實(shí)驗(yàn)研究2010年4月第7卷第12期石斛多糖提取工藝的研究陳蕤(廣州科技職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥營(yíng)銷系,廣東廣州510550)[摘要]目的:對(duì)石斛多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。方法:比較不同浸提溫度時(shí)間和除蛋白方法對(duì)多糖得率的影響優(yōu)化工藝。結(jié)果:石斛多糖最佳提取工藝條件為90℃水浸提3-4h,料水體積比為1:50,采用 Sevag法脫蛋白,樣品- Sevag溶液=1:1、氯仿-正丁醇=10-2.5,提取時(shí)間為30min。結(jié)論:此方法提取石斛多糖得率高,為理想的提取條件關(guān)鍵詞]石斛;多糖;提取工藝[中圖分類號(hào)]R2842[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A[文章編號(hào)]1673-7210(2010)04(c)-040-03Extraction technology of polysaccharide in DendrobiumCHEN RuiMedical Promotion Profession, Guangzhou Vocational College of Science and Technology, Guangzhou 510550, China[Abstract] Objective: To study optimum extracted -conditions of polysaccharide in Denderobiun. Methods: The mostyield of polysaccharide was gotten which volume ratio of dendrobium to water, distilling temperaturethe and method of iso-lating protein were used. Results: The effects was best when volume ratio of dendrobium to water was 1: 50, distilling at 90C for 3-4 hours, isolating protein by seveg method in the mixture composed of 50% sample and 50% sevag solution, the raio of chloroform and n-butano was 1025, the extraction technology was 30 min. Conclusion: The extraction method is per-fect because the most yield of polysaccharide is gotten[Key words] Dendrobium; Polysaccharide: Extraction technology石斛屬植物具有很高的藥用價(jià)值。而多糖類成分是石斛得率中具有免疫增強(qiáng)作用叫和抗腫瘤作用的活性成分,常以多糖24蛋白去除方法的選擇的含量高低來(lái)判斷石斛藥材質(zhì)量的高低。本研究對(duì)石斛多糖本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用 Sevag法、TCA法去除石斛多糖中的蛋白的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化探討,為其工業(yè)化生產(chǎn)和利用提供理論質(zhì)。241 Sevag法多糖提取液,真空抽濾,濃縮至一定體積,1儀器與試藥按比例加入氯仿-正丁醇混合液,劇烈振蕩,以5000r/min11儀器的轉(zhuǎn)速離心15min,取上清液。如此反復(fù)操作3次。為取得儀器設(shè)備有ES204型萬(wàn)分之一天平,電熱恒溫水浴最佳的實(shí)驗(yàn)效果對(duì)提取條件設(shè)計(jì)了正交試驗(yàn),因素水平鍋,RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器758B型紫外可見分光光度計(jì)。