論著中國醫(yī)藥導(dǎo)報2014年1月第11卷第2期桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用研究唐秀能韋紅棉▲陸翠林周至品李建哲劉冠達(dá)廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院,廣西南寧530011摘要]目的觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用,探討其作用機(jī)制。方法各自分別取60只合格昆明小鼠隨機(jī)分為空白對照組阿司匹林組(04gkg)桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高、中、低劑量組,每組各12只。采用熱板法、扭體法和甩尾法來觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用,并測定熱板法小鼠血清丙二醛(MDA)、前列腺素E2(PGE2)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。結(jié)果①與空白對照組比較,桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能顯著提高熱板法小鼠熱刺激痛閾,在給藥后3060、90、120min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<001),顯著降低小鼠血清MDA和PGE2含量,提高SOD活性,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<001)。②與空白對照組比較桂產(chǎn)襤香薊乙醇提取物均可顯著減少醋酸致痛時小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<005或P<001),其中桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高、中和低劑量組(6.0、30、15gkg)扭體抑制率分別為4545%、3565%和15.66%。③無論是與空白對照組比較還是與本組給藥前比較,桂產(chǎn)霍香薊乙醇提取物在給藥后3060、90、120min能顯著延長小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<001)。結(jié)論桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物具有顯著的鎮(zhèn)痛作用,其機(jī)制之一可能與減少炎癥介質(zhì)釋放、清除氧自由基有關(guān)。關(guān)鍵詞]桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物;鎮(zhèn)痛;機(jī)制[中圖分類號]R285(文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A[文章編號]1673-7210(201401(b)-0020Study on analgesic effects of ethanol extract of Ageratum conyzoides. Lfrom guangxiTANG Xiuneng WEl Hongmian LU Cuilin ZHOU Zhipin LI Jianzhe LIU GuandaRuikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning530011. China[Abstract] Objective To observe analgesic effects of ethanol extract of A geratum conyzoides L. from Guangxi and toexplore its analgesic mechanisms. Methods 60 Kunming mice were selected individually in hot-plate method, bodytorsion method and swinging-tail method, all of them were divided into blank control group, Aspirin group (0. 4 g/kg, Agera-tum conyzoides. L. low dosage group, medium dosage group, high dosage group with 12 rats in each group Hot-platemethod, body-torsion method and swinging-tail method were used respectively to investigate the analgesic effects ofethanol extract of A geratum conyzoides L from Guangxi, and then, the contents of malondialdehyde(MAD)and prostaglandinE2(PGE) and the activity of superoxide dismutase (SOD)in hot-plate mice serum were measured. Results COmparedwith blank control group, thermal stimulation threshold in hot-plate mice was enhanced by the ethanol extract of A ger-atum conyzoides. L. from Guangxi, the latency time of the mice's licking at 30, 60, 90, 120 min respectively were pro-longed, the differences were statistically significant(P< 0.05 or P<0.01). Meanwhile, MDA and PGE2 productions wenreduced and SOD level in mice serum enhanced, the differences were statistically significant (P < 0.05 or P<0.01)2 Compared with model control group, mouse twisting