中南藥學(xué)2011年8月第9卷第8期 Central South Pharmacy. August2011,Vol9No8炎性細(xì)胞因子,實(shí)驗(yàn)證實(shí)Ⅱ-10可抑制Ⅱ-1、n6、Ⅱ-8、TNFa及自身的合成,降低黏附分子表達(dá),對組織器官的參考文獻(xiàn)損傷起著保護(hù)作用。TNFa是炎性反應(yīng)過程中出現(xiàn)最早、最[1 Kaminska J, Kowalska m, Kotowicz E,eta. Pretreatment重要的炎性介質(zhì),能激活中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,促使細(xì)胞serum levels of cytokines and cytokine receptors in patients with因子的合成和釋放,其升高程度與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)nonsmall-eell lung cancer, and correlations with clinic opathor-國內(nèi)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)某些中藥具有明確的改善急性肺損logical features and prognosis. M CSF-an independent prognos-傷,抗多器官功能障礙綜合癥(MDS)的作用,參麥注射tie factor [] Oncology, 2006, 70(2)115-1液是其中較常用的藥物明。作用機(jī)制與其顯著抑制TNF[2]楊陽,毛黎明,參麥配伍川尊嚎注射液對心肌缺血再灌注損傷a,減少細(xì)胞因子的釋放,抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)的臨床療效觀察[J.中華實(shí)用中西醫(yī)雜志,2004,4(17)參麥注射液是在古方參麥散的基礎(chǔ)上運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)改型的中藥靜脈注射液,由人參、麥冬2味藥物提取精制而3]李建生,趙君攻,郭勝典,等.川芎嗪和參麥注射液對腦缺血成。具有補(bǔ)元?dú)?、益氣固脫、養(yǎng)陰牛津之功效,可增強(qiáng)單核再灌注肺臟損傷的保護(hù)作用[].河南中醫(yī)藥學(xué)刊,2003,18巨嘴細(xì)胞系統(tǒng)功能及非特異性抗感染作用,并能抑制炎性介[4]Ngcs,wans, Hui cw,ea. Video-assisted thoracic質(zhì)的過度釋放,有效調(diào)控IL6、Il10、TNFa等炎性細(xì)胞gery for early stage lung cancer-can short-term immunol因子的產(chǎn)生,改善微循環(huán)和組織灌注,減輕肺損傷9。advantages improve long-term survival? []. Ann Thorac Card本研究表明,肺癌根治術(shù)后4h2組血漿TNFa、IL-6、vase surg,2006,12(3):308-312LL10濃度均升高并達(dá)到一峰值,說明肺癌根治術(shù)后發(fā)生全[s] Newman MS, Colten GT, Working PI, et al. Comparative身炎性反應(yīng),隨著促炎細(xì)胞因子的大皺釋放,抗炎細(xì)胞因子pharmacokinetics, tissue distribution, and therapeutic effec-水平亦隨之升高,而炎性細(xì)胞因子與抗炎細(xì)胞因子之間的動(dòng)tiveness of cisplatin encapsulated in long circulating, pegylated態(tài)平衡對于決定炎性反應(yīng)程度是非常重要的。本研究發(fā)現(xiàn),liposomes(SP1-077) in tumor bearing mice [] Cancer Che肺癌根治術(shù)患者圍術(shù)期應(yīng)用參麥注射液后可明顯抑制血漿other Pharmacol. 1999. 43(1):1-7炎性細(xì)胞因子Ⅱ、TNF生成釋放,促進(jìn)抗炎性細(xì)胞因6KmAY,wks1,Mma子Ⅱ10生成,觀察組TNF-a濃度在術(shù)后第3日已降至術(shù)前[7]王敬民,金煒,孫秀箋.