第24卷第6期廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)Vol 24 No 62008年12月JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACYDec.2008丹酚酸提取工藝研究賀帆,吳嬋娟,髙崇凱(廣東藥學(xué)院藥劑教研室,廣東廣州510006)摘要:目的優(yōu)化丹酚酸的提取工藝,提高丹酚酸B的提取率。方法以噴霧干燥法獲得的丹酚酸固體粉末的收率和丹酚酸B含量為指標(biāo),采用均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)化丹酚酸的乙醇浸提工藝,考察乙醇濃度、提取時(shí)間和提取溫度對(duì)丹酚酸B提取率的影響。結(jié)果最佳提取工藝為:45%(體積分?jǐn)?shù))乙醇提取時(shí)間為1h,提取次數(shù)為2次提取溫度為70℃。結(jié)論提取物中丹酚酸B純度達(dá)到70%以上,優(yōu)化工藝合理、可行關(guān)鍵詞:丹酚酸B;提取工藝;均勻設(shè)計(jì);大孔吸附樹脂中圖分類號(hào):R284.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):100-8783(2008)06-055-03Optimization of the extraction procedure of Salvia acid from Salvia miltiorrhizaHE Fan, WU Chan-juan, GAO Chong-kaiSection of Pharmacy, Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou, Guangdong 510006, China)Abstract: Objective To Optimize the extraction process of Salvia acid from Salvia miltiorrhiza. Methods Salvia acid of the spray dryingpowder and salvia acid B were used as use the standard. Uniform design was used to optimize the extraction procedure. The effect ofethanol concentration, extraction time and temperature on the extraction efficiency of salvia acid B were optimized. Results The optimaconditions were as followings: 45% of ethanol, I h of extraction time and 2 cycles of extraction at 70 C. Conclusion The extractionyield could reach 70% under the optimal extraction procedure.Key words: salvia acid B; extraction process; uniform design; macroporous resin丹參水溶性有效成分多具有酚酸性結(jié)構(gòu),丹參標(biāo),進(jìn)行丹酚酸提取工藝研究,以確定最佳的提取素(化學(xué)名為B3,4二羥苯乳酸,B-3,4-工藝探索適合工業(yè)化提取的工藝條件。dihydroxybenyl lacticacid)是各種丹酚酸的基本化學(xué)1儀器與試劑結(jié)構(gòu):丹酚酸A是一分子丹參素與兩分子咖啡酸縮合而成;丹酚酸B為三分子丹參素與一分子咖啡酸11儀器縮合而成;丹酚酸C則為二分子丹參素縮合而成;FA1004N型電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器其他丹酚酸亦有類似結(jié)構(gòu)。丹參水溶性成分中的迷有限公司),Z8002天平(上海精密科學(xué)儀器有限公迭香酸( ros-marinic acid a,Ros)也是由一分子丹參司),RES298A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠),素和一分子咖啡酸縮合而成。此外,還有四甲基丹LXJ-Ⅱ型離心沉淀機(jī)(上海醫(yī)用分析儀器廠),YL酚酸( tetramethyl salvianolic acid A,SalM)等等。015型實(shí)驗(yàn)型噴霧干燥機(jī)(上海雅程儀器設(shè)備有限目前,工業(yè)上提取丹參有效成分主要以熱回流公司),QT-330型柱溫箱(QM,旗美),LC-10ATv型法為主,而酚酸類性質(zhì)不穩(wěn)定、易氧化水解因而提泵(日本島津),SPD-10Av型紫外檢測(cè)器(日本島取工藝的研究應(yīng)多指標(biāo)綜合考慮。選擇不穩(wěn)定成分津)高效液相色譜柱( Diamonsil鉆石),電子天平作為提取工藝篩選的指標(biāo)性成分,有利于篩選出合( SHIMADZU AYI20),KQ-100型超聲波清洗器(昆理的工藝條件,防止成分在提取工藝中損失過(guò)山市超聲儀器有限公司),pHs25型pH計(jì)(上海智大2-3)。