86中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志2006年10月第19卷第5期 Chinese J Ind Med Oct2006,Vol.19N.5參考文獻(xiàn)[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1991, 88(17): 7797-7801[1] Yoshida M, Watanabe L., Horie K,etl. Neurobehavioral changes in[5]李國君,吳德生,中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一氧化氮和一氧化氮合酶研究進(jìn)metallothionein-null mice prenatally exposed to mercury vapor [J]. Toxi展[J]國外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊,1999,26(2):6568co Lett,2005,155(3):361-3686] Keys SA Zmerman WF. Antioxidant activity of retinal, glutathione[2 Yamada K, Sasaki Y, Masuda K, et al. Role of nitric oxide in learningin bovine photoreceptor cell mem-branes J ] Exp Eye Resand memory processes [J I Nippon Yakurigaku Zasshi, 1998, 1112):8796[7]楊興斌,趙燕,海春旭,等.硒、鋅對索曼神經(jīng)毒劑誘導(dǎo)大鼠過氧[3] Mittal CK, Harrell WB, Mehta CS, et al. Interaction of heavy metal化損傷的保護(hù)機(jī)制[J]中國臨床康復(fù),2004,9(8):1792-1793oxicants with brain constitutive nitric oxide synthase[ I]. Mol Cell Bio-[8]劉亞華,李積勝,閆蓓.牛磺酸鋅對染鉛大鼠海馬NOS活性和hem,1995,149-150:263-265nNOS蛋白及基因表達(dá)的影響[J]營養(yǎng)學(xué)報(bào),2004,26(5)[4] Dawson TM, Bredt DS, Fotuhi M, et al. Nitric oxide synthase and337-340ronal NADPH diaphorase are identical in brain and peripheral tissues鉛和乙醇對雄性大鼠生殖系統(tǒng)的聯(lián)合毒作用譚成森,靳翠紅,劉秋芳,趙劍,蔡原中國醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院毒理教研室,遼寧沈陽110001)摘要∶采用整體動物實(shí)驗(yàn)方法,觀察鉛和乙醇對大鼠精孑數(shù)量和質(zhì)量,以及血中性激素水平的聯(lián)合作用。結(jié)果顯示,精子計(jì)數(shù)聯(lián)合組比鉛和乙醇單獨(dú)作用組顯著減少;精子活動度分析聯(lián)合組與其他各組比較顯著下降。鉛和乙醇單獨(dú)作用均可使雄性大鼠血清睪酮(T)升高,促黃體生成激素〔LH)下降,聯(lián)合作用使T降低,LH較單獨(dú)作用組升高。提示鉛和乙醇聯(lián)合染毒對雄性大鼠生殖毒性影響可能具有增毒作用。關(guān)鍵詞:鉛;乙醇;精子;性激素中圖分類號:R994.6;R114文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A文章編號:1002-221X(2006)5-0286-02Study of collaborating effect of lead and ethanol on reproductive function in male ratsTAN CheiU Qiu-fang, ZHAO Jian, CAI YuanDepartment of Toxicology, College of Public Health, China Medical University Shenyang 110001, ChinaAbstract: Rats were used to observe the effect of lead and ethanol on the quantity and quality of sperms and the levels of sex hor-mones in the study. The results showed that sperm counts in lead or ethanol administrated group were all decreased compared with con-trol rats, the sperm count in