參麥注射液對心力衰竭患者血ET及水平,觀察組LL6、TNFa濃度比較在術(shù)后4h及第1日、TNFa的影響[漸江中西醫(yī)結(jié)合雜志,200,14(1):46日均明顯低于對照組,L-10濃度均明顯高于對照組,提8]鈕煒兩,華寧,齊幟,等、心力衰竭患者心功能的改善與參麥參麥注射液可通過調(diào)節(jié)血漿細(xì)胞因子水平,進(jìn)而減輕肺癌注射液及血清炎癥因子水平的關(guān)系[J.中國臨床康復(fù)根治術(shù)患者圍術(shù)期全身炎性反應(yīng)綜上所述,參麥注射液給藥后可明顯抑制促炎性細(xì)胞因9]毛靜遠(yuǎn),王恒和,王強(qiáng),等.生脈注射液對心力衰竭患者血清子生成,促進(jìn)抗炎性細(xì)胞因子生成,提示參麥注射液叮通過TNFa水平影響的臨床研究[J].新中醫(yī),2003,35(6):調(diào)節(jié)血漿細(xì)胞因子水平,從而減輕肺癌切除術(shù)患者圍術(shù)期全32-34身炎性反應(yīng)。(收稿日期:2011-0603;修回日期:201106-13)甲氧基聚乙二醇吡硫醇制備條件的優(yōu)化研究萬芬,王紅1,吳紅菱2,蔡波濤,馬俊1(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥物化學(xué)教研室,武漢4306;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥檢系,湖北十堰44200摘要:目的優(yōu)化甲氧基聚乙二醇吡硫醇的制備條件。方法采用N羥基丁二酰亞胺活性酯法合威甲氧基聚乙二醇吡硫醇,并以紫外分光光度法測定的甲氧基聚乙二醇吡硫醇中吡硫醇的載藥量為考察指標(biāo),通過正交試驗(yàn)對合威工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果甲氧基聚乙二醇吡硫醉較優(yōu)工藝條件為:草甲氧基聚乙二醇頓000琥珀酸單酯(mPEG4KS)與N羥基丁二酰亞胺(NHS)物質(zhì)的量比為1:1.5,在5℃反應(yīng)2.5h后再在5℃下加入吡硫醇和4二甲氯基吮啶(DMAP)反應(yīng)20h。結(jié)論該合成工藝操作簡便,穩(wěn)定可行,產(chǎn)物中吡硫醇的載藥量高關(guān)鍵詞:甲氧基聚乙二醇吡硫醇;單甲氧基聚乙二醇4000琥珀酸單酯;合成工藝;正交試驗(yàn)中圖分類號:R914,TQ460.31文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1672-2981(2011)08057304doi:10.3969/isn1672-2981.2011.08.005基金項(xiàng)目:湖北省自然科學(xué)基金資助課題(編號:2007ABA213)。作者簡介:萬芬,男,在讀碩士研究生,主要從事藥物合成新技術(shù)及新工藝研究,Tel:13871528960, E-mail: wwffok@126通訊作者:王紅,女,教授,碩士研究生導(dǎo)師,主要從事藥物合成新技術(shù)及新工藝研究,E-mail:wanghong502@yahoo.com.cnCentral South pharmacy, August2011,vo9N8中南藥學(xué)2011年8月第9卷第8期Preparation optimization of mPEG pyritinolWAN Fen, WANG Hong, WU Hong-ling, CAI Bo-tao, MA Jun'(1. Department of Medicinal ChemistryCollege of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430065: 2. Department of laboratory medi-cine, Hubei University of Medicine, Shiyan Hubei 442000)Abstract: Objective To optimize the preparation of methoxy polyethylene glycol (mPEG)pyritinoL.MethodsmPEG pyritinol was synthesized by N-hydroxy succinimide active ester. Drug-loading rate of the prodrugs as the indexwas measured by the UV and the synthetic process was optimized by the orthogonal test.n/n)reacted for 2. 