Science and Technology of Food industry研究與探討枳棋子影響乙醇代謝機(jī)理研究(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,北京100094)任發(fā)政羅云波蔣菁莉要為了研究積棋子解酒保肝機(jī)理,實(shí)驗(yàn)建立了低劑乙醇乙醇為北京化工廠產(chǎn)品;牛血清蛋白為 Sigmu公模型組(自由使用2.5%乙醇、3.9g/kg體重-d)和高劑重乙司產(chǎn)品;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。醇模型紐(自由飲用8%乙醇12.6g/kg體重d),權(quán)子組(小鼠自由飲用mgm子浸液)子ICR雄性健康小鼠60只,23~25g維通利華實(shí)驗(yàn)持續(xù)30d驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。測定小鼠肝臟乙醇脫氨酶(ADH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)活性及丙二群752紫外分光光度計(jì)上海棱光技術(shù)有限公司(mda)谷甘(sH)含量結(jié)果表明長期攝入乙醇 spectrumlab22p分光光度計(jì)上海棱光技術(shù)有限引起肝 ADH SOD GST活降低,導(dǎo)致MDA含量片高和GH含量下降,積子提取液可抗乙引起的公司DL40B離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器上述變化,具有解酒保肝作用關(guān)詞旗子 ADH SOD MDA GSH1.2方法中圖分類號(hào):TS201.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A1.2.1動(dòng)物分組1CR雄性健康小鼠60只,按體重文章編號(hào):1002-030622206-02大小隨機(jī)分組:空白對(duì)照組10只,飲用白來水;低醇模型組10只,飲用2.5%乙醇溶液,平均每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的乙醇攝入量為3.9g/kg體重d:高醇模型組10枳棋子為鼠李科植物枳棋 Hotenia dulcis只,飲用8%乙醇溶液,平均每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的乙醉平 Thunb的帶有肉質(zhì)果柄的果實(shí)或種子,又名雞距子、均攝入量為12.6g/kg體重d;子浸提液加低醇拐棗等,其功效主要為清熱利尿、止渴除燦解酒,組10只,乙醇用量同低醇模型組,飲用枳棋子液;用于熱病煩渴、呃逆、嘔吐、小使不利酒精中毒等藥棋子浸提液加高醇組10只乙醇用量同高醇組飲物近年來,國內(nèi)外學(xué)者對(duì)枳棋子藥理作用及其機(jī)用枳棋子浸提液;枳棋子組10只,飲用棋子浸提制進(jìn)行了研究。有文獻(xiàn)報(bào)道,棋子對(duì)急性酒精中液。毒有預(yù)防和治療作用,對(duì)CCL和D-氨基半乳糖誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性肝損傷及體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞損傷具有保護(hù)實(shí)驗(yàn)周期為30d,日禁食14h.次日小鼠稱重,頸椎脫處死,馬上剖取肝臟,用預(yù)冷到4℃的生理作用為了探討積棋子解酒保肝機(jī)理本實(shí)驗(yàn)從不同鹽水沖洗2~3次,濾紙吸干。稱取肝重,按1:9的比例實(shí)驗(yàn)組小鼠ADH、SOD、ST酶活性及MDA、CSH含加入pH7.4的磷酸鹽緩沖液,冰浴研磨制成肝均漿,量等方面研究枳棋子解酒保肝機(jī)理。4℃下放置4h以上,12000/min低溫離心20min,取1材料與方法上清液1.1材料與儀器1.2.2小鼠肝均漿中ADH活性的測定參照 Blair枳棋子浸提液積棋子購自北京宏生堂,25%乙的方法,測定單位時(shí)間內(nèi)OD的改變,表示酶活力。測醇浸提2h,回收乙醇,過濾(每100ml含生藥25g),定條件:p8.8肝均漿提取液0.1ml,5mmol/na10.1ml稀釋為3mg/ml的枳棋子液待用;氧化型輔酶25mml1.乙醇,溫度25℃,波長340m,每30s記錄(NAD+)、還原型谷光甘肽(GSH)購于北京欣經(jīng)科Dw值單位定義:單位時(shí)間內(nèi)OD改變0.001為生物試劑公司1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)為軍一個(gè)活力單位U考瑪斯亮法測定蛋白質(zhì)含量事醫(yī)學(xué)院藥材供應(yīng)站產(chǎn)品:SOD試劑盒、GSH試劑1.2.3小鼠肝均漿中MDA含量的測定TBA比色盒、MDA試劑盒購于北京康定泰克有限公司;95%法,具體操作按試劑盒說明1.2.4小肝均漿中SOD活性的測定黃氧化酶法,具體操作按試劑盒說明,收稿日期:2002-10-081.2.5小鼠肝均漿中GST活性的測定采用作者簡介:任發(fā)政(1962-),男,博士,研究方向:食品科學(xué)研究與探討Vo1.23,o.12,2002表1枳棋子對(duì)小鼠肝臟ADH,SOD、GST活性及GSH、MDA含量的影響AD/)S(/mg)MA(umo/g蛋白)ST(ml/m蛋) GSHmmol蛋白)空白對(duì)照組12.16±0.61123.011.753.75±14.650.6720.0070.4100低模型組10.04±1.06102.95±18.7678.52±14.170.588±0.0030.398±0.001高醇模型10.250.3673.20+155101.6923.580780.00203640.00115.19±0.39122.10±34.3671.53±11.4740.743±0.0040.520±0.004棋子+高醇6.0528687.7644757.50±8003500.390.003子組12.65±2.52127.07±30.7358.66±26.950.697±0.0030.432±0.002注:與空口組比較*p0.05,*p<0.01:與低醇模型組比較p<0.01;與高醇模型組比較p<0.01報(bào)道的方法,測定條件:pH65,肝均漿提取液05m,性的下降,有效地提高OD酶活性阻止SOD清除1 