lead-ethanol collaborating exposure group was much lower than that of lead or ethanol group. The motileof sperm in collaborating exposure group was also obviously decreased compared with lead or ethanol group. Additionally the sex hor-mones determination also revealed that lead or ethanol might induce a marked decline of serum testosterone( t) level and a definite in-crease of serum luteinizing hormone(LH level whereas collaborating exposure of lead and ethanol showed some adverse effect on ser-T and LH levels. It is suggested that the combining exposure of lead and ethanol might produce some additive effect in reproductionKey words: Lead Ethanol Sperm Sex hormone鉛對生殖系統(tǒng)的損傷,已由流行病學(xué)調(diào)査和動物實(shí)驗(yàn)廣泛要試劑與儀器證實(shí)12。乙醇對雄性生殖系統(tǒng)的損害近年來已引起人們的關(guān)醋酸鐓分析純沈陽試劑一廠)乙釀(分析純沈陽市富康注。本研究采用整體動物實(shí)驗(yàn)方法,觀察鉛和乙醇聯(lián)合作用對消毒藥劑公司)睪酮 testoterone T)放射免疫分析試劑盒(天津大鼠精子數(shù)量和質(zhì)量以及血中性激素水平的影響,初步探討鉛九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司)促黃體生成激素( lutenizing hor-和乙醇對雄性生殖系統(tǒng)的聯(lián)合毒作用及其可能機(jī)制。mone LH)放射免疫分析試劑盒(天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公1材料與方法司)濕微鏡日本 OLYMPUS)恒溫水浴糧(HH42型,常州國華1.1實(shí)驗(yàn)動物電器公司)放射性免疫測定儀F2003/50G型西安)成年 Wistar雄性大鼠32只,體重180-200g,由中國醫(yī)科1.3實(shí)驗(yàn)方法大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部提供,飼養(yǎng)1周后分組。動物室溫度18-23℃,1.3.1動物分組及染毒將32只大鼠按體重隨機(jī)分為4組:對相對濕度40%~70%,動物自由飲水、攝食。照組、醋酸鉛組、乙醇組、聯(lián)合組。乙醇組大鼠按2.16gkg給1.2予26%乙醇,經(jīng)口灌胃染毒,連續(xù)8周,每周5d每天1次;醋中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志2006年10月第19卷第5期 Chinese J Ind Med Oct2006,Vol.19No.5287單獨(dú)作用組相同;對照組與染鉛組按lml/l00g蒸餾水灌胃,時玻璃棒沿著管壁輕輕剝離,1000/min離心10min,小心吸取間與其他各組相同。血清,按試劑盒說明書應(yīng)用放射免疫技術(shù)對血清睪酮、促黃體1.3.2睪丸及附睪臟器系數(shù)的測定睪丸系數(shù)=(睪丸質(zhì)量/生成素水平進(jìn)行測定體重)×100%,附睪系數(shù)=(附睪質(zhì)量/體重)×100%4數(shù)據(jù)處理1.3.3血清鉛含量測定取肝素抗凝血0.1ml,加稀釋液1.0用統(tǒng)計(jì)軟件SSl0.0對各項(xiàng)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行均值計(jì)算各ml,振蕩混勻,原子吸收分光光度計(jì)石墨爐法測定組間進(jìn)行單因素方差分析。其中血鉛濃度用幾何平均數(shù)表示1.3.4精子檢查大鼠處死后立即剪取一側(cè)附睪尾稱重后于2結(jié)果盛有2m生理鹽水的小燒杯中剪碎用兩層擦鏡紙過濾淛制成精2.1動物體重與睪丸、附睪臟器系數(shù)及血鉛濃度子懸液。取一滴懸液推片晾干甲醇固定伊紅染色蒸餾水沖如表1所示,體重、附睪臟器系數(shù)各實(shí)驗(yàn)組和對照組比較洗晾干后鏡檢。每只大鼠計(jì)數(shù)1000個精子,記錄畸形精子數(shù)并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)染鉛組和乙醇組的睪丸臟器系數(shù)與計(jì)算精子畸形率。