醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2010年5月第29卷第5期乙醇對(duì)阿普唑侖體外代謝的影響韓艷,王慶偉,劉新友,張琰,覃華(第四軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科,西安710038[摘要]目的研究乙醇對(duì)阿普唑侖體外代謝的影響。方法將不同濃度阿普唑侖和乙醇與大鼠肝微粒體體外孵化,高效液相色譜法測(cè)定阿普唑侖及其代謝產(chǎn)物。結(jié)果4-羥基-阿普唑侖的生成可被高濃度乙醇顯著抑制,但不同濃度乙醇對(duì)α-羥基-阿普唑侖生成的影響均差異無(wú)顯著性。結(jié)論高濃度♂醇可抑制阿普唑侖代謝,同時(shí)服用可能產(chǎn)生毒副作用。[關(guān)鍵詞]阿普唑侖;乙醇;肝微粒體;相互作用[中圖分類號(hào)]R971.3;R965[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1004-0781(2010)05-0569-02Effect of Alcohol on Metabolism of Alprazolam in vitroHAN Yan, WANG Qing-wei, LIU Xin-you, ZHANG Yan, QIN Hua( Department of pharmacy, the SecondAffiliated Hospital, Fourth Military Medical University, Xian 710038, China)ABSTRACt Objective To investigate the interaction of alprazolam and ethanol in vitro. Methods Alprazolam andethanol were incubated with rat liver microsomes in vitro. Alprazolam and its two main metabolites(a-hydroxyalprazolam and 4hydroxyalprazolam) were measured by HPLC. Results The production of 4-hydroxyalprazolam, one main metabolite ofalprazolam, was weakly inhibited by high dose ethanol, but not a-hydroxyalprazolam. Conclusion The high-dose ethanolmay suppress metabolism of alprazolam, and simultaneous administration with alprazolam may cause toxic actionKEY WORDS Alprazolam; Ethanol; Liver microsomes; Interaction阿普唑侖是一種短效抗抑郁、鎮(zhèn)靜催眠藥,在低濃200g,第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證度下即可起效。該藥是一種應(yīng)用較廣泛的苯二氮草類號(hào):陜醫(yī)動(dòng)字第08014號(hào)。藥物。而飲酒在我國(guó)是一種非常普遍的餐飲習(xí)慣,即使1.3肝微粒體的制備SD大鼠禁食16h,斷頸處死,在服用藥物期間,很多人也會(huì)由于聚會(huì)或節(jié)慶等原因飲剖腹,用注射器吸取經(jīng)冰浴冷卻的0.9%氯化鈉溶液,用大量乙醇(酒精)。乙醇對(duì)多種藥物代謝有影響,筆者經(jīng)胸動(dòng)脈或門靜脈注入肝臟,灌流,除去肝中血液,照在本實(shí)驗(yàn)中主要探討乙醇對(duì)阿普唑侖代謝的影響。文獻(xiàn)[1]方法取出肝臟,采用鈣鹽沉淀法制備鼠肝微1材料與方法粒體,用核酸蛋白分析儀測(cè)定蛋白質(zhì)濃度21.1儀器與試藥美國(guó) Waters公司高效液相色譜儀1.4NADH再生系統(tǒng)的配制取0.15mol·L氯化Waer09二極管陣列檢測(cè)器,515型高壓泵,鎂(MgCl2)0.1mL(含異檸檬酸三鈉鹽2.8mg,異檸檬Wae17自動(dòng)進(jìn)樣器, Empower Pr色譜工作站),酸脫氫酶0.5mg),與0.1mol·LpH值為7,4TisAga64R自動(dòng)高速離心機(jī)(美國(guó) Beckman公司),Hl緩沖液0,9mL混合,可根據(jù)需要按比例配制一定DKZ21型電熱恒溫震蕩水槽(上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠),量,臨用新配。DU640核酸蛋白分析儀(美國(guó) Beckman公司)。1.5阿普唑侖與乙醇的體外孵化取大鼠肝微粒體,阿普唑侖和地西洋由中國(guó)藥品生物制品檢定所提用新鮮配制的 NADPH再生系統(tǒng)稀釋成1.2mg·m供,4-羥基-阿普唑侖、α-羥基阿普唑侖、異檸檬酸三鈉蛋白濃度混懸液,將不同濃度阿普唑侖與不同濃度乙鹽、異檸檬酸脫氫酶與還原型輔酶Ⅱ( NADPH)均為美國(guó)gma公司產(chǎn)品,其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純、色譜純或生醇分別共孵育,反應(yīng)總體積為0.5mL。阿普唑侖的濃度為0.5,1.0,2.0,4.0μmol·L,乙醇濃度分別為化試劑。1.2動(dòng)物雄性 Sprague-Dawley大鼠,體質(zhì)量18020,40,80mmol·L。每個(gè)樣品平行做3份。37℃預(yù)孵育5min,加人 NADPH(使其濃度為[收稿日期]2009-08-190.1mmol·L4),然后在37℃水浴中振搖20min。最[基金項(xiàng)目]·國(guó)家重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)(基金編后加人乙腈100μL和叔丁基甲醚3mL(含號(hào):20082X09101-2-016)[作者簡(jiǎn)介]韓艷(1975-),女,湖北枝江人,主管藥0.5g·m地西洋作為內(nèi)標(biāo))終止反應(yīng)3。