中圃縣科火事學(xué)報(bào)Joumal of China Pharmaceutical University 2008, 39(1): 12-14聚乙二醇支載熊果酸的合成與表征楊定菊,李穎,尹述凡(四川大學(xué)化學(xué)學(xué)院,成都610054)摘要目的:尋找水溶性好的熊果酸衍生物。方法:通過(guò)高分子縮合的方法,將?；木垡叶冀又Φ叫芄岬牧u基上,得到目標(biāo)產(chǎn)物。結(jié)果和結(jié)論:合成了7個(gè)聚乙二醇支載的熊果酸衍生物,結(jié)構(gòu)經(jīng)R和'HMR確證,并進(jìn)行水溶性、水接觸角和溶血性實(shí)驗(yàn)。制得的7個(gè)衍生物親水性大大提高,對(duì)紅細(xì)胞無(wú)破壞作用,為開發(fā)水溶性妤的熊果釀靜脈注射劑提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。關(guān)鍵詞熊果酸;聚乙二醇;?；?合成;表征中圖分類號(hào)T320.67文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1000-5048(200801-0012-03Synthesis and characterization of PEG-supported ursolic acidYANG Ding-ju, LI Ying, YIN Shu-fanCollege of Chemistry of Sichuan University, Chengdu 610064, ChinaAbstract Aim To prepare more aqueous soluble ursolic acid derivatives. Methods: The target compounds were synthesized from acylation of polyethylene glycol(PEG)to hydroxy group of ursolic acid by polymer polycondensationmethod. Results and Conclusion: The synthesized polymers were characterized by IR andH NMR, and their aqueoussolubilities, water contact angles and red blood cells compatibility were also evaluated. The water contact angles indicat-ed their enhanced hydrophilicity, and the hemolysis test showed their good hemocompatibility. This study provides find-gs for the potential of the intravenous administration of ursolic acidKey words ursolic acid; polyethylene glycol; acylation; synthesis; characterization熊果酸即3羥基熊果12烯-28-酸(39-1材料droxy-urs-12-en-28- oic acid,UA,1),屬于a·香樹脂R用 Perkin-Elmer公司16PCFT型紅外分光光醇( a-amynn)型五環(huán)三萜類化合物,是自然界中分度儀測(cè)定KB壓片;HNMR用Bmkr公司ⅤA40布較廣的天然活性化合物具有保肝抗炎抗腫磁共振儀測(cè)定,TM作內(nèi)標(biāo),CDC作溶劑;硅膠瘤抗艾滋病毒等多種生物活性,具有較高的臨Gzx薄層板和柱層析用300-400目試劑級(jí)硅膠均床應(yīng)用價(jià)值。由于其水溶性較差,目前主要是通過(guò)非共價(jià)鍵的方法來(lái)改變其水溶性如制成針劑24為青島海洋化工廠產(chǎn)品。聚乙二醇(PEG)(40,1000,2000,4000,6000,或注射劑,但效果都不是很理想。為了提高熊果1000,0000,進(jìn)口分裝,使用前加入甲苯共沸蒸酸的水溶性并增強(qiáng)藥效,本研究用高分子材料聚乙餾除水;其他試劑均為市售分析純或化學(xué)純二醇對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,在其結(jié)構(gòu)上引入親水性基團(tuán)以期得到水溶性較好的熊果酸衍生物。