中國醫(yī)藥工業(yè)雜志 Chinese journal of pharmaceuticals2009,40(5)聚乙二醇單甲醚-琥珀酰基半胱氨酸的合成鄧家欣,蔡正艷,陶濤(上海醫(yī)藥工業(yè)研究院,上海200437)摘要:聚乙二醇單甲醚與琥珀酸酐開環(huán)酯化,N羥基琥珀酰亞胺活化羧酸后與胱氨酸反應得二酰胺化合物,用二硫蘇糖醇斷二硫鍵后制得可用于制備長循環(huán)脂質(zhì)體的聚乙二醇單甲醚-琥珀?；腚装彼?并經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜確認其分子量,總收率23%關鍵詞:聚乙二醇單甲醚-琥珀?；腚装彼?聚乙二醇單甲醚;長循環(huán)脂質(zhì)體;基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜;中圖分類號:O626文獻標志碼:A文章編號:1001-8255(2009)05-0331-03Synthesis of mPEG-SuccinylcysteineDENG Jia-xin, CAI Zheng-yan, TAO Tao*(Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry, Shanghai 200040)ABSTRACT: mPEG-Succinylcysteine, a material for preparation of long-circulation liposomes, was synthesizedfrom mPEG and succinic anhydride by ring-opening esterification to get mPEG-succinate, which after activation withN-hydroxysuccinimide was amidated with cystine. The disulfide was reductively cleaved by dithiothreitol with an overallyield of 23 %. Its molecular mass was determined by MALDI-TOF MSKey Words: mPEG-succinylcysteine; mPEG; long-circulation liposome; MALDI-TOF MS; synthesis聚乙二醇單甲醚-琥珀?；腚装彼?mPEG-水劑作用下與N-羥基琥珀酰亞胺反應后,再與胱succinylcysteine,1)是一種可用于制備長循環(huán)脂質(zhì)氨酸反應生成二(聚乙二醇單甲醚-琥珀酰基)胱體的巰基化聚乙二醇衍生物,它能與含有馬來酰亞氨酸(4),用二硫蘇糖醇( dithiothreitol,DTT)斷胺的磷脂反應,通過硫醚鍵生成聚乙二醇化的磷脂,二硫鍵后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離得到1(圖1)。本研從而制備聚乙二醇化的脂質(zhì)體2。由于聚乙二醇究對此法進行了工藝改進。制備2時反應溫度由能在脂質(zhì)體表面形成水化膜,阻礙血漿成分與脂質(zhì)40℃升至60℃,4h基本反應完全;制備3時體表面的吸附,從而降低網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對脂質(zhì)體的加入有機堿N甲基嗎啉可促進反應進行制備1時,攝取,延長脂質(zhì)體的體內(nèi)循環(huán)時間先經(jīng)柱色譜純化4,再用DTT斷開二硫鍵,所得1文獻用聚乙二醇單甲醚(mPEG)和琥珀酸純度達到90%以上酐反應生成聚乙二醇單甲醚-琥珀酸酯(2),在脫聚乙二醇是由重復單元-(CH2CH2O)-構成的高分子聚合物3,電子轟擊( electron bom-收稿日期:2009-01-09作者簡介:鄧家欣(1980-),男,博士研究生,專業(yè)方向:靶向給bardement)或快原子轟擊( fast atom bombardment藥系統(tǒng)研究質(zhì)譜圖中有大量碎片離子峰,分子離子峰很弱,E-mail:dengjiaxin007(@163.com通信聯(lián)系人:陶濤(1959-),女,研究員,博士生導師,從事工無法獲得聚乙二醇中各聚合鏈的絕對分子量及分業(yè)藥劑學研究Tel:021-55514600×123布。本研究采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間E-mail:taotaosipi@hotmail.com質(zhì)譜( matrix-asTH中國煤化工 ation-timeCNMHG332·中國醫(yī)藥工業(yè)雜志 Chinese journal of pharmaceuticals2009,40(5)of fight mass., MALDI- TOF MS)確定1的分子量。無碎片離子,可以直觀地反映連接不同端基的聚乙MALDI- TOF MS是在田中耕一于1987年發(fā)現(xiàn)的二醇衍生物各聚合鏈的絕對分子量及其分布。2的“軟鐳射脫附( (soft laser desorption)”技術基礎上產(chǎn) MALDI- TOF MS([M+Na],m/z)和3的 MALDI生的一種“軟電離”質(zhì)譜技術4,能夠將合成的 TOF MS(M+H],m/z)數(shù)據(jù)可確證合成相應化合高分子體系中各成分離子化,并且基本上只形成單物( MALDI- TOF MS圖譜存編輯部)。