渦旋振570Herald of Medicine Vol 29 No. 5 May 2010200μL,取50μL進(jìn)樣。和日內(nèi)精密度均<6%,回收率均>97%1.6阿普唑侖及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定色譜條件:Cε1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有結(jié)果均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差反相柱(150mm×4.6mm,5pm),美國(guó) Waters公司;(x±s)表示,組間比較用 ANOVA檢驗(yàn),P<0.05表示流動(dòng)相:20mmol·L磷酸二氫鉀(KH2PO4)-甲醇乙差異有顯著性。腈(40:20:30,WVV);流速:0.6mL·min3;檢測(cè)波2結(jié)果長(zhǎng):254m;柱溫30℃。α-羥基-阿普唑侖4羥基測(cè)定結(jié)果見表1,不同濃度(20,40,80mmol·L)阿普唑侖、阿普唑侖和地西泮的保留時(shí)間分別為9.6,乙醇對(duì)α-羥基阿普唑侖生成無(wú)明顯影響,而高濃度乙10.5,15.0,25.0min。ax-羥基-阿普唑侖、4-羥基阿普醇(80mmol·L)對(duì)4羥基阿普唑侖生成有一定抑唑侖的定量限分別為50和25ng:mL,日間精密度制作用(P<0.01)。表1乙醇對(duì)肝微粒體中阿普唑侖代謝的影響Tab. I Effect of alcohol on the metabolism of alprazolam in hepatic microsome nmol. min. mg, Its, n=3項(xiàng)目C-OHC-OH4-OH4-0H乙醇0 mmol.I-112.2±4.124.8±4.514.4±3.956.7±6.714.3±3.5120.2±13.326.3±5.1211.1±33.440mmol·L.-114.2±4.422.7±2.212.9±2.954.8±7.21.9±2.6110.8±23.126.8±3.2199.5±41.9”180mmol·L114.8±5.319.8±3.1213.5±4.247.8±6.0213.8±2.895.8±14.7225.6±3.7201.8±20.4·2對(duì)照組11.7±3.827.6±5.912.8±3.359.1±4.912.7±1.9118.1±23.427.0±4.7254.8±43.3OH:α-羥基-阿普唑侖;4-OH:4-羥基-阿普唑侖;與對(duì)照組比較,P<0.05,P<0.01a-OH: a-hydroxyalprazolam; 4-OH: 4-hydroxyalprazolam. Compared with control group, P<0. 05, P<0. 013討論弱,但高劑量乙醇仍可抑制阿普唑侖代謝,導(dǎo)致阿普唑阿普唑侖依賴CYP3A亞型代謝,尤其是CYP3A4′侖蓄積而產(chǎn)生一定毒性反應(yīng),因此服用阿普唑侖時(shí)最5。在肝臟及消化道上皮細(xì)胞中阿普唑侖可被CYP3A好避免飲酒。亞型代謝為α-羥基-阿普唑侖和4-羥基-阿普唑侖。c[DOn]10.3870/yyd.2010.05.005羥基-阿普唑侖和4-羥基-阿普唑侖的活性分別相當(dāng)于阿[參考文獻(xiàn)]普唑侖的66%和19%。肝臟是乙醇代謝的主要器官,肝[1 GIBSON GG, SKETT P Introduction drug metabolism[ M臟乙醛脫氫酶是乙醇代謝的主要酶。長(zhǎng)期大量攝入乙2nd ed. London: Blackie Academic and Professional, 1994217-21醇可誘導(dǎo)一些不依賴于乙醛脫氫酶的代謝途徑,如微粒體氧化系統(tǒng)(包括CYP2E1)。通過這些途徑代謝乙醇約2] LOWRY O H, ROSEBROUGH N J, FARRA L,el.Pmoein measurement with the folin phenol reagent [J]. J Biol為攝入總量的10%。短期內(nèi)大量乙醇可競(jìng)爭(zhēng)性抑制與Chem,1951,193:265-275乙醇代謝相關(guān)的酶,包括CYP1A2,CYPE,CYP3A4,而[3]胡云珍,姚彤煒,地非三唑與甾體激素類藥物的體外相互長(zhǎng)期小劑量乙醇則對(duì)這些酶產(chǎn)生誘導(dǎo)作用5作用[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2006,41(1):85-90ASAI等6曾研究過健康男性志愿者同時(shí)服用阿[4]李媛,金巖,段旭HPLC法測(cè)定血漿及尿液中阿普普唑侖2mg和乙醇0.8g·kg的藥效學(xué)改變。結(jié)果唑侖濃度[J].廣西科學(xué),2008,15(4):411-413.表明,聯(lián)用后志愿者記憶力發(fā)生改變,血壓降低,和單5] NNOILA M, STAPLETON J M, LISTER R,etat. Effects用阿普唑侖組及單用乙醇組相比均差異有顯著性。因of single doses of alprazolam and diazepam, alone and in此,筆者在本實(shí)驗(yàn)中在用體外方法觀察和乙醇共孵化ombination with ethanol, on psychomotor and cognitive后阿普唑侖代謝的改變。結(jié)果顯示高濃度乙醇可輕微performance and on autonomic nervous system reactivity in抑制4-羥基-阿普唑侖產(chǎn)生,但對(duì)α-羥基-阿普唑侖影healthy volunteers[ J]. Eur J Clin Pharmacol, 1990, 39: 21響不大,原因可能是阿普唑侖與生成a羥基阿普唑侖[6ASA1H, IMAOKA S. Microsomal ethanol oxidizing和4-羥基-阿普唑侖的酶的親和力有差異,具體機(jī)制還activity by human hepatic cytochrome P4so's[J].J需進(jìn)一步研究。Pharmacol Exp Therap, 1996, 277: 1004-1009總之,研究結(jié)果表明,阿普唑侖和乙醇相互作用較