食…分桁檢測Science and Technology of Food IndustryRP-HPLc法測定發(fā)前液中β-苯乙醇的研究劉東亞,金征宇(江南大學(xué)食品學(xué)院,江蘇無錫214036)饔:運用反相高效液相色譜對發(fā)酵液中的β-蘋乙醇進行定1材料與方法性定量分析確定了RP-HPLC測定發(fā)酵液中β-苯乙醇1.1材料與儀器的含量的方法。色譜柱: Dikma Diamonsil C1(150m46mm,5μm, Waters),流動相:甲醇:水=40:60(w/),流速B-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)品 sigma;L-舉丙氨酸1.0mL/min,紫外檢測波長:260nm,拄溫:30℃,外標(biāo)法定色結(jié)果:RP-HPLC法測定濃度在420L/10m時線級,江蘇無錫晶海氨基酸股份有限公司;甲醇性關(guān)系良好,r=0998,平均加樣回收率為叨71%,RSD純,江蘇漢邦科技有限公司;超純水自制。為1.04%(n=5)。此方法準(zhǔn)確,靈敏,簡單,重現(xiàn)性好,適合于發(fā)酵液這種復(fù)雜體系中β一萃乙醇的定量分析。UV-1201紫外可見分光光度計北京瑞利分析美鑣調(diào):β-苯乙醉,發(fā)酵液,反相高效液相色譜法儀器公司; Agilent Il00高效液相色譜儀系列包括中圖分類號:TS201.1文獻標(biāo)識碼:A四元泵、DAD檢測器、自動進樣器和色譜工作站;電文章編號:1002-0306(2006)01-0198-03子天平 METTLER TOLEDO,AB104- N MAXIO1g,d=0.lmg;045m微孔濾膜上海興亞凈化材料廠臺式離心機TD-5上海安亭科學(xué)儀器廠。B-苯∠醉(B-PE)足一種有著濃郁的玫塊香味12實驗方法的醇,玫瑰香料的廣泛需求使得B-PE成為香料和化1.2.1色譜分析條件色譜柱: Dikma Diamonsil CI妝品行業(yè)中使用量最多的香味成分。天然β-PE存在(150mm×4.6mm,5μm, Waters);流動相:甲醇:水于很多花和植物,如玫瑰、風(fēng)信子、某莉、水仙、百合(40:60/v);流速:lm/min;柱溫:30℃;進樣量等的精油中,玫瑰精油中β-PE的含量較高,最高可達60%,向濃度的產(chǎn)品只有用溶劑抽提才可生產(chǎn)出10uL;檢測波長:260nm。122溶液的制備來,但損失很大,提取價格昂貲。歐美食品立法機構(gòu)把用物理法、酶法或是微生物法處理自然資源生產(chǎn)122.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液精確量取01mLB-苯乙醇標(biāo)出來的香味成分定義為天然香料。酵母的 Ehrlich代準(zhǔn)品,用甲醇溶解,定容至10mL,配成濃度為謝途徑屮,通過把L-舉丙氨酸生物轉(zhuǎn)化為2-PE是100μL/10mL的貯備液,分別吸取貯備液0.0、0.40.8、1.2、1.6、20mL以甲醇定容至10mL,得0、4、8種很好的生產(chǎn)天然阝-苯乙醇的方法。在β-苯乙醇產(chǎn)生菌的菌種選育和發(fā)酵工藝研究過程屮,需要建立12、16、20μL10mL的標(biāo)準(zhǔn)液,經(jīng)045μm微孔濾膜過種對阝-苯乙醇組分和含量的快速檢測方法。日濾后,濾液用于HPIC測定1.2.2.2發(fā)酵液樣品溶液苯乙醇發(fā)酵液以前,已報道的檢測方法有GC法、HPLC法,國內(nèi)該方4000r/min離心15min,去除菌體,取上清液用面研究目前尚無相關(guān)報道。本文利用反相高效液相045μm過濾,即得待測樣品溶液。色譜法對發(fā)酵液中β-苯乙醇的定量測定進行了研檢測波長的確定將β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)品溶解于究,狄得了較為滿意的結(jié)果可作為β-苯乙醇的定量甲醇中,制備成濃度約20μL/10mL的溶液,在200-測定方法。400mm的波長范圍進行紫外光全波掃描,β-苯乙醇在218、260m有2個紫外吸收峰,實驗中以218nm收稿日期:2005-03-12為檢測波長時干擾較大,260mm時色譜圖基線平穩(wěn)作者簡介;劉東亞(1981-),男,在讀碩士研究生,研究方向:生物技術(shù)在食品中的應(yīng)用。峰形良好,故選擇260mm作為檢測波長食品業(yè)鐘核分析檢測ol.27,No.O1,2006好,如表1所示(n=5)。1.27回收率實驗取已知β-PE含量的發(fā)酵液315份,向其中分別加入三個濃度水平的B-PE標(biāo)樣,測定加入標(biāo)樣后的回收率,算得平均加樣回收率為9771%,符合測試要求,如表2所示。