生物學(xué)通報(bào)2007年第42卷第8期乙醚、乙醇用于果蠅麻醉的研究郝大翠姚明鏡劉焰(華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植科院遺傳教研室湖北武漢43070)摘要在以果蠅成蟲為材料的實(shí)驗(yàn)中,麻醉劑的使用劑量是實(shí)驗(yàn)成功與否的重要環(huán)節(jié)。本研究結(jié)合乙醚、無水乙醇2種麻醉劑的特點(diǎn),篩選出了乙醚一無水乙醇復(fù)合麻醉的最佳劑量。經(jīng)比較認(rèn)為:乙醚;無水乙醉=1:1的配方具有安全范國寬、麻醉效果好的特點(diǎn)。并給岀了其麻醉劑量、麻醉處理時(shí)間及其對應(yīng)的麻醉效果等翔實(shí)的數(shù)據(jù)。有很好的實(shí)用性。關(guān)鍵詞果蠅麻醉劑量乙醚乙醇蘇醒率在遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作中,果蠅麻醉是一個(gè)重要記錄開始麻醉時(shí)間、全部果蠅靜止不動時(shí)間、第1的技術(shù)環(huán)節(jié)?，F(xiàn)在普遍使用醚作果蠅麻醉劑,它具有只果蠅蘇醒時(shí)間、2h蘇醒只數(shù)、全部果蠅蘇醒時(shí)間。麻醉快、蘇醒快的特點(diǎn)。但如果劑量太小,果蠅保持昏計(jì)算昏迷時(shí)間和2h蘇醒率:麻醉時(shí)間是指果蠅從活迷狀態(tài)的時(shí)間短。常需要進(jìn)行第2次麻醉。如果劑量躍狀態(tài)到紛紛墜入瓶底靜止不動的時(shí)間;昏迷時(shí)間是過大,昏迷時(shí)間雖然延長,但易造成過度麻醉而死亡。指從全部靜止不動至有1只恢復(fù)活動能力開始爬動麻醉程度的掌握和控制是個(gè)難點(diǎn)。我們在多年的實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。所需時(shí)間用分表示。蘇醒率是2h的蘇醒只教學(xué)及實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備工作巾,發(fā)現(xiàn)用乙醚—乙醇的混數(shù)/被試蠅數(shù)合溶液作麻醉劑,果蠅靜止不動,可觀察的時(shí)間長,安1.2.2乙醚、醇混合液不同比例試驗(yàn)將乙醚、乙全范圍更寬。為此,本試驗(yàn)擬從麻醉劑的配方、用量、醇按1:0、1:12:131的比例分設(shè)4個(gè)處理,以單的麻醉處理時(shí)間入手,改進(jìn)對果蠅麻醉的方法,以達(dá)到乙醚為對照劑量設(shè)定為60、120μ、240μL,麻醉延長昏迷狀態(tài)的時(shí)間,并確保較高的蘇醒率的目的。的處理時(shí)間分成3min、5min、7min、9min。與121材料與方法所不冋的是,當(dāng)麻醉處理時(shí)間到,迅速拔掉棉塞,將被1.1材料黑腹果蠅( Drosophila melanogaster)野生型試蠅倒入培養(yǎng)皿里計(jì)數(shù)。3次重復(fù)。長中的果蠅數(shù)是3(紅眼,長翅,直剛毛)和突變型(白眼,小翅,焦剛毛)。次重復(fù)之和,昏迷時(shí)間是3個(gè)重復(fù)的平均值。記錄昏迷12方法時(shí)間和2h蘇醒率。1.2.1果蠅對乙醚、乙醇的耐受試驗(yàn)我們分別將乙1.2.3不同果蠅品種對乙醚;無水乙醇=1:1混合液的醚、乙醇設(shè)定為30μ、60μL、90μ、130μ、170μ反應(yīng)選野生型和突變型果蠅用乙醚:乙醇=1:1的混5種不同的劑量,麻醉前,選用長12cm,q3.8cm的指合液240μ,麻醉處理時(shí)間7min麻醉方法和統(tǒng)計(jì)形試管,配上棉塞。在離試管底1cm處作上標(biāo)記,制觀察方法同122作出1個(gè)約12cm3的小麻醉室(見下圖)。隨機(jī)取7d2結(jié)果分析2.1果蠅對乙醚、乙醇的耐受性:從表1可看出果巍對2種麻醉劑麻醉的速度隨劑量的增加而加快。30μL60μL、90μL、130μ、170μ5個(gè)不同劑量的乙醚處理,其麻醉的時(shí)間分別為4min、1min、lmin、0.83min0.5min;而無水乙醇處理組30μ~90μ的3個(gè)處理無1只達(dá)到靜止不動的狀態(tài)。當(dāng)劑量增加到130μI170μ時(shí),分別在19.0min、21.0min被試蠅才慢慢進(jìn)入麻醉狀態(tài)。