munbers were remarkably reduced by Ageratum conyzoides. L.from Guangxi, the differences were statistically significant(P< 0.05 or P<0.01). Body twisting inhibition rate in highmedium and low dosage group (6.0, 3.0, 1.5 g/kg) were 45.45%, 35.65% and 15.66% respectively. @3 Not only cepared with blank control group but also compared with former dose in each group, the latency of the tail flick responsein the mice at 30, 60, 90, 120 min were prolonged respectively after given the ethanol extract of A geratum conyzoidesL. from Guangx the differences were statistically significant(P < 0.05 or P< 0.01). Conclusion The ethanol extract ofAgeratum conyzoides. L. from Guangxi has significantly基金項目]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費科研課題(編號 analgesic effects, one of its analgesic mechanisms mayZ2011251)be relate to its ability of scavenging oxygen free radicals[作者簡介唐秀能(19714-),男,壯族,碩士,副主任藥師, and reducing the release of inflammatory cytokines碩士研究生導(dǎo)師;研究方向:生化藥理學(xué)及臨床藥學(xué)。[Key words] Ethanol extract of A geratum conyzoides Li,▲通訊作者Analgesic; MechanismVE CHINA MEDICAL HERALD Vol 11 No. 2 January 2014中國醫(yī)藥導(dǎo)報2014年1月第11卷第2期論著藿香薊屬于菊科植物藿香薊,又名勝紅薊、白花有痛閾值測定結(jié)束后,立即行小鼠眼球取血,3500rmin草、白花臭草、消炎草等,屬一年生草本植物,多以全離心15min,棄下層沉淀,留上清液。將上清液置草或葉及嫩莖入藥,傳統(tǒng)藥用功效為清熱解毒、止血、于-20℃冰箱保存,隨后按照試劑盒說明書的方法測止痛等,在亞洲、非洲、南美洲等地均廣泛使用2我定前列腺素E2(PGE2)MDA的含量和SOD活性。國多分布于廣東、廣西、云南、貴州、四川、江西、福建1.22對醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響另取一批小等地,民間常用于治感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、療瘡濕疹、鼠60只,體重(20±2)g,雌雄各半,分組及給藥同外傷出血燒燙傷等。本研究采用野生于廣西田間荒“12.”項下。末次給藥后1h,每只小鼠腹部注射地的桂產(chǎn)藿香薊進(jìn)行鎮(zhèn)痛作用研究,旨在探討其鎮(zhèn)痛0.6%醋酸溶液0.2mL,立即記錄注射后15min內(nèi)各作用及機(jī)制組小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù),并計算扭體抑制率67。扭體1材料與方法抑制率(%)=[(空白對照組小鼠扭體均數(shù)-給藥組小1.1材料鼠扭體均數(shù))空白對照組小鼠扭體均數(shù)]×100%。111實驗動物健康昆明種小鼠:體重(20±2)g;SPF123對甩尾法實驗的影響另取一批小鼠,將小鼠尾尖級。動物許可證號:SCXK桂2009-0002,廣西醫(yī)科大3cm滲入(48.0±0.5)℃恒溫水中,以小鼠第1次甩尾學(xué)醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。反應(yīng)時間作為痛閾指標(biāo),所有小鼠在給藥之前均進(jìn)行L.1.2桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的制備桂產(chǎn)藿香薊地測痛,以痛閾值10-30s為合格鼠,共6只。隨后分上部分陰干后粉碎,精確稱取2kg,加20倍量95%乙組及給藥同“1.1項下"。末次給藥后Ih,測定小鼠痛醇浸泡Ⅰh后加熱回流提取Ih,置冷后過濾,留置第閾值,當(dāng)痛閾值大于60s時停止測試,按60s記痛閾1次濾液;藥渣加10倍量95%乙醇加熱回流提取1h,值置冷后過濾,留置第2次濾液。合并2次濾液減壓回1.3統(tǒng)計學(xué)方法收乙醇,提取液減壓濃縮,再分別配成實驗所需的相采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,正態(tài)應(yīng)濃度的桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物向。分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較1.1.3藥物、試劑及儀器阿司匹林腸溶片,湖南新匯采用方差分析,兩兩比較采用ISD-檢驗。以P<制藥股份有限公司,批號121104;鹽酸嗎啡片,青海005為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。