Ornol1L0 CDNB0.ml.30mml/.Sh0.1ml波長340m,體內(nèi)白由基能力的下降,通過防止GSH耗竭,恢復(fù)記錄單位時(shí)間內(nèi)OD值的改變、結(jié)果以mg/min產(chǎn)生GST活性,增加GST催化GSH的結(jié)合反應(yīng),以減少的mol.cdn-gH絡(luò)合物表示乙醇代謝氧自由基的產(chǎn)生,抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng),抑1.2.6小鼠肝均漿中GSH含量的測定根據(jù)GSH制肝臟中MDA的升高,輕乙醇及其代謝產(chǎn)物對(duì)肝與二硫代二硝基苯印酸反應(yīng)時(shí)能產(chǎn)生一種黃色物織的損傷,對(duì)抗肝臟脂質(zhì)過氧化作用而保護(hù)肝臟、質(zhì),在420m下有最大吸收峰,可用比色法定量測定4結(jié)論CSH,具體操作按試劑盒說明4.1積棋可逆轉(zhuǎn)乙醇所致的乙醇脫氫酶活性的下2實(shí)驗(yàn)結(jié)果降,保持乙醇氧化中間產(chǎn)物乙醛的產(chǎn)生與積累間的積子對(duì)小鼠肝臟ADH、SOD、GST酶活性及對(duì)平衡。肝臟GSH、MDA含量的影響見表1。4.2積棋子可抑制乙醇所致的丙二醛升高,提高超由表可知,長期給予乙醇會(huì)導(dǎo)致小鼠肝臟氧化物歧化酶活性,防止肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化作ADH、SOD、GST活性的降低,MDA含量升高,GSH含用,保護(hù)肝臟免受自由害。量降低,與空白對(duì)照組比較,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而4.3枳棋子可阻止乙醇所致的還原型谷胱甘肽的耗積子提取液拮抗了乙醇的上述不良作用。竭,恢復(fù)谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶活性,確保GSH氧化還原3討論過程的順利進(jìn)行,并加速乙醛的代謝火活長期和大量攝入乙醇會(huì)造成肝細(xì)胞的損傷3ADH是乙醇的氧化還原酶,在乙醇代謝中起重要作參考文獻(xiàn)用,ADH活性的變化可影響到血中乙醇的濃度,若該1謝宗萬,余友岑主編全國中草藥名鑒(上冊(cè))北京:人民出版酶活性降或受到抑制,可使機(jī)體對(duì)乙醇的生物利社,1996.55用度提高,進(jìn)而加重乙醇對(duì)腦、肝臟等器官的危害作2揚(yáng),陸紅,枳子藥理研究模況.中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2002,30(1:用。乙醇本身較易變成自由基,乙醇在體內(nèi)的代謝54~56中間產(chǎn)物乙和多種氧化自由可對(duì)肝臟產(chǎn)生危3楊,王萍乙醇生物代及其對(duì)肝臟的毒性作用河尚醫(yī)學(xué)害。在正常生理狀態(tài)下,體內(nèi)消除自由基的氧化還原研究,19987(1):78-79系統(tǒng)可維持體內(nèi)自由基的平衡,但長期大量的乙醇4李文杰5OD在治療超氧陰離子自由基所引起的疾病及抗攝入,使白由基產(chǎn)生增加,導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)過氧化。木裹老上的應(yīng)用中國藥學(xué)雜志,1989,24(7):398研究中,低劑量乙醇模型小鼠肝臟ADH、OD酶活5王新月急性酒精性肝損傷中醫(yī)藥防護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究概況性降低,MDA含量升高,與空白對(duì)照組比較有極顯中國中醫(yī)急198135-13性差異(P<0.01),GSH含量及CST酶活性降低,與空6張洪等枳棋子提取物對(duì)乙醇所致小鼠肝損傷的抗作用白對(duì)照比較差異顯著(P<0.05):高劑量乙醇模型組廣東藥學(xué)學(xué)報(bào),2001,17(3):180-181小鼠肝臟ADH、SOD、GST活性降低,MDA含量升7揚(yáng)積子對(duì)乙醇所致小鼠肝臟損傷的預(yù)防作用中藥高,同時(shí)CSH含量降低,與空白對(duì)照組比較差異極顯藥理與臨床,2000.16(3):19~20(0.01),證實(shí)了乙醇對(duì)肝臟的毒性作用及對(duì)肝臟8揚(yáng),等積棋子酒與枳子水液解酒毒作用比校研究時(shí)解毒功能的影響。棋子能拮抗乙醇所致的各項(xiàng)指珍醫(yī)國藥201,126:481483標(biāo)的改變,小鼠肝ADH,SOD、GST酶活性等指標(biāo) Blair A.H. et al. Some catalytic properties of human明顯升高,MDA含量降低,GSH含量升高,與相關(guān)文 liver alcohol dehydrogenase. Biochemistry. 1966(61:2026獻(xiàn)報(bào)道一致提示枳棋子對(duì)慢性乙醇性肝損傷有 10 Wiliam. H. Habig et al.Assays for Differentiation of一定的保護(hù)作用、子解酒保肝作用的機(jī)理與以tn- S-Transferases Biol.c14230713下幾個(gè)方面有關(guān):可逆轉(zhuǎn)乙醇所致的乙醇脫氫酶活