130μ處理下第1只果蠅蘇醒的時(shí)間比同劑量的乙醚處理推遲了124min。復(fù)蘇的情況差異更大。乙醚組130μ以下劑量處理的在120min以內(nèi)果蠅小寐醉窒示意圖蘇醒率達(dá)100%。同劑量的無水乙醇8h后才蘇醒了以內(nèi)的健壯成蠅裝入試管里,使每瓶有成蠅30只以%,至24h蘇醒30%;170μL無水乙醇處理8h上。麻醉時(shí),用移液槍吸取麻醉劑注入棉塞的中央位24h的蘇醒率比130μ處理更低,分別為2.5%和置,迅速將棉塞推到離試管底部1cm處。使棉塞下端12.5%。由此可見,乙醚麻醉快蘇醒快,復(fù)蘇率高,昏迷的弧線最低點(diǎn)與離瓶底1cm的橫線相交。置20-25℃時(shí)間短。而乙醇麻醉慢,所需劑量較大但蘇醒慢,昏迷2007年第42卷第8期長。若將這3種麻醉劑的特點(diǎn)結(jié)合將有可能獲得更好22乙醚、無水乙醇混合液使用結(jié)果分析的麻醉效果。221不同劑量、不同時(shí)間、不同比例純乙醚處理果表1果蠅對乙醚和乙醇的耐受極限比較蠅的麻醉狀況當(dāng)乙瞇(ck)劑量為60μL,麻醉處理蘇醒情況時(shí)間3min時(shí)昏迷時(shí)間為186min,處理時(shí)間5-9min劑被試麻醉昏迷全蘇2b8h24h時(shí)昏迷時(shí)間均在20min以上;這4種處理時(shí)間下的2h果蠅時(shí)間時(shí)間醒時(shí)叫數(shù)(m(m間蘇醒蘇醒蘇醒|蘇醒蘇l蘇理蘇醒率均在97%以上。但當(dāng)乙醚的劑量增至120μL時(shí),6051/m數(shù)*(%數(shù)率(%數(shù)(%)麻醉處理3mn其昏迷時(shí)間可達(dá)26mn以上但2h蘇醒率降至87.6%,并隨處理時(shí)間延長及劑量的增加2h306363100蘇醒率急劇下降。364651100222乙醚無水乙醇=3:1的不同劑量不同時(shí)間處理13039083310139100下果蠅的麻醉狀況由表2可見當(dāng)乙醚:無水乙醇=3:1170440531156的比例時(shí),劑量為60μL的各處理2h蘇醒率均在無:3049尤異迷4910099%以上,但果蠅昏迷時(shí)間短,塢低于14min;當(dāng)劑量水為240μL時(shí)昏迷時(shí)間均在22min以上,但2h蘇醒90331100率急劇降低,處理3min時(shí)為93.8%,5min時(shí)即降為130491916300714|1530170402001|2.55125341%;當(dāng)劑量為120μL時(shí)處理時(shí)間在5~9min的3個(gè)處理昏迷時(shí)間在21mn-336min,2h蘇醒率均在表2乙醯、乙醇混合液、不同比例的試驗(yàn)結(jié)果麻醉處理時(shí)間乙醚:乙醇劑量3 min57 min果蠅數(shù)昏迷時(shí)間h蘇限率果輯數(shù)昏迷時(shí)間對2h蘇腰半果繩數(shù)昏迷時(shí)間x2h蘇醒利果蠅數(shù)x迷時(shí)間劉2h蘇醒革60μL15520±11452.60.69871:1120μ213901000232.6±0.699177240±1.099187253±21860610771333530698410t101001351161598495123159921120ux15911+06127140±1.0100174|146±2365183±4995640叫159183±2.51001722205698129280+3087418143+10060160uL13960±529931148.3±4.711610.0x4610013.6±2.l3110叫u131176061001212104010012527+23100178226+2393819637.61063411483861547422714.3:2946260μ149186±1510016420+1.09901322.