制藥廠,批號20130317;冰醋酸、甲醇、氫氧化鉀均為2結(jié)果分析純;超氧化物歧化酶(SoOD)試劑盒、丙二醛21桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠熱板實驗的影響(MDA)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供與空白對照組比較,阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙GJ-8402型熱板測痛儀,浙江寧海白石電子醫(yī)藥儀器醇提取物高劑量組、中劑量組在給藥后30、60、90120min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期(P<0.051.2方法或P<0.01),桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延1.21對小鼠熱板實驗的影響將雌性小鼠放在水溫長的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本組給藥調(diào)節(jié)到5℃的恒溫水浴熱板上,以小鼠舔后足的時間前后比較,桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量為痛閾指標(biāo)。所有小鼠在給藥之前均進(jìn)行測痛,以痛組在給藥后306090、120min均能顯著延長小鼠舔閾值10~30s為合格鼠。將合格小鼠60只隨機(jī)分為足反應(yīng)的潛伏期(P<0.05或P<0.01),桂產(chǎn)藿香薊5組:空白對照組阿司匹林組(04gkg)桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延長的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)乙醇提取物高、中、低劑量組(分別相當(dāng)于生藥60、意義(P>0.05)。見表1。30、15gkg),每組各12只。1次a,連續(xù)灌胃給藥7d,22桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠血清PGE2MDA末次給藥后0.5、1、1.5、2h各重復(fù)測定小鼠痛閾值,含量及SOD活性的影響當(dāng)痛閾值大于60s時停止測試,按60s記痛閾值。所與空白對照組比較,阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙表1桂產(chǎn)看香薊乙醇提取物對小鼠熱板實驗痛閾值的影響(s,)組別只數(shù)劑量(gkg)給藥前給藥后30給藥后60給藥后90min給藥后120min空白對照組1219.21±4.0819.76±5.392108±7.051907±6.2519.36±5.9阿司匹林組2236±5.5640.15±】1.67”40.58±14.22“▲30.27±11.2825.73±9.05桂產(chǎn)藿香薊醇提物高劑量組21.12±63131.28±11.60°▲37.59±1207“▲3603±9.34“35.85±10.03·桂產(chǎn)截香薊醇提物中劑量組1222.25±5.2333.11±12.7219±1266437.36±11.08▲桂產(chǎn)藿香薊醇提物低劑量組122242±6.8824.24±6.69注:與空白對照組比較,P<005"P<001;與同組給藥前比較,P<005,P<001;“-”表示未給藥CHINA MEDICAL HERALD Vol 11 No. 2 January 2014論著中國醫(yī)藥導(dǎo)報2014年1月第11卷第2期醇提取物對小鼠血清PGE2、MDA含量及SOD活性具醇提取物高劑量組、中劑量組均可顯著減少醋酸致痛有顯著的影響。阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物時小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)(P<0.05或P<0.01),桂產(chǎn)高劑量組、中劑量組均能顯著降低小鼠血清PGE2、藿香薊乙醇提取物低劑量組有減少醋酸致痛時小鼠MDA含量,明顯提高小鼠血清SOD活性(P<0.05或扭體反應(yīng)的次數(shù)的趨勢,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)P<0.01)。見表2。見表323桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)2.4桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠甩尾反應(yīng)的影響的影響與空白對照組比較,阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙與空白對照組比較阿司匹林組桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠甩尾反應(yīng)具有顯著影響。阿司匹林表2桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠血清PGE、MDA含量及SOD活性的影響(x土s)組別只數(shù)劑量(g/kgPGE,(ng/mMDA(nmol/mL)SOD(U/ml空白對照組0824±0.2154.16±03528.62±277阿司匹林組22220426±0.187205±0.264245±3.97桂產(chǎn)藿香薊醇提物高計量組0.528±0.179264±0.28桂產(chǎn)香薊醇提物中劑量組0.596±0.1952.79±0.3137.11±3.06桂產(chǎn)藿香薊醇提物低計量組0642±0.119°3.52±03830.51±299注:與空白對照組比較,P<0.05,"P<001;“-表示未給藥;PGF2:前列腺素E2;MDA:丙二醛;SOD:超氧化物歧化酶表3桂產(chǎn)著香薊乙醇提取物對醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響005)。組內(nèi)給藥前后比較桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高組別只數(shù)劑量15mn內(nèi)扭體扭體抑制率劑量組、中劑量組在給藥后3060、90、120min均能顯著延長小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期(P<0.05或P<0.01),桂空白對照組396±928阿司匹林組1204173±5.36產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延長的趨勢,但差異桂產(chǎn)藿香薊醇提物高劑量組126021.6±6784545無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。