,見表112試藥石斛(四川樂(lè)山市歇馬鄉(xiāng),經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)嚴(yán)鑄云教豪1Sag法脫蛋自正交設(shè)計(jì)授鑒定為細(xì)莖石斛)洗凈殺青后于60℃烘干,粉碎,過(guò)50目Tab 1 Factors and their levels of the Sevag method篩備用。本實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純2方法與結(jié)果因素( v aavs2.1提取工藝口s1:110:2520取石斛粗粉約50g,加人石油醚(60-90℃)250ml,回流提取1h,脫脂,過(guò)濾,揮干溶劑,加人80%乙醇250ml,回流提取1h,過(guò)濾,揮干溶劑加入蒸餾水浸提2次,趁熱過(guò)濾,242TCA法多糖提取液,以5000mmin的轉(zhuǎn)速離心15min減壓濃縮至150m,0.%活性炭脫色,過(guò)濾,脫蛋白,加入取上清液加入草酸調(diào)整pH至pH=7,加入適量3%的TCA沉95%乙醇使溶液含醇為80%,于冰箱中靜置過(guò)夜,沉淀物用淀蛋白質(zhì)調(diào)整pH至pH=7放置過(guò)夜,以500mmin的轉(zhuǎn)速無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌,烘干,得石斛多糖粗制品。離心15min,取上清液。如此反復(fù)操作3次,取平均值。22加水量的選擇25極越合的測(cè)定方法原料與水體積比分別為1:20、1:30、140、1:50、160,比較中國(guó)煤化工含量測(cè)定其多糖得率。26結(jié)CNMHG23浸提溫度的選擇26.1不兩示體頁(yè)對(duì)們贈(zèng)多何平的影響見圖1。分別在80、85、90、100℃C條件下浸提3~4h,比較其多糖262不同浸提溫度對(duì)石斛多糖得率的影響見圖2。40醫(yī)藥報(bào) CHINA MEDICAL HERALD2010年4月第7卷第12期實(shí)驗(yàn)研究3討論2243.1石斛多糖提取前除雜質(zhì)22222.0石斛多糖提取前,先用石油醚或乙醚回流提取,可以除去石斛植物中的脂溶性雜質(zhì)及干擾性色素,而后用80%乙醇回流,除去蛋白質(zhì)及氨基酸等32石斛多糖浸提時(shí)加水量的選擇由圖1可知,加水量影響石斛多糖得率,隨著加水比的增加,石斛多糖的提取率呈上升趨勢(shì)。若加水比例過(guò)少,在沒(méi)有達(dá)到最佳浸提時(shí)間之前,浸出液已經(jīng)變得很少甚至糊鍋1:401:501:60從而影響多糖得率。如果加水過(guò)多的話,則以后的濃縮過(guò)程圖1加水量對(duì)石斜多糖提取率的影響較繁雜,所以選擇原料與水的比例為1:50。Fig 1 Effect on water content on the extraction rate of33石斛多糖浸提溫度的確定由圖2可知,在90℃條件下浸提3~4h,可達(dá)到較多的多糖得率。浸提時(shí),溫度過(guò)低則導(dǎo)致溶劑的滲透能力和溶劑能力降低,使多糖不能有效溶出,溫度過(guò)高則使得多糖被破壞,使多糖得率降低。34活性炭脫色多糖成分中會(huì)存在一些殘留色素,因此需要用活性炭脫色門,加入后應(yīng)多保留幾分鐘,使其脫色完全。35多糖提取過(guò)程中脫蛋白方法的選擇可得知ABC3為最佳組合,即Ⅴ樣氯你正丁=1:1、V重:Vgr=10:25、提取時(shí)間為30min時(shí)效果最佳,多糖得率為75808圖2溫度對(duì)石解多糖提取率的Sevag法脫蛋白的效果好于TCA法粗多糖得率及多糖Fig2 Effect on temperature on the extraction rate of polysaccharide含量均較高,所需時(shí)間較短,但 Sevag法也存在著重復(fù)多次產(chǎn)生較多有機(jī)物質(zhì)等弊端;而TCA步驟較簡(jiǎn)單,所用試劑較263 Sevag法脫蛋白的正交試驗(yàn)結(jié)果石斛多糖提取過(guò)程少,色素物質(zhì)能在TCA液中隨蛋白質(zhì)沉淀而部分除去,有利中應(yīng)用Seag法脫蛋白的正交試驗(yàn)結(jié)果見表2, Sevag法與于層析精制,但所需時(shí)間較長(zhǎng)。因此筆者認(rèn)為采用seagTCA法比較結(jié)果見表3。法除去石斛多糖中的蛋白質(zhì)更為合適。