+231026±21乙醚CK120μ1101266128761142762159313527010372105293±4249.5240叫19270=103081381309321391490±13091416本處理第3重復(fù)無一只蘇醒,故無法計(jì)算昏迷時(shí)間99%以上,從昏迷時(shí)間及安全性兩方面考慮,此3個(gè)處1:1的混合液劑量為120μL和240μ處理時(shí)間分別理是可用的配方/劑量處理時(shí)間組合為579min時(shí),果蠅的昏迷時(shí)間均在22min以上,最223乙醚:無水乙醇=2:1的不同劑量不同時(shí)間處理長者為9min處理時(shí)的35min,2h蘇醒率均在98%下果蠅的麻醉狀況表3中乙醚:無水乙醇=2:1時(shí),以上,處于昏迷狀態(tài)時(shí)間長、安全性好;當(dāng)劑量為僅有劑量為240μ,處理時(shí)間5min的處理,果蠅的昏60L時(shí)的各種時(shí)間處理及120μ、240μ3min處迷時(shí)間達(dá)到22min,同時(shí)2h蘇醒率達(dá)98%,從昏迷理下,盡管2h蘇醒率都在97%以上,但昏迷時(shí)間均不時(shí)間和安全性上看此配方/劑量/處理時(shí)間組合較適用到20min60μL、120μ劑量下各處理及240L/3min的處理23不同果蠅品種對乙醚:無水乙醇=l:l麻醉劑的反雖2h蘇醒率在95%以上,安全性好,但昏迷時(shí)間太應(yīng)野生型和突變型果蠅對以乙醚:無水乙醇=1:1的短在18.3min以下;240μ7min及240μL/9min處麻醉劑240μL7min處理后的麻醉狀況見表3。野生理雖延長了昏迷時(shí)間,但2h蘇醒率急劇下降,分別型的昏迷時(shí)間為290min,突變型為25.6min,2品種為874%和601%,安全性差昏迷時(shí)間無明顯差異,其2h蘇醒率均為100%。結(jié)果224乙醚:無水乙醇=1:1的不同劑量不同時(shí)間處理表明乙醚:無水乙醇=1:1的混合液不論是對生活力強(qiáng)的野生型還是對生活力很弱的突變型果蠅均適用生物學(xué)通報(bào)2007年第42卷第8期表3不同果蠅品種對乙醚乙醇=1:1的混合液反應(yīng)是不一樣的。本實(shí)驗(yàn)有16個(gè)配比/劑量/時(shí)間組合1次處埋:240μ7mn麻醉其昏迷時(shí)間在15-33min、(昏迷時(shí)間在20min品種成數(shù)(x)昏迷時(shí)同m(2b蘇醒率以上的有10個(gè)組合)2h蘇醒率在8%以上(見表2其效果明顯優(yōu)于“幾滴乙醚,半分鐘”的原方法。其中野生型(紅限、長翅,直剛毛290±36突變型(眼短翅、焦剛毛)151256±4500乙醚:乙醇=:1的配比適用的劑量(時(shí)間組合范圍寬它不僅適于對生活力強(qiáng)的野生型果蠅的麻醉,對生活3討論力很弱的突變型也同樣安全有效。1)在目前使用的多種遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教材中,用于果5)在麻醉空間不變的情況下,麻醉劑的用量,和蠅雜交的麻醉方法一般都是依照“幾滴乙醚、半分鐘”麻醉處理的時(shí)間是可以調(diào)控的。使用者可以根據(jù)實(shí)際的原則其具體操作方法多種多樣,因?yàn)闆]有限定麻醉需要在表2中選取所需要的麻醉劑量及麻醉處理時(shí)劑量和麻醉空間麻醉效果各不相同。我們曾以4、6、8間的參數(shù)。這一結(jié)果,是對“幾滴乙醚,半分鐘"的原方滴的劑量半分鐘的麻醉時(shí)間做過對比實(shí)驗(yàn)。其昏迷時(shí)法進(jìn)一步完善,不僅在遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中方便了教師過短,分別為43min、8.0min、8.3min,難以滿足實(shí)對學(xué)生完成麻醉技術(shù)的指導(dǎo),對以果蠅為材料的研究驗(yàn)教學(xué)及實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備的實(shí)際需要。工作者也具有一定的實(shí)用價(jià)值。我們認(rèn)為擇迷時(shí)間在20mn左右,2h以內(nèi)有6)本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)川乙醚、乙醇混合液麻醉后蘇醒的98%以上的被試蠅能蘇醒則該麻醉深度對雜交親本而果蠅,基本上能正常交配和產(chǎn)卵、并繁殖后代。但其對言是合適的。既能給學(xué)生足夠的操作、觀察時(shí)間,勿需果蠅及后代的生活力、體質(zhì)方面的毒理作用還有待進(jìn)2次麻醉;也能確保高復(fù)蘇率;提供足量、健牡的受試步研究。