第23卷第3期大連輕工業(yè)學院學報vol 23, No. 32004年9月Journal of Dalian Institute of Light IndustrySept. 200 4文章編號:10054014(2004)03-0190-04乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件張羽飛,于春麗,張春枝(大連輕工業(yè)學院生物與食晶工程學院,遼寧大連116034)關鍵詞:黃芩;黃酮;提取摘要:考察了水煎煮法、乙醇回流法、乙醇室溫浸提法對黃芩總黃酮得率和純度的影響。確定乙醇室溫浸提法的工藝條件為:50%乙醇室溫浸提3次,每次24h;酸沉溫度40t;酸沉pH為0.5該工藝穩(wěn)定性好,黃芩總黃酮的平均得率為7.68%中圖分類號:R931.6文獻標識碼:AExtraction of flavones from Scutellaria baicalensis georgiwith ethanol under room temperatureZHANG Yu-fei, YU Chun-li, ZHANG Chun-zhi( School of Biological Foodstuff Engineering, Dalian Institute of Lilustry, Dalian 116034, China)Key words: Scutellaria baicalensis Georgi; flavones; extractionAbstract: The extraction of total flavones from Scutellaria baicalensis Georgi by three different methods isudied. The optimal extracting conditions are as follows: the powder of Scutellaria baicalensis Georgi issteeped 3 times with 10 folds 50% of the ethanol for 24 h, precipitation of flavones is at pH 0. 5 and 40 tCompared with original process, the method is stable, the average yield of flavones is 7.68%黃芩為唇形科植物黃芩( scutellaria正品黃芩 Scutellaria baicalensis georgioiculensis georgi)的干燥根,具有清熱燥濕,瀉火1.1.2試劑解毒,止血,安胎等功效1,是一種常用的傳統(tǒng)中黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素標準品購于Wako藥。黃芩總黃酮是黃芩主要有效成分。為適應中 Pure Chemical Industries,Ltd.(日本),薄層層析藥標準化現(xiàn)代化的要求,采用黃芩總黃酮替代黃板 silica gel60F234購于德國 Merck公司。乙醇芩飲片已成為發(fā)展趨勢鹽酸、甲醇等均為分析純。黃芩總黃酮的提取可采用水煎煮法2,3)、乙1.1.3儀器醇提取法4)、加助溶劑提取法5)、超聲波法61、超RE52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,數(shù)控超級恒溫槽濾法微波提取法高速逆流色譜法亞臨界752型紫外可見分光光度計,JNB型精密扭力天水提取法等多種方法。但真正用于規(guī)?；健Ｉa(chǎn)的工藝主要有水煎煮法和乙醇提取法。作者1.2方法對水煎煮法、乙醇回流提取法和乙醇室溫浸提法1.2.1黃芩總黃酮含量的測定進行了比較,并確定乙醇室溫浸提法的工藝條件,采用紫外分光光度法11。被測樣品用70%檢驗了工藝的穩(wěn)定性。