本研究2方法通過(guò)熊果酸G位羥基與?；木垡叶冀Y(jié)合得2.1聚乙二醇化熊果酸的合成到了熊果酸的聚乙二醇結(jié)合物211聚乙二醇二酸( PEG-DA)的合成取PEG0020g中國(guó)煤化工)150m中加入CNMHG收稿日期200-11-12‘通訊作者Tel:08-80308053Eml: chuandayouji217@163.cm楊定菊等:聚乙二醇支載熊果酸的合成與表征丁二酸酐5g50mml)和干燥的吡啶4mL,攪拌下回流反應(yīng)48h,反應(yīng)混合物減壓蒸發(fā)至干,殘余物溶于飽和NHO水萃取3次合并氯仿液用水洗3次無(wú)水N干嫌去"0moxo溶液150mL中,過(guò)濾濾液冷至0~5℃,濃鹽酸酸化,氯仿干燥劑后將濾液濃縮,加入大t的無(wú)水乙醚沉淀出產(chǎn)物。產(chǎn)品用乙醚重結(jié)晶3次,干燥后稱量,產(chǎn)物為18.6g,產(chǎn)率PEG0 H-COCIz-→proc∝ H,CH, CO-UA292%。同法制得PEC4.0DA、PEC0DA、PEC00DAPEC6000DA、PEG0DA和PEC00DA。Sccheme 1 Synthetic route of PEGylated ursolic acid (UA)212聚乙二醇酰氣( CIOCCH CH2 COO-PEG-OCOCH CH2-2.2測(cè)試與表征c)的合成將PCDA1mml加入到裝有球形冷凝2.2.1傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)Bio-Rad公管的三口燒瓶中用滴液漏斗滴加SOo2至過(guò)量,用NOH司FT40型紅外分光光度儀,除PEG400和PEC400吸收HC氣體攪拌回流反應(yīng)2h,減壓蒸餾除去過(guò)量的DA采用KBr涂膜制樣外,其他樣品均采用與KBrSOC2,得黃棕色固體用無(wú)水乙醚洗滌3次以除去殘余的共研磨后壓片制樣。SOC2,真空干燥后備用。222HMMR圖譜采用 Varian INOvA2400磁同法分別制得:共振儀測(cè)定,TMS作內(nèi)標(biāo),CDCl3作溶劑。CIOCCH, CH,COO-PEGA400-OCOCH, CH, COCl2.2.3水溶性實(shí)驗(yàn)參照《中華人民共和國(guó)藥典》CIOCCH, CH CO0-PEG1000-OCOCH2 CH2 COCI(205年版)中溶解度測(cè)定方法測(cè)定6CIOCCH, CH, COO-PEG4000-0COCH, CH, COCI224表面接觸角測(cè)試 KRUSSDSA100接觸角CIOCCH, CH, CO0-PEG6000-0COCH, CH, COCI光學(xué)測(cè)定儀。研磨壓片法制樣,選取平整的膜片,CIOCCH, CH, C00-PEG10000-0COCH, CH, COCI H用去離子水測(cè)定,取連續(xù)3次測(cè)定誤差在05°范圍CIOCCH, CH, COO-PEG20000-0COCH, CH, COClo內(nèi)的平均值作為測(cè)試結(jié)果。213化合物2[PEG(Ca1COUA2]的合成取的2.2.5溶血性實(shí)驗(yàn)將所得產(chǎn)品配制成0.9%oCa1a10 PEG- OCOCH CH1PC2OQ0.NaC注射液的飽和溶液,制成受試物。mm.于精制的14二氧六環(huán)中加入5滴干燥的吡啶攪3結(jié)果拌至聚乙二醇酰氯全部溶解后加入熊果酸1mmod,在80℃下反應(yīng)5h減壓蒸出溶劑,冷卻至室溫加水稀釋后氯仿萃31 PEG-CO-UA的表征取3次,合并有機(jī)層氯仿層用新蒸蒸餾水反復(fù)洗滌至中性31.1PGDA的表征 PEG-DA紅外光譜除具有無(wú)水NaO4干燥過(guò)濾,濾液濃縮殘余物用二氯甲烷/無(wú)水PEG的特征峰2890cm-2飽和CH和1107cm乙醚沉淀出產(chǎn)物。真空干燥,得淺黃色粉末。同法合成了CH2OCH外,還有1732cmC-0(羧基)。反映2a-2g;結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。TC(氯仿甲醇環(huán)己烷2:1:8)展出 PEG-COOH的結(jié)構(gòu)特征說(shuō)明PEG已羧酸化。