主要參考文獻(xiàn)2)若使用單一乙醚作果蠅麻醉,從昏迷時(shí)間和安1余君遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)北京農(nóng)業(yè)出版社,191全性兩方面考慮,有必要在“幾滴乙醚、半分鐘”的基2慧民,袁靜遺傳學(xué)驗(yàn),武漢:武漢大學(xué)出版社,J94礎(chǔ)上減少乙醚用量延長麻醉處理時(shí)間。本試驗(yàn)表2中3盧龍斗常重杰遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),北京:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版乙醱用量60μL(約2滴)麻醉處理時(shí)間3~7min,昏社,1996迷時(shí)間可達(dá)18.6-22.7min,2h的復(fù)蘇率99%以上。4楊大翔遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)北京:科學(xué)出版社,2004.王建波方呈祥鄢慧民等遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)教程.武漢:武漢大學(xué)出版根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果,若乙醚-乙醇混合使用,能在社,2004麻醉速度、昏迷時(shí)間、耐受程度、復(fù)蘇率多方面取長補(bǔ)6劉祖洞汪紹慧遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)第2版北京高等教育出版社1987短,能起到加強(qiáng)麻醉效果的作用。是較好的復(fù)合麻醉7張貴友吳瓊林琳.通遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)北京:清華大學(xué)出版社,劑4)乙醚和乙醇的配比不同,麻醉昏迷時(shí)間效果也(E-mail: haodacui@mail hzau. edu. en)(BF)血液蛋白質(zhì)預(yù)示心臟病風(fēng)險(xiǎn)膽固醇”(低密度脂蛋白)氧化,導(dǎo)致動脈粥樣硬化。它還會損害“好膽固醇”(高密度脂蛋白)對身體的保護(hù)作用,并減少血有時(shí)候,一個(gè)人明明看上去非常健康,其實(shí)患心臟病的風(fēng)液中一氧化氯含量,而一氧化氮是放松血管、使其柔軟通暢的險(xiǎn)很高。科學(xué)家新近發(fā)現(xiàn)了解釋這種怪現(xiàn)象的一個(gè)線索:血液重要物質(zhì)中的一種蛋白質(zhì)會損害心血管系統(tǒng),其含量過高是心臟病的早以往的研究曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)心臟病患者體內(nèi)血清髓過氧化酶含期預(yù)兆量高,荷蘭科學(xué)家的這項(xiàng)新研究是針對健康人患心臟病風(fēng)險(xiǎn)與種蛋白質(zhì)被稱為血清髓過氧化酶(MPO),由血液里的血清過氧化酶含量之間關(guān)系的首次大規(guī)模研究。199-1997白細(xì)胞分泌。它的任務(wù)原本是殺滅有害細(xì),但荷蘭醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年間,英國諾?？丝ぞ用駞⑴c了一項(xiàng)關(guān)于磨癥和營養(yǎng)的研究中心的一個(gè)研究小組在即將出版的《美國心臟病學(xué)院周刊》上這些研究對象的血樣被冰凍保存下來,荷蘭科學(xué)家在新研究中報(bào)告說,該蛋白質(zhì)會造成動脈發(fā)炎,破壞血液里的保護(hù)性物質(zhì)。利用了有關(guān)數(shù)據(jù)和血樣在心臟病的典型癥狀出現(xiàn)之前很久,血清髓過氧化酶含量增加在參與研究后平均8年的時(shí)間里,這批研究對象中有1138就發(fā)出了有害物質(zhì)積累的信號。人患冠心病、對比研究發(fā)現(xiàn),在性別橢同、年相近的人群中科學(xué)家認(rèn)為,這項(xiàng)成果開辟了心臟病研究和診斷的一個(gè)與未患病的人相比患上心臟病的人當(dāng)年參與研究時(shí)留下的血新領(lǐng)域。詳細(xì)研究相關(guān)病變過程,將有助于利用血液來及早發(fā)樣中血清髓過氧化酶含量明顯更高現(xiàn)患心臟病風(fēng)險(xiǎn)較高的人。血湳髓過氧化酶會使人體內(nèi)的“壞輛自《科學(xué)時(shí)報(bào)》2007年7月5日