乙醇溶解后作適當稀釋,測定279mm處吸光值材料與方法利用標準曲線計算黃芩總黃酮的含量。以黃芩苷作標準,70%乙醇作空白1.1材料1.2.2黃芩總黃酮成分的測定原料采用薄層層析法。以甲醇為溶劑配制黃芩飲片,購自大連市藥材公司。經(jīng)鑒定為1mg/mL的對照品溶液及2mg/mL的黃芩總黃收稿日期:200408-23作者簡介:張羽飛(1980~),女,碩士研究生第3期張羽飛等:乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件酮樣品溶液,將上述對照品及樣品各1μ依次點樣于薄層層析板( silica gel60F2s)上,于層析缸中=0.0538x+0.009展開,展開劑為v(乙酸乙酯):V(丁酮):V(甲=0.9993酸):V(水)=10:7:1:1,取出吹干,紫外顯色。1.2.3水煎煮法提取黃芩總黃酮150g黃芩粗粉,水煎煮3次,水量是中藥量的10倍,時間均為1b,保持微沸狀態(tài)。脫脂棉過濾,合并濾液,濃縮至中藥量的10倍。用6mol1濃鹽酸調(diào)濃縮液pH值為3.5,靜置60min,過濾p(黃芩苷)/μgmL)所得濾液升溫至40℃,調(diào)pH值1.5,保溫60min,室溫靜置24h,抽濾,沉淀用去離子水洗圖1紫外分光光度法測定黃芩苷含量至中性,再用少量95%乙醇洗滌,干燥器內(nèi)干燥標準曲線至恒重1.2.4乙醇回流法提取黃芩總黃酮媒不同。由于黃芩總黃酮中的主要成分黃芩苷是150g黃芩粗粉,用10倍體積60%乙醇回流連有葡萄糖醛酸結構的黃酮衍生物,具有一定提取3次,各1h,濾液減壓回收盡乙醇后,用水定的脂溶性。因此,用乙醇作溶媒時溶出率更高。容至中藥量的10倍。余下操作過程同1.2.3。表1不同提取方法對黃芩總黃酮得率和純1.2.5乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮度的影響150g黃芩粗粉,用10倍體積60%乙醇室溫黃芩總黃酮黃芩總黃酮浸提24h,提取3次,濾液減壓回收盡乙醇后,用提取方法產(chǎn)品得率/%純度/%得率/%水定容至中藥量的10倍。余下操作過程同水煎煮法81乙醇回流法1.2.3乙醇室溫浸提法7.69851.2.6乙醇室溫浸提法工藝條件的選擇150g黃芩粗粉,醇浸后,將濾液蒸干制備浸乙醇室溫浸提法與乙醇回流法相比產(chǎn)品得率膏,對乙醇濃度、醇浸時間、料液比、醇浸次數(shù)進行有大幅度提高,這是因為前者延長了提取時間,選擇。在此基礎上,再確定酸沉溫度、pH的控制高了黃芩總黃酮的溶出率。此外,乙醇室溫浸提條件。法比回流法更適合工業(yè)化生產(chǎn)。1.2.7乙醇室溫浸提法工藝穩(wěn)定性實驗2,3乙醇室溫浸提法工藝條件的選擇按照所選定的工藝條件進行3次黃芩總黃酮2.3.1乙醇濃度對黃芩總黃酮得率的影響的提取實驗,檢測工藝的穩(wěn)定性。用不同濃度的乙醇對黃芩粗粉進行室溫浸提。紫外分光光度法測定黃芩總黃酮含量,計算2結果與討論得率。結果見圖2。2.1紫外分光光度法測定黃芩苷含量的標準曲線釆用1.2.1方法測得黃芩苷含量的標準曲線見圖1。標準曲線直線方程為y=0.0538x+0.0096,其中y為279m吸光值,x為黃芩苷含量(g/mL)。2.2不同提取方法對黃芩總黃酮得率和純度的影響采用水煎煮法、乙醇回流法和乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮,結果見表1。表1結果顯示φ(乙醇)%黃芩總黃酮得率從高到底依次為乙醇室溫浸提法、乙醇回流法、水煎煮法。其中乙醇回流法和水圖2溶媒乙醇濃度對黃芩總黃酮得率煎煮法均利用溶劑加熱提取,且時間相同,只是溶的影響大連輕工業(yè)學院學報第23卷圖2結果顯示,50%乙醇提取黃芩總黃酮得芩總黃酮4次結果見表2率最大,為13.22%。2.3.2醇浸時間對黃芩總黃酮得率的影響表2醇浸次數(shù)對黃芩總黃酮溶出率的彩響采用50%乙醇作溶媒進行提取,制備浸膏醇浸次數(shù)/次黃芩總黃酮溶出率/%測定各個提取時間下的黃芩總黃酮含量,計算得277.8率。