5 h at 5 C, and pyritinol and 4-dimethylamio pryidine(DMAP)were added and reacted for 20 h at5 C. Conclusion The method is simple, stable and acceptable. It shows a high drug-loading rate of pyritinol in theKey words: mPEG pyritinol; mPEG4K-S; synthesis; orthogonal test鹽酸吡硫醇是治療老年癡呆癥的一線藥物。在臨床應(yīng)SKFG-01電熱恒溫鼓風(fēng)干燥器(湖北省黃石市醫(yī)療器械用過程中,因其半衰期(t)短,口服不方便;而靜脈滴廠);SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限注時(shí),對血管黏膜有很強(qiáng)的刺激作用,易發(fā)生注射部位血管公司);紫外可見分光光度計(jì)UV-1700(日本島津);腫脹、疼痛、呈青紫色、樹枝狀及注射部位乃至整個(gè)上肢皮DFY低溫恒溫反應(yīng)浴(鄭州長城儀器有限公司);單甲氧膚水腫、發(fā)硬、癢痛等不良反應(yīng)23,參考吡硫醇前藥方面聚乙二醇4000號珀酸單酯(mPEG4KS)(本實(shí)驗(yàn)室自制);的報(bào)道,我們用甲氧基聚乙二醇對吡硫醇進(jìn)行修飾,合成二環(huán)己基碳酰亞胺(DCC)、N羥基琥珀酰亞胺(NHS)、吡硫醇聚乙二醇前體藥物,對目標(biāo)化合物進(jìn)行了初步體外降對二甲氨基吡啶(DMAP,均為化學(xué)純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑解和動(dòng)物刺激性實(shí)驗(yàn),證明該藥具有一定緩釋作用,并能顯有限公司);吡硫醇(含量:985%水分:0.17%批號:著減少在注射過程中對家兔的注射部位以及血管的刺激作080519,上海新云化工有限公司);N,N二甲基甲酰胺用。為了增加吡硫醇的載藥量,使制劑成型更容易,所以(DMF)、二氯甲烷(均為分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限本文對甲氧基吡硫醇聚乙二醇的制備條件進(jìn)行了優(yōu)化公司);乙醚(分析純,天津市德恩化學(xué)試劑有限公司)。1儀器與試劑RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);2.1合成路線78HW-1型恒溫磁力攪拌器(杭州儀表電機(jī)有限公司)-oHO-fcHCHO+chCH.0PyritinolHOCH CH0HH CHo-C-CHCH C-0-DMAPCH,OCH+CHCHtcHCHO-CCHCH&R R= Ho圖1甲氧基聚乙二醇吡硫醇的合成路線Fig 1 Synthesis of mPEG pyritinol中南藥學(xué)2011年8月第9卷第8期 Central South Pharmacy. August201l,voL9No82.2試驗(yàn)過程其他物質(zhì)。22.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)參考文獻(xiàn)報(bào)道,經(jīng)過預(yù)試驗(yàn),根312TC鑒別用適量DMF溶解適量的吡硫醇、目標(biāo)據(jù)反應(yīng)條件對產(chǎn)物的影響,選取mPEG4KS/NHS物質(zhì)的量化合物,分別點(diǎn)樣于同一硅膠板上,用丙酮石油醚甲醇比(A)、反應(yīng)時(shí)間(B)、反應(yīng)溫度(C)三因素三水平,選(1:1:1)展開晾干,置紫外燈(254nm)下檢視,吡硫醇用L4(3)因素水平表安排正交試驗(yàn),各因素水平見表1。與目標(biāo)化合物斑點(diǎn)小而清晰,且兩斑點(diǎn)的R1值相差較大,其中DCC作為脫水劑,定為摩爾比mPEC4 K-SDCC=1:說明目標(biāo)化合物是不同于吡硫醇的其他物質(zhì)3,DMAP吡硫醇=1:13.L.3UV鑒別用0.1 mol.L-lHCI溶解適量的吡硫醇、表1因素水平表標(biāo)化合物,并稀釋得一定濃度的溶液,分別在200Bb1 Lew and factor400m紫外掃描。結(jié)果吡硫醇的0.1mol·LHCl溶液在因素( factor)295.20mm有最大吸收,而目標(biāo)化合物在297.40mm有最大(level)吸收。