將懸液置于37℃水浴中孵育20min后滴片光對照組比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但聯(lián)合組的睪丸臟器鏡下計(jì)數(shù)200個精子中的活精子數(shù)和各級活動精子數(shù)并計(jì)算活系數(shù)顯著高于對照組(P<0.05)聯(lián)合組與染鉛組的血鉛濃度精率。懸液經(jīng)60℃水浴殺死精子用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)精子再折顯著高于對照組和乙醇組(P<0.05)聯(lián)合組的血鉛濃度與染算成精子數(shù)(個y附睪尾(g鉛組比較雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但聯(lián)合組均值明顯高于染鉛組1.3.5血清性激素的測定將采集的血液室溫下靜置1h,用表1動物睪丸、附睪系數(shù)及血鉛濃度測定結(jié)果(x±s,G±s,n=8)組別體重(g)睪丸臟器系數(shù)(%)附睪臟器系數(shù)(%)血鉛濃度(μmo/L)對照組338.80±26.790.885±0.1430.181±0.077染鉛組318.00±48,411,063±0.1580.182±0.02111.610±0.178乙醇組1,064±0.1250.184±0.0220.065±0.00聯(lián)合組1.093±0.1540.174±0.02317.257±0.213與對照組比較,*P<0.05;與聯(lián)合組比較,△P<0.05;表2同。2.2精子質(zhì)量與數(shù)量檢查及血清性激素水平乙醇組和染鉛組與對照組比較雖然未見顯著性差異(P>0.05),如表2所示,各實(shí)驗(yàn)組與對照組比較,精子數(shù)、活精率均但均值有增大的趨勢,而聯(lián)合組與其他各組比較,顯著降低(P顯著降低〔P<0.05),聯(lián)合組與染鉛組和乙醇組比較,其精子<0.05)血清LH染鉛組和乙醇組與對照組比較顯著降低(P數(shù)、活精率也顯著降低(P<0.05)而各組之間的精子畸形率<0.05),亦顯著低于聯(lián)合組(P<0.05)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)血清睪酮濃度測定結(jié)果表2各組精子數(shù)量、質(zhì)量及血清性激素水平檢查結(jié)果(x±s,n=8)精子數(shù)(107/g)舌精率(%)精子畸形率(%)T( ng/dlLH mIU/mI對照組90.00±6.365.6±4.0297.85±91.866.91±0.97染鉛組1.925±0.486·△63.60±4.72·△5.9±4.9370.85±151.30△5.33±0.29*△乙醇組2.082±0.296*△72.00±6.04·△5.5±3.423.00±109.83△5.42±0.47·△聯(lián)合組1.637±0.39343.63±9.755,8±3.383.84±35.506.48±1.283討論作用組比較亦顯著升高。顯示鉛和乙醇的聯(lián)合作用可能使睪丸本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),聯(lián)合組睪丸系數(shù)與對照組比較顯著升高。染損傷加重, Leydig細(xì)胞受損,分泌T能力下降,引起垂體促性腺鉛組、乙醇組和聯(lián)合組精子計(jì)數(shù)與對照組比較顯著減少,聯(lián)合激素LH代償性升高。T分泌減少可以引起精子的產(chǎn)生和發(fā)育障組與鉛和乙醇單獨(dú)作用組比較顯著減少。聯(lián)合組精子活動度較礙,使精子數(shù)目減少,活精率下降,這與本研究的結(jié)果一致。其他各組均顯著下降。以上結(jié)果表明鉛和乙醇對大鼠睪丸系數(shù)提示鉛和乙醇對雄性大鼠的生殖內(nèi)分泌的變化呈現(xiàn)明顯的增毒及精子有比較明顯的增毒作用。作用。睪酮對于維持精子的發(fā)生和成熟是必需的,由睪丸的 Leydig參考文獻(xiàn)細(xì)胞分泌,該細(xì)胞是LH作用的靶細(xì)胞,LH是控制T產(chǎn)生的主[1] Suzan a wadi, ghayasuddin ahmad. Effects of lead on the male repro-要刺激因子。本研究中,血清T水平乙醇組和染鉛組與對照組Ictive system in mice [J ] Journal of Toxicology and Environmental比較有增高的趨勢,血清LH水平染鉛組和乙醇組與對照組比較Health,1999,56:513522顯著降低,與某些報(bào)道的結(jié)果相反34。這可能與睪丸中曲細(xì)精2 Lancranjan L. Reproductive ability of workman occupationally exposed to管受損使支持細(xì)胞分泌的雄激素結(jié)合蛋白(ABP)減少有關(guān)。ABP使曲細(xì)精管上皮結(jié)合的T減少,導(dǎo)致血清中T水平升高。ers for lead [j]. Toxic Lett, 1988, 24: 285