, HPCE fin-[5]王天松.中成藥20002x6)397gerprint of the rhizome of Alisma orientalis with perfect[6]龔樹(shù)生張建軍,曹廣智等.山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),a2000(1)28;b.K2)22separating size and repeatability could be expected[7]吳惠芳關(guān)福玉羅毅.分析化學(xué)19962410):11Thus the method provides a basic information for thewhole quantity control of the rhizoma of Alisma orientalisSeparation of ethanol extract of Rhizoma of Aln the productsisma Orientalis by High Performance Capillary elec. Keywords: Alisma orientalis; Micellar electrokinetictrophoresis( HPCE MA Shao-mei( Department of capillary chromatography ; SeparationChemistry and Engineering, Guangxi University for Na-