3.6多糖沉淀的分離、洗滌、干燥表2正交試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)乙醇沉淀后的多糖可通濾紙過(guò)濾、抽濾或者離心沉Tab 2 Results of the orthogon淀等分離得到,濾紙表面粗糙,過(guò)濾速度慢,消耗時(shí)間多,料C多糖得率(%)在上面的多糖不易洗脫,多糖獲得率會(huì)因此降低,因此在分20.98離時(shí)選用離心沉淀。粗制品烘干前用無(wú)水乙醇、乙醚涮洗,可除去多余水分。丙酮需加長(zhǎng)洗滌時(shí)間、加大用量,盡量除去石2081斛多糖中的色素。粗多糖的干燥可采用自然干燥、高溫烘干22233323231等。為實(shí)驗(yàn)室操作方便,本實(shí)驗(yàn)采用70-80烘干至恒重的2049方法。1968本實(shí)驗(yàn)確定石斛多糖最佳提取工藝條件為90℃水浸提1933-4h,料水體積比為1:50,采用 Sevag法脫蛋白樣品:氯仿2035正丁醇=1:1(Vv)、氯仿:正丁醇=10:25(V:v)、提取時(shí)間為20.191951192230min,粗多糖得率為147%,多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2247%,需要Kz21.262086進(jìn)一步純化精制。本結(jié)果促進(jìn)了石斛藥材的規(guī)模化種植,為19722080藥材的工業(yè)化生產(chǎn)和利用提供理論基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)3seag法與TcA法提取結(jié)果比較[幅的究云南植物研究1994,16ab3 Companson between Sevag method and TCA method粗多糖得率(%)多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)Sevag法2247YH中國(guó)煤化工CNMHG細(xì)胞株生長(zhǎng)抑制作用體外死與廾友141-3TCA法1985(下轉(zhuǎn)第43頁(yè))CHINA MEDICAL HERALD醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)412010年4月第7卷第12期·臨床研究檢驗(yàn)。P<005為有顯著性差異。血栓形成增加腎血流量的作用,還能升高血漿清蛋白,雙向2結(jié)果調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能;穩(wěn)定缺糖、低氧的心肌細(xì)胞膜,保護(hù)線粒經(jīng)治療后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組療效、住院時(shí)間及不良反應(yīng)比體和溶酶體,增強(qiáng)抗低氧能力,保護(hù)心肌細(xì)胞;降低心率減較見表1少心肌對(duì)氧的需求,又可維持相對(duì)高的心率而保證一定的心排出量和冠狀動(dòng)脈流量,以保證心肌供血。上述作用互相依組治療后療效比較情況(例附、相輔相成,即中醫(yī)稱為“血以載氣,氣以運(yùn)血”的觀點(diǎn)?？傆行?%本組中應(yīng)用中兩醫(yī)結(jié)合治療增加了冠狀動(dòng)脈流量保護(hù)實(shí)驗(yàn)組958341了急性心肌缺血低氧所致的心肌損傷,維持了細(xì)胞膜的完整與對(duì)照組比較,P<005性,增加缺血區(qū)邊緣的毛細(xì)血管,有利于側(cè)支循環(huán)的建立,加快損傷細(xì)胞的修復(fù);改善微循環(huán),抗血小板聚集和血栓形成,表2兩組住院時(shí)間和不良反應(yīng)比較(無(wú)±s,d)并且能改善血液流變學(xué)網(wǎng)。清除自由基包括超氧陰離子和羥組別例數(shù)「住院時(shí)間不良反應(yīng)(例)自由基對(duì)心肌細(xì)胞的損傷;能促進(jìn)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌組織實(shí)驗(yàn)組型纖溶酶原激活物,從而提高機(jī)體抗凝和纖溶活性,維持血管內(nèi)血流暢通,使治療效果大為提高。與對(duì)照組比較,P<005由本研究結(jié)果可知,中藥治療心肌缺血療效顯著、不良反應(yīng)少,而且價(jià)格低。中西醫(yī)結(jié)合治療方法對(duì)缺血、心肌損傷3討論起到了積極的保護(hù)作用,抑制了心室重構(gòu)、心肌纖維化的發(fā)心臟是一個(gè)機(jī)械做功的器官,這就決定了它具有高耗生與發(fā)展,是治療心肌缺血的新途徑。