桂產(chǎn)藿香薊醇提物中劑量組123.0251±71336653討論桂產(chǎn)蕃香薊醇提物低劑量組121.5334±8.0615.66注:與空白對照組比較,"P<001;“-“表示未給藥及無數(shù)據(jù)熱板法和甩尾法是兩種較為典型的物理刺激致痛模型,扭體法致痛模型中較為典型的化學(xué)刺激模組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量組在給型。本實驗采用物理刺激致痛模型和化學(xué)刺激致痛模藥后30、60、90、120min均能顯著延長小鼠甩尾反應(yīng)型的方法來觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對實驗小鼠潛伏期(P<005或P<0.01),桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取的鎮(zhèn)痛作用,結(jié)果顯示,桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能顯物低劑量組有延長的趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>著提高熱板法小鼠熱刺激痛闊,在給藥后30、60、90、表4桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對小鼠甩尾潛伏期的影響(s,x組別只數(shù)劑量(gkg)給藥前給藥后30mn給藥后60mn給藥后90min給藥后120m空白對照組122346±4.3724.36±5.282465±6.1724.56±7.232464±6.25阿司匹林組122568±5924389±10.2441.26±13.213923+946·300±955桂產(chǎn)藿香薊醇提物高劑量組24.21±6023561±90143648±11.8242.15±10.36-▲40.27±11.364▲桂產(chǎn)香薊醇提物中劑量組302561±5873348±9.6234.21±1224394068±12.58°桂產(chǎn)藿香薊醇提物低劑量組122532±4.962553+682867±8.103136±8.8930.33±841注:與空白對照組比較,P<0.05,"P<001;與本組給藥前比較,P<0.05,P<0.01;“-”表示未給藥120min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期和小鼠他炎癥疼痛介質(zhì)的協(xié)同作用。MDA是自由基引甩尾反應(yīng)潛伏期,能顯著減少醋酸致痛時小鼠扭體反發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物,在外周和中樞氧自由基應(yīng)的次數(shù),統(tǒng)計學(xué)結(jié)果比較具有顯著性差異。說明桂均有致痛作用。SOD是自由基有力的清除劑,可通過產(chǎn)藿香薊乙醇具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。減少自由基的大量產(chǎn)生而達(dá)到鎮(zhèn)痛作用。本研究結(jié)果產(chǎn)生疼痛的主要原因大多由PGE2、白三烯和氧顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能降低實驗小鼠血清中自由基過多引起。PGE2是一種非常重要致痛介質(zhì),PGE2和MDA含量,提高小鼠血清SOD活性,提示桂可直接作用于神經(jīng)末梢引起疼痛,下調(diào)痛覺感受器的產(chǎn)藿香薊乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用可能與減少炎癥介質(zhì)痛閾值,提高其對其他致痛因子的敏感性,也可啟動釋放、清除氧自由基有關(guān)。疼痛所介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在外周和中樞都有重要有文獻(xiàn)報道,小鼠熱板法實驗的舔足底反應(yīng)不僅僅的作用,同時能增強(qiáng)組胺、5-羥色胺、緩激肽等其是脊髓反應(yīng),而且可能和高級中樞有關(guān),而對冰醋January 2014中國醫(yī)藥導(dǎo)報2014年1月第11卷第2期論著酸引起小鼠疼痛的扭體法實驗可能外周鎮(zhèn)痛有關(guān),endothelial interaclions by teactive metabolites of oxygen本實驗顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對熱板法和扭體and nitrogen relevance to ischemic heart disease [J]. Free法實驗小鼠均有明顯的鎮(zhèn)痛作用,可以推測桂產(chǎn)藿香Radic bio med,1998,25(4-5):404-433薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用與中樞和外周均有關(guān)系。[10 Flodgren GM, Crenshaw AG, Alfredson h,eta. imamate[參考文獻(xiàn)〕and prostagland in E2 in the trapezium uscle of female[1] Okunade AL Ageratum conyzoides L (Asteraceae)[]. Fisubjects with chronicm uscle pain and controls deter-mined by microdialysis [J]. Eur J Pain, 2005, 9(5): 511[2] Chah KF, Eze CA, Emuelosi CE, et aL Antibacterial and wound[11] Heinricher MM, Neubert MJ, Martenson ME. Prostaglandinhealing properties of methanolic extracts of some NigerianE2 in the midbrain periaqueductal gray produces hypermedicinal plants [] J Ethnopharmacol, 2006, 104(2): 164algesia and activates pain-modulating circuitry in therostral ventromedial medulla [J). 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