開,用10%濃HO/乙醇作顯色劑,反應(yīng)體系中小分子的R312 PEG-COC的表征除了具有 PEG-DA的特值均大于03而PG與熊果酸連接后在原點(diǎn)顯紫色。因征峰外,在684cm-還出現(xiàn)了CC的特征峰。此可用TC來(lái)檢測(cè)產(chǎn)物。反應(yīng)過(guò)程見(jiàn)路線1。3.13PGCO-UA的表征以CDC3為溶劑的核磁譜表明,化學(xué)位移836~38為PEC的重復(fù)單元CH2CH2O的質(zhì)子共振峰8526為熊果酸的COOH12的質(zhì)子共振峰。80.83、0.83、0.91、1.01、1.03都是熊果酸的取代甲基上的質(zhì)子共振峰。且隨著PEG平均相對(duì)分子質(zhì)量的增大,D=3.6~38處質(zhì)1: R= H: 2: R=CO(CH2)2C00(PEG), COC(CH2)2CO-UA子共振峰的強(qiáng)度隨之增大。熊果酸上的質(zhì)子共振(2a: PEG400: 26: PEG1000: 2c: PEG2000; 2d: PEC4000: 2e: PEC6000中國(guó)煤化工熊果酸的特征吸收嶺CNMHG積的比值來(lái)計(jì)算Figure 1 Structures of ursolic acid(UA)and its derivatives出平均取代度(見(jiàn)表1)。肀圃暴科火普學(xué)報(bào) Journal of China Pharmaceutical Uninersity第39卷Table 1 Properties of PEG-supported ursolic acid UA異。本文用不同相對(duì)分子質(zhì)量的聚乙二醇支載熊Contact果酸以篩選出一類具有良好水溶性和生理活性的化合物。0.11066.90.31134.0434|20279642 PEG-DA-UA的合成ab00,363392PEG與熊果酸的連接時(shí),嘗試了3種方法:44.7aPEG直接與熊果酸反應(yīng)得到產(chǎn)物;b.將 PEG-DADS: Degree of subetitution轉(zhuǎn)化為活潑酯,與熊果酸反應(yīng)得到產(chǎn)物;c.將PEG3.2水接觸角DA酰氯化,與熊果酸反應(yīng)得到產(chǎn)物。由于熊果酸表1可以看出,熊果酸分子接上FG后,材料結(jié)構(gòu)存在立體位阻和本身羥基的親核能力很弱,所的表面接觸角明顯下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PEG接枝得的二酸和制得的活潑酯基本不與熊果酸反應(yīng)。熊果酸后其親水性優(yōu)于熊果酸本身其親水性隨著由于酰氯是比較活潑的反應(yīng)基團(tuán),故本實(shí)驗(yàn)選用方PEG相對(duì)分子質(zhì)量的增大而增大。但達(dá)到某一極法。所制得的酰氯與熊果酸在加熱、吡啶作催化限值時(shí)其親水性反而下降。這可能是由于PEG相劑的條件下制得了PEG化的熊果酸目標(biāo)產(chǎn)物。此對(duì)分子質(zhì)量太大,導(dǎo)致其黏度太大所致。反應(yīng)催化劑的用量不能太多,否則反應(yīng)液顏色太3.3水溶性實(shí)驗(yàn)深,后處理困難。從表2可以看出,熊果酸中嵌入PEG鏈段后水溶性明顯增加。隨著PEC平均相對(duì)分子質(zhì)量的5結(jié)論增加,產(chǎn)物的水溶性越好。但當(dāng)達(dá)到某一極限值本文通過(guò)將PEG酰氯化后接枝到熊果酸上時(shí)其水溶性又有所下降。此結(jié)果與水按觸角實(shí)驗(yàn)成功地合成了一系列PEG支載的熊果酸產(chǎn)物。實(shí)結(jié)果相一致。驗(yàn)結(jié)果表明:合成的系列產(chǎn)物的親水性明顯優(yōu)于熊Approximate solubility(S)of PEG-su果酸本身,同時(shí)具有良好的血容性,為開發(fā)新型靜0.9%Distilled Compdsupported脈注射制劑提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。Nacl致謝:四川大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室包旭等老師協(xié)助完成本論文的溶血性實(shí)驗(yàn)。2b2g參考文獻(xiàn)Note: Soluble(++),0.33 g/mL