表明目標(biāo)化合物具有吡硫醇分子的基本結(jié)構(gòu);最大吸1:1.5收波長發(fā)生紅移,mPEG已連在吡硫醇上l:1.81:2.03..4IR表征將目標(biāo)化合物和各步反應(yīng)產(chǎn)物用壓片法進(jìn)22.2甲氧基聚乙二醇吡硫醇的合成]稱取干燥的行紅外掃描,各圖譜進(jìn)行對比,得到目標(biāo)化合物可能的基mPEG4KS4.0g(0.1mmol)加入到100m的圓底燒瓶,團(tuán):3525.4cm-1(vOH),為羥基伸縮振動(dòng);1735.68加入50mDM在5℃攪拌10min溶解,依次加入NHscm1(vCO),為酯羰基上的羰基伸縮振動(dòng);1455.320.17g(0.15mmol)和DC0.62g(0.3mml),在5℃攪m-1、1349.52cm1、1297.18cm-1、949.67(y(CH2拌反應(yīng)2.5h然后依次加入吡硫醇和DMAP,繼續(xù)在5℃),均為聚乙二醇上的碳骨架伸縮振動(dòng);1108.25cm1下反應(yīng)20h,停止反應(yīng),反應(yīng)液過濾,濾液在快速攪拌下加(wCOC),為醚鍵不對稱伸縮振動(dòng);2869.55cm-1(y入180mL冷乙醚,攪拌5min后置冰箱中靜置30min。過CH,吡啶環(huán)上),為吡啶環(huán)上的碳?xì)渖炜s振動(dòng),表明吡硫醇濾得淺米黃色固體,將固體用30mL水溶解,過濾,濾液接到了mPEG4KS上用二氯甲烷萃取(35mL×3),然后用1 mol.L-THCI洗二31.5HNMR表征由于 mPEG4R-S分子量及氫原子的氯甲烷萃取液(④0mlL×2),再用水洗二氯甲烷萃取液個(gè)數(shù)遠(yuǎn)超過所載的毗硫醉。所以在圖譜上很難看到哦硫酵的5mL×2),加人無水硫酸鈉干燥,密封靜置過夜。濾除氫的信號,無法準(zhǔn)確積分氫的個(gè)數(shù),各氫的化學(xué)位移()如干燥劑,濾液用045m微孔濾膜過濾,濾液濃縮,快速攪下:2.6~2.8ppm(COCH2CH2COO),3.3~34pm拌下加人冷無水乙醚沉淀產(chǎn)物,過濾,抽干,PO真空F(OCH3),3.4~3.8ppm(OCH2-),4.2~4.3(CH2O燥,得淺米黃色結(jié)晶性粉末,mp56.8~59.1℃,稱重并用紫外分光光度法測定產(chǎn)物中吡硫醇的載藥量32結(jié)果及分析3結(jié)果將表1按L(3)正交表所列條件及“2.2.2”項(xiàng)下條3.I表征件進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn),計(jì)算得到的載藥量取平均值。正交分3.L.1mp測定用毛細(xì)管熔點(diǎn)儀測定目標(biāo)化合物和吡硫醇析所用正交表表2各列除因素列外,空白列D作對照。極的熔點(diǎn),測得目標(biāo)化合物mp568~59.1℃,遠(yuǎn)低于吡硫醇差分析分析數(shù)據(jù)和計(jì)算結(jié)果見表3的mp215.9~217.7℃,推斷目標(biāo)化合物是不同于吡硫醇的表2三因囊三水平正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果助20tddI()emd實(shí)驗(yàn)號因素( factor)吡硫醇含量藥量(test number) A(product)/g (pyritinol content)/%(loading rate)/g0.0451.1722.912.6322.613.41KIK?0.2510.200K30.2240.1860.017Central South Pharmacy. august201l,voL9№a8中南藥學(xué)2011年8月第9卷第8期3方差分析結(jié)果4討論Eb 3 Amlsis of varance4.】合成路線的確定誤差來源在預(yù)實(shí)驗(yàn)中,我們經(jīng)兩步反應(yīng)和經(jīng)一步反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)MS行吡硫醇的載藥量比較,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過一步反應(yīng)所得到的產(chǎn)物的20.00050.000314.5460>0載藥量高于經(jīng)過兩步反應(yīng)所得到的產(chǎn)物的載藥量,經(jīng)過一步ABcD20.00210.001056.7117<0.05反應(yīng)更省時(shí),且省去了中間產(chǎn)物活性酯的處理,故我們選擇20.00240.001266.6319<0.了一步反應(yīng)來進(jìn)行合成試驗(yàn)。