本研究以提取物得率和丹酚酸B含量為指光儀器儀表有限公司)。12V山中國(guó)煤化工作者簡(jiǎn)介:賀帆(1983-)女項(xiàng)士研究生;通訊作者:高索丹C MH GLia miltiorrhiza凱男,教授研究方向?yàn)榭诜烊凰幬锝o藥系統(tǒng)Bge.的干燥根和根莖(購(gòu)自廣州市天河寶潤(rùn)堂中藥和國(guó)體物理藥劑學(xué)研究,電話:0203935211,飲片廠),經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)高英主任藥師檢驗(yàn)符Email:godck@tom.como555廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2008,24(6)合《中國(guó)藥典》2005版一部丹參項(xiàng)下規(guī)定。乙醇(分22.2丹參提取液分離純化離心后的樣品溶液析純,天津市富字精細(xì)化工有限公司),甲醇、乙腈通過(guò)D101大孔樹脂(藥材與樹脂用量比為1:4;流(色譜純,迪馬科技有限公司),甲酸(分析純,廣州速為20~3.0BV/h),用水進(jìn)行沖洗除去水溶性化學(xué)試劑廠),D101大孔吸附樹脂(天津市光復(fù)精雜質(zhì)。采用FeCl3檢測(cè)法,判斷洗脫液中有無(wú)丹酚細(xì)化工研究所),鹽酸(分析純,廣州市白云區(qū)良田酸B成分被洗脫,用水6倍量沖洗,繼用體積分?jǐn)?shù)光明化工廠),FeCl3(分析純,天津市大茂化學(xué)試劑30%的乙醇7倍量洗脫(流速為0.5~1.0Bv/h)廠),丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào):200504,中國(guó)藥品生物收集體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇洗脫液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀制品檢定所)。(60℃)減壓濃縮,濃縮至液體相對(duì)密度為1.15方法濃縮液噴霧干燥(進(jìn)風(fēng)溫度220℃,出風(fēng)溫度80℃),最終得淡黃色固體粉末。置干燥器內(nèi),備用。2.1丹酚酸提取工藝2.3丹酚酸B含量測(cè)定2.1.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用均勻設(shè)計(jì)法選擇影響醇提2.3.1供試品溶液的制備精密稱取丹參提取物的3個(gè)主要因素:乙醇濃度(A)、提取時(shí)間(B)、提粉末10mg,加入100mL量瓶中,加水溶解定容,播取溫度(C)為考察指標(biāo),乙醇濃度選擇9個(gè)水平,提勻,過(guò)0.45μm微孔濾膜即得取時(shí)間及提取溫度各選擇3水平、各水平循環(huán)3次,2.3.2色譜條件色譜柱:C1(250mm×4.6采用U(9)表安排試驗(yàn),見(jiàn)表1。mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇水乙腈甲酸(體積比30表1因素水平表59:10:1);流速:1mL·min-;檢測(cè)波長(zhǎng):286mTab 1 Factor-level table進(jìn)樣量:10μL;柱溫35℃;因素233含量測(cè)定方法精密量取供試品溶液10水平甲(乙醇)/%(提取時(shí)間)/h聯(lián)(提取溫度)/ruL,注入液相色譜儀中,按“23.2”項(xiàng)下條件操作,測(cè)定丹酚酸B吸收峰的峰面積積分值,計(jì)算丹酚酸B含量。2.4樣品的固形物含量將洗脫液于60℃恒溫水浴揮干乙醇和部分水分成稠膏狀,膏狀物移至真空干燥箱(60℃,0.096780000000MPa)減壓干燥,置干燥器0.5h(防回潮),待樣品30冷卻后精密稱量3703結(jié)果21.2樣品溶液的制備取丹參藥材100g,加入丹酚酸提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。將實(shí)驗(yàn)3000mL的圓底燒瓶中按表1實(shí)驗(yàn)列號(hào)各條件操數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸,求得回歸方程Y=1961+作,于恒溫水浴鍋中加熱浸提,趁熱抽濾,濾渣再按20861X1+5.4653X2-0.0356X12-2.055X2+原條件進(jìn)行第2次乙醇浸提,趁熱抽濾,合并2次濾0.0186X1X3,R2=0.9545,F=6.1501,方程顯著有液。將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮至乙醇除效,并得到最佳工藝參數(shù)為:乙醇濃度為45%,提取盡將濃縮液用配制好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的鹽酸溶液次每次1h,溫度為70℃。