01.2.8發(fā)酵液樣品測定12.8.1發(fā)酵液的預(yù)處理β-PE發(fā)酵液以4000r/mi波長(m)離心15min,去除菌體,取上清液用0.45μm過濾,即圖1得待測樣品溶液。124流動相和流速的確定文獻中采用乙腈-水以1.28.2標(biāo)樣及樣品的分離色譜圖在上述優(yōu)化的相關(guān)配比作為流動相?？紤]到乙腈價格較高,同時參色譜條件下,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液得到充分的洗脫和考其他文獻,分別配制不同組成的流動相進行實驗,分離,保留時間分別為7207和7220min,色譜圖見經(jīng)過多次篩選,結(jié)果表明,甲醇-水(40:60,vv的系統(tǒng)圖3、圖4。從圖中可知,在本色譜條件下,發(fā)酵液中效果最好。同時,對不同流速(080、100、120ml/min)條的β-PE能得到很好的分離,保留時間與標(biāo)準(zhǔn)品基本件下的分離情況進行研究。與1.00 ml min相比較,流致,峰形對稱且無明顯的干擾峰。速為080mL/min時保留時間增加,分離效果較差;流速為L20ml/min時保留時間縮短,但不明顯,且分離效果與100mL/min相差不大?？紤]到柱壓的因素,最終選用流速為100mmin。1.25標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按2.2中所配048、1216、20μL/lOmL的標(biāo)準(zhǔn)液,經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后,在上述優(yōu)化的色譜條件下進樣10μL測定,以濃度50為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見圖2。02,。,線性回歸方程為y=23902x-13188,r=0.9998。結(jié)果表明,B-苯乙醇在4-20μL/10m范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。圖3標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖60004000標(biāo)樣濃度(μL/1OmL)0圖2β-苯乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線57.510125126精密度實驗取…濃度128mL/左右的發(fā)酵液樣品,在前述色譜條件下連續(xù)進樣5次,考察方圖4發(fā)酵液樣品色譜圖法的重現(xiàn)性。算得柑對標(biāo)準(zhǔn)偏差為104%,精密度良1.2.8.3發(fā)酵樣品測定結(jié)果如表3表1精密度實驗(n=5)測定值mL紐分平均值m/1)RsD)%B-P530741.2845126631,277612838表2加樣回收率實驗原樣濃度(mL)添加濃度(mL)測定濃度(mL/)問收率%)平均回收率(%)0.40097270.8002.01997.71.60029170L.17食業(yè)技分析檢測Science and Technology of Food Industry表3發(fā)酵樣品測定結(jié)果中的嵐味強化肽食品與發(fā)酵工業(yè)2004,30(90:96-995]趙光輝,王成福李俊萍采用反相高效液相色譜法測定木測定結(jié)果(mLD0.80.720.36119094糖醇產(chǎn)品中各組分含量食品與發(fā)酵工業(yè),2004,30(7:1172討論[6 MM W Etschmann, D SelJ Schrader. Biotechnological本文建立了一種HP-HPLC法測定發(fā)酵液中B- production of2- phenylethane. Appl Microbiol BiotechnolPE的分析方法,流動相為甲醇:水(40:60,v/v);色譜柱2002.59:1-8%3 Dikma Diamonsil C:(150mm x4.6mm, 5um, Waters), [71 Christoph wittmann, Michael Hans, wilfried Bluemke流速1ml/min,最適吸收波長260mm。此方法具有處 Metabolic physiology of aroma -producing Kluyveromyces理簡單、快速、定量準(zhǔn)確、回收率高和重復(fù)性好的特 marxianus[J Yeast,200.191351-1363點。在B-PE產(chǎn)生菌的菌種選育和發(fā)酵工藝研究中采8] Chung- Jr Huang Shiow- Ling lee, Cheng- Chun Chou用本法,可有效的對菌株生產