20.00000.00001.00004.2影響反應(yīng)的因素表2、3結(jié)果表明,因素B、C有顯著性差異,A沒有從極差值的大小來看,反應(yīng)時(shí)間與反應(yīng)溫度是影響實(shí)驗(yàn)顯著性差異,從主到次的實(shí)驗(yàn)因素依次為:C>B>A,即反的較重要的因素,說明反應(yīng)時(shí)間相對較短、反應(yīng)溫度相對較應(yīng)溫度>反應(yīng)時(shí)間> mPEG4K-S與NHS用量比,初步認(rèn)為低可減小副反應(yīng)的發(fā)生,使產(chǎn)物中吡硫醇的載藥量增加較優(yōu)的合成工藝為A3BC2,即 mPEG4K-S/NHS物質(zhì)的量43工藝的可行性比為1:2.0在5℃反應(yīng)2.5hN羥基丁二酰亞胺活性酯法,反應(yīng)條件溫和,副反應(yīng)32.1 mPEG4K-S與NHS用量比影響由表3方差分析少,產(chǎn)物容易分離,所得產(chǎn)物中吡硫醇的載藥量高,合成工可知, mPEG4K-S/NHS物質(zhì)量比對最后的得到的載藥量沒藝簡單可行。有顯著影響,為節(jié)約原料,故選擇用t比1:1.5。3.2.2反應(yīng)溫度的影響由表2極差分析,表3方差分析參考文獻(xiàn)可知,反應(yīng)溫度對反應(yīng)影響顯著,在一定的溫度范圍內(nèi),隨]周暉,王東凱,王海風(fēng)吡硫醇酯類前體藥物的制備及理化性著溫度的升高,載藥量逐漸增加,在5℃時(shí)載藥量最多;而質(zhì)研究[]山西慶藥雜志,2009,38(1):78-79.后隨溫度升高,載藥量逐漸減少且副反應(yīng)增加。故溫度選擇2]李新芳,古麗巴新靜脈滴注鹽酸吡硫醇氯化鈉注射液引起的5℃為最佳。靜脈[].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜6,23(2):173.3.2.3反應(yīng)時(shí)間的影響同樣,反應(yīng)時(shí)間對反應(yīng)影響顯著[3]連玉珍,于旭云,輸注腦復(fù)新致遲發(fā)性靜脈炎1例[].中原醫(yī)刊,2005,32(2):加,在反應(yīng)時(shí)間為2.5h時(shí)載藥量最多,隨后減少,反應(yīng)時(shí)41王海風(fēng),王東凱,張翠,等硫醇內(nèi)酯前體藥物的合成及其降解動(dòng)力學(xué)[].中國新藥雜志,2007,16(18):1488間越長,副反應(yīng)發(fā)生越多,得到的載藥量會下降。故選擇2.5h為宜[5]張圍宇,王紅,蔡波濤,等.吡硫醇聚乙二醇前藥的合成與表3.2.4驗(yàn)證試驗(yàn)通過以上分析,得到較優(yōu)工藝為征[].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2009,25(5):493-495mPEG4K-S與NHS用址比為1:1.5,溫度為5℃,反應(yīng)時(shí)[6葉海,張燦,沈文斌,等.燈盞乙素聚乙二醇前藥的合成與表間為25h。稱取mPE4KS各40g,以最佳工藝條件合征[J].中國天然藥物,2006,4(4):283-286.成3批甲氧基聚乙二醇吡硫醇,按紫外分光光度法測定吡硫[7]蘇志國,何明磊帶單甲氧基聚乙二醇長尾的蛋白質(zhì)修飾劑及醇的載藥量,結(jié)果見表4。制法和用途:中國,03100736[P]20040811表4驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表[8]葉海,張燦,沈文斌,等.燈盞乙素棗乙二醇前藥的合成與表Bh 4 verification test征[J.中國天然藥物,2006,4(4):283-286試驗(yàn)號產(chǎn)物量吡硫醇含量[9] Greenwald RB, Pendri A, Conover C, et al. Drug deliver sys吡硫醇載藥量tems: 2, Camptothecin 20-0-poly (ethleneglycol)ester trans-content)/%Loading rate)/gportforms [] J Med Chem, 1996, 39(20), 1938-19404.29[10]中國藥典2010年版.二部[S]2010:附錄2322.33[11]蔡波濤,王紅,薛大權(quán),等,吡硫醇聚乙二醇前體藥物含量測定[].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,12(3):2930結(jié)果3個(gè)試驗(yàn)號的結(jié)果沒有顯著性差異,表明該工藝是收痛日期;2011-03-21;修回日期:2011-04-28)穩(wěn)定可行的歡迎向中南藥學(xué)投稿