電荷離子,其質(zhì)譜圖特點是分子離子峰很強,幾乎OfcH,CH,0+MefCH2 CH20fMeMeotCH, CH,0+HmPEG 20002胱氨HHN-COCH2 CH2 C00tCH2CH20f-MDTTotCH,+MeHn-COCH2CH2CO0fCH2CH20F-Me圖11的合成路線實驗部分2136,2180,224,268,2312,2356,2400,2444等,arian4.7 Tesla ftms型傅里葉變換高分辨 MALDI-分別對應聚合度n為40~52的理論分子量,確證TOF質(zhì)譜儀,內(nèi)標為PEG2000。結構。聚乙二醇單甲醚-琥珀酸酯(2)聚乙二醇單甲醚-琥珀酰亞胺酯(3)500ml四頸瓶中加入氯仿(300m1)500ml四頸瓶中加入二嗯烷(250m)、2(10.0mPEG(購自遼陽科隆化學品有限公司,M=20,473mmol)、N-羥基琥珀酰亞胺(2.53g,2.0mmo)20.0g,10.0mmol)、琥珀酸酐(7.5g,74.9mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二酰亞胺鹽酸鹽和吡啶(5ml),油浴加熱至60℃,攪拌反應4h,(2.32g,12. I mmol)和N-甲基嗎啉(5m),油浴依次用0.5molL鹽酸(30ml)、水(30ml×2)和加熱至50℃攪拌8h,蒸去溶劑,剩余物溶于氯仿飽和鹽水(30ml)洗滌,無水硫酸鈉干燥,過濾,(200m),用0.5moIL鹽酸(40m×3)洗滌,無濾液濃縮至干,剩余物經(jīng)乙酸乙酯重結晶,得水硫酸鈉干燥,過濾,濾液減壓濃縮至干,得黃白色粉末狀固體2(18g,85.3%)。 MALDI-TOF色黏稠狀液體3(8.36g,80.0%)。直接用于下步MS(M+Na],mz):1915,1959,2003,2048,2092,反應。中國煤化工CNMHG中國醫(yī)藥工業(yè)雜志 Chinese journal of pharmaceuticals2009,40(5)聚乙二醇單甲醚-琥珀?；?胱氨酸(4)參考文獻胱氨酸(1.93g,8mmol)加至0.05 Mol/L hBs[ Suzuki s, Watanabe s, Masuko t,eta. Preparation of long緩沖液(plH74,50m中,攪拌下分次加入3(442g,(50m),減壓濃縮至干,剩余物經(jīng)硅膠柱色譜分go). Biochim Biophy4cm,1991451%2mmol),其間加0.5molL氫氧化鈉溶液維持novel method to coat immunoliposomes with poly (ethypH74。加畢室溫反應12h,過濾,濾液中加入甲苯immunoliposomes on cancer models in a cell-surface離[洗脫液:二氯甲烷-甲醇(10:1)],得黃色antigen-density-dependent manner [J]. Br J Cancer, 2003黏稠液體4(2.67g,30.1%)89(8):1545-1551聚乙二醇單甲醚-琥珀?；腚装彼?1)[3]鄭俊民.藥用高分子材料學[M].北京:中國醫(yī)藥科技出50ml三頸瓶中加入1mol/ L Tris-HCl緩沖液版社,2000:161-164(pH8.6,10ml)、4(2.2g,0.5mmol)和DTT[4]鄧慧敏,周麗華,張珍英等 MALDI-TOF質(zhì)譜法分析聚合(77mg,0.5mmol),室溫反應1h,經(jīng)葡聚糖凝產(chǎn)物[J].質(zhì)譜學報,2003,24(z1):1267-1270[5] Tanaka K, Waki H, Ido Y, et al. Protein and polymer analyses膠G-50分離[洗脫液:0.05 MOl/L HBS緩沖液up to m/z 100 000 by laser ionization time-of-flight mass(pH6.8)],得黃色黏稠液體1(2.08g,94.6%)。于spectrometry [J]. Rapid Commun Mass Spectrum, 198820℃冰箱充氮氣保存。MALD- TOF MS(M+H]2(8):151-153m/z):1996,2040,2084,2128,2172,2216,2260,2304,[6]陶露絲.質(zhì)譜技術的研究進展[J.中國食品添加劑,2007,2348,2392,2436等,分別對應聚合度n為40~52(4):153-155的理論分子量,確證結構。廣告索引封面:上?？房蛋录夹g有限公司彩插6:南京中船綠洲環(huán)保有限公司內(nèi)封1:溫州小倫包衣技術有限公司彩插7:上海法瑪康醫(yī)藥科技有限公司內(nèi)封2:2009年全國醫(yī)藥工業(yè)信息年會彩插8:貝克曼科爾特商貿(mào)(中國)有限公司封二:天津愛勒易醫(yī)藥材料有限公司彩插9:梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司封三:藥物綜合數(shù)據(jù)庫彩插10:天津鐳釋力醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司封底:第九屆世界制藥原料中國展插1:天津市天大天發(fā)科技有限公司彩插1:深圳麥克維爾空調(diào)有限公司插2:上海迪清過濾技術有限公司彩插2:賽多利斯科學儀器(北京)有限公司插3:上海一品顏料有限公司彩插3:上海弗魯克流體機械制造有限公司插4:化學醫(yī)藥與藥物制劑新產(chǎn)品開發(fā)參考彩插4:第十四屆中國國際醫(yī)藥(工業(yè))展覽會插5:中國醫(yī)藥數(shù)字圖書館暨中國醫(yī)藥工業(yè)國際論壇插6:無錫市佳諾精細化工設備廠彩插5:巴斯夫(中國)有限公司無錫意凱自動化技術有限公司中國煤化工CNMHG