本研究以中西醫(yī)結(jié)合能、高耗氧、高代謝率的特點(diǎn)。心肌的氧攝取率高達(dá)70%,當(dāng)?shù)姆椒ㄖ委熜募∪毖岣吡嘶颊叩念A(yù)后及生活質(zhì)量。雖然心肌耗氧增加時(shí)再提高氧攝取率的潛力很小,需靠擴(kuò)張冠中醫(yī)治療還缺乏統(tǒng)一的診療標(biāo)準(zhǔn)但是筆者相信隨著臨床研狀動(dòng)脈、增加血流量以增加氧的供給。任何造成心臟耗氧增究水平的不斷提高在臨床與實(shí)驗(yàn)的密切配合下,一定會(huì)研加和(或)供氧減少的因素都影響心臟做功。心肌有氧氧化的究出治療心肌缺血的高效、安全的方藥,為心肌缺血的治療能力強(qiáng)而耐低氧能力差。正常情況下,心肌的代謝基本上全開辟新的途徑是需氧的明。所以,氧是心肌細(xì)胞活動(dòng)必不可少的物質(zhì),而氧參考文獻(xiàn)]是通過(guò)血液輸送給細(xì)胞的。心臟沒(méi)有“氧倉(cāng)庫(kù)”,完全依賴心[國(guó)際心臟病學(xué)會(huì)和協(xié)會(huì)及WHO命名標(biāo)準(zhǔn)化聯(lián)合專題組缺血性心臟肌血供,一旦缺血,立刻會(huì)引起低氧。低氧的直接后果是心肌病命名及診斷標(biāo)準(zhǔn)J中華心血管雜志1981901)75-76細(xì)胞有氧代謝減弱,產(chǎn)能減小,使心臟活動(dòng)時(shí)必需的能量供2]陳新謙新編藥物學(xué)M16版北京人民衛(wèi)生出版社200380應(yīng)不足,引起心絞痛、心律失常、心功能下降。近年來(lái)臨床治因陳灝珠實(shí)用內(nèi)科學(xué)M]12版北京人民衛(wèi)生出版社2051471.療多傾向于中藥和西藥相配合據(jù)相關(guān)研究表明中草藥抗心周Kin且,ZmtA, Lofye MT.eta. Postconditioning reduces infarctvia adenosine receptor activation by endogenous adenosine U] Cardiovasc肌缺血效果非常顯著,如葛根、丹參、人參、銀杏葉等中草藥Res200567(1):124133經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)有抗心肌缺血作用,其所含有效成分部分已5邵耕林傳驤現(xiàn)代冠心病北京北京醫(yī)科大學(xué)、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)分離鑒定并用于臨床。聯(lián)合出版社1994258-282本研究中通過(guò)中西醫(yī)結(jié)合治療心肌缺血有效率達(dá)細(xì)野史郎漢方藥理漢方與臨床19924743%原因在于丹參的化學(xué)成分有抗心絞痛的作用。20世陳玉珍丹滲滴丸合蔗加生脈欣治療無(wú)建狀心肌缺血56例長(zhǎng)春中紀(jì)70年代將丹參注射液及總提取物制成片劑用來(lái)治療心腦圖陳旭胡春杰陳日,川芎嗪注射液治療冠心病心絞痛的臨床研究吉血管疾病有良好效果,至今仍為一種常用藥在臨床使用網(wǎng)。本林中醫(yī)藥2007271)53-54方具有增強(qiáng)心肌收縮力消除體內(nèi)氧自由基,擴(kuò)張血管,減少(收稿日期:201001-04)(上接第41頁(yè))門王權(quán)淳分析數(shù)理統(tǒng)計(jì)與質(zhì)量控制北京:人民衛(wèi)生出版社1991櫪云馮衛(wèi)生孟江等正交試驗(yàn)法優(yōu)選大棗渣多糖水煎煮提取工藝中藥新藥與臨床藥理2003,14(3)200-2028]張西玉三種川產(chǎn)人工栽培石解的多糖含量測(cè)定樂(lè)山師范學(xué)院學(xué)4減玉紅,牛桂玲李麗娟等滑子菇水溶性多糖提取工藝的研充門食品報(bào)2004.195)88-89科技20011115-1819白五靜佟麗華香菇多糖提取工藝和含量測(cè)定方法研究門黑龍江醫(yī)5胡雪瓊吳紅棉郝志明等平菇多糖的提取工藝小湛江海洋大學(xué)學(xué)藥科學(xué)200629報(bào),200424(3)656916李瑞趙浩加陳乃林白花蛇舌草多糖除蛋白的方法研究]江蘇中醫(yī)中國(guó)煤化工斷工老的丸食品與發(fā)藥,200324(0056-5CNMHG(收稿日期:2001-08)CHINA MEDICAL HERALD即醫(yī)藥醒”43