結果見圖3。表2結果顯示,2次提取可溶出77.8%的黃芩總黃酮,3次提取黃芩總黃酮的溶出率可達94.5%2.3.5酸沉淀溫度對黃芩總黃酮得率的影響§§劉采用酸沉淀的方法提取黃芩總黃酮,各文獻中采用的酸沉溫度不同。一般在40~80℃不等。則定不同溫度下酸沉淀所得黃芩總黃酮,結果見圖5。圖3提取時間對黃芩總黃酮得率的影響圖3結果顯示,黃芩總黃酮在24h溶出率最大,為10.59%302.3.3料液比對黃芩總黃酮得率的影響2.5料液比是黃芩飲片粗粉的質(zhì)量(g)與溶媒乙224醇體積(mL)的數(shù)值之比。采用不同體積50%乙醇室溫浸提24h,測定黃芩總黃酮含量,計算得率。結果見圖44050607080e/℃圖5酸沉溫度對黃芩總黃酮得率的影響在不同溫度下進行酸沉淀,溫度越低,酸沉越慢;溫度越高酸沉速度越快,但沉淀物中混有大顆粒雜質(zhì),80℃酸沉所得沉淀物表面有油狀物質(zhì)。由圖5可知,酸沉溫度為40℃時黃芩總黃酮得率最高,為3.68%01:061:081:101:14162.3.6酸沉淀pH值對黃芩總黃酮得率的影響料液比黃芩苷分子結構中C2上羥基易成鹽,而在酸性條件下黃芩苷分子就被還原出來12。酸沉時圖4料液比對黃芩總黃酮得率的影響的pH值對此反應有顯著影響,測定不同pH條件圖4結果顯示,乙醇用量少時,黃芩總黃酮浸下沉淀得到的黃芩總黃酮,結果見圖6。圖6結出不完全,當料液比為1:10時,黃芩總黃酮得率果顯示,在pH05時沉淀黃芩總黃酮得率最大,達到最大,為17.39%。為5.69%。2.3.4醇浸次數(shù)對黃芩總黃酮得率的影響2.4乙醇室溫浸提法提取的黃芩總黃酮成分組成為保證中藥有效成分的充分溶出,通常采用采用薄層層析法(TLC)測定乙醇室溫浸提法多次提取法。但多次提取溶媒消耗量大,濃縮耗得到的黃芩總黃酮結果見圖7。由圖7可見,黃能多,致使生產(chǎn)成本增高。因此,確定適宜的提取芩總黃酮的主要成分為黃芩苷。由于缺少標準次數(shù)十分必要。采用10倍量的50%乙醇提取黃品,另一成分無法準確判定。但根據(jù)文獻[13]報第3期張羽飛等:乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件道,應該是漢黃芩苷。3結論(1)3種黃芩總黃酮提取方法中,乙醇室溫浸提法明顯優(yōu)于水煎煮法和乙醇回流法。(2)乙醇室溫浸提法工藝條件為:乙醇濃度50%;室溫浸提3次;料液比為1:10;提取時間24h;酸沉淀溫度40℃;pH值0.5。(3)乙醇室溫浸提法工藝條件和產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,黃芩總黃酮中主要成分為黃芩苷1.5參考文獻圖6酸沉pH值對黃芩總黃酮得率的影響[1]國家藥典委員會,中華人民共和國藥典:第1部[M]北京:化學工業(yè)出版杜,2000.2482]周德慶,曾駱.黃芩總黃酮的提取工藝研究[J].華西藥學雜志,2002,18(1):79-8[3]韓魯佳,閻巧娟,江正強,等.黃芩甙提取分離方法及工藝研究[].農(nóng)業(yè)工程學報,2000,16(6):118-122[4]黎萬壽,陳幸.黃芩苷提取工藝研究[J].中草藥,2000,31(2):107-108[5]黃維安,蒙毅,黃芩甙提取、精制及含量測定的研究概況[J].中草藥,1996,27(增刊):240-242.[6]郭孝武.超聲提取黃芩苷成分的實驗研究[冂].中國1234現(xiàn)代應用藥學雜志,199,16(3):18-20[7]李彤彤李宏,候茂君,等,黃芩化學成分及黃芩苷一漢黃芩素,2一黃芩總黃酮,3一黃芩素,4一黃芩苷提取方法研究進展[J].天津藥學,2002,14(3):7-8圖7黃芩總黃酮的TLC圖譜[8] LU HT, JIANG Y, CHEN F. 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