對(duì)最佳處方進(jìn)行驗(yàn)調(diào)至pH=3,用離心機(jī)(2000r/min,5min)離心濃證,3批樣品丹酚酸B含量分別為:70.23%縮液,用布氏漏斗抽濾作為樣品溶液備用。69.04%、69.69%。22大孔吸附樹脂分離純化22.1樹脂的預(yù)處理D01樹脂用體積分?jǐn)?shù)4討論中國(guó)煤化工95%的乙醇浸泡24h,除去上層漂浮物,濕法裝柱,4.1于酚酸B,大部分用乙醇流動(dòng)清洗,應(yīng)不時(shí)檢查流出的乙醇液,至乙醇文獻(xiàn)CNMHG醇浸提的方法提液與水混合(1:5)不呈白色渾濁為止,然后用水沖取,其目的是為了避免用水提取時(shí)提取液中含有糖洗至無(wú)醇味止類等水溶性雜質(zhì)而使液體黏稠。556第6期賀帆,等.丹酚酸提取工藝研究豪2U,(9)均勻設(shè)計(jì)表及試驗(yàn)結(jié)果液中的游離狀態(tài)酸性條件下丹參酚酸的極性下降Tab. 2 Uniform design of the extraction procedure有利于大孔吸附樹脂對(duì)丹酚酸的吸附。因素含量固形物4.4以體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇濕法裝柱,清洗,然C%收率/%后用水沖洗,沖洗速度宜慢使大孔樹脂堆實(shí)以利于3020.711.3456吸附藥液;藥液通過(guò)D101大孔樹脂,流速控制為樹25051114.6148脂體積20~30BVh,這樣可以使藥液與樹脂充分37069.334.9325接觸,靜置一段時(shí)間再用水進(jìn)行沖洗,洗脫糖等水溶13065.73.2823性雜質(zhì)而丹酚酸B類成分未被洗脫。用體積分?jǐn)?shù)為5065.184.227330%的乙醇洗脫丹酚酸B具有良好的解吸附性7058275.6672703012.570.7363參考文獻(xiàn)[1]周長(zhǎng)新,羅厚蔚丹羽正武.丹參水溶性化學(xué)成分的研究7019.381.1664[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),199,30(6):411-416[2]孫金蘭,韓偉.丹參中丹酚酸B的提取分離及分析方法4.2丹酚酸B對(duì)熱不穩(wěn)定,易氧化水解,對(duì)受熱溫研究進(jìn)展[].中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2007,9(1):49-53度和受熱時(shí)間敏感,所以丹參提取液不宜長(zhǎng)時(shí)間高[3]富志軍濃縮精制及干燥對(duì)復(fù)方丹參提取液中水溶性溫濃縮。試驗(yàn)結(jié)果表明,丹酚酸提取宜釆用減壓濃成分的影響[刀]安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2003,22(2):52-縮和噴霧干燥等工藝,降低工藝過(guò)程的溫度和受熱時(shí)間,有利于提取物中丹酚酸保存率的提高[4]李寧,徐文進(jìn)高祟凱HPLC測(cè)定丹酚酸滲透泵片丹酚4.3將濃縮液pH值調(diào)至3,可以使部分雜質(zhì)析出,酸B的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2008,24(5):469且酸性體系有利于丹酚酸B水溶液在受熱條件下471的穩(wěn)定;同時(shí)調(diào)節(jié)溶液的pH可以改變丹酚酸在溶收稿日期:2008-08-10;修回日期:2008-10-06)醫(yī)學(xué)上常用的有關(guān)“濃度”和“含量”的量與單位標(biāo)準(zhǔn)的量和單位非標(biāo)準(zhǔn)的量和單位量名稱(符號(hào))單位符號(hào)量名稱(符號(hào))單位符號(hào)1B的流度B的物質(zhì)的量mL,mUm3體積克分子濃度摩爾濃度1(M),當(dāng)量m,M,NL濃度2B的質(zhì)量濃度(pB)kg/L重量體積百分濃度,百分濃度%(W/V,%)3B的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(n)重量百分濃度重量百分?jǐn)?shù),百分含量g%,%(聊/W),ppm,pb4B的體積分?jǐn)?shù)(q)體積百分濃度,體積百分?jǐn)?shù)9, %(V/V), ppm, ppb5溶質(zhì)B的質(zhì)量摩爾濃度mo重量克分子濃度,重量摩爾濃度(m)6B的摩爾分?jǐn)?shù)(x,)克分子百分濃度摩爾百分?jǐn)?shù)%(M/M),%(NN)7質(zhì)量比(《)質(zhì)量比例濃度8體積比(ψ)體積比例濃度9溶質(zhì)B的摩爾比(r)克分子比如:1.“試劑的終濃度為2mg/L”→“試劑的終質(zhì)量濃度為2mg/L中國(guó)煤化工的濃度為5%”→“(CO2)=0.05或(5%)”或“CO2的體積CNMHG3.“H2SO4溶液濃度為1%”→“(H2SO4)=0.01或(1%)”或“H2SO4溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%4.“HNO3:Cl=1:3→“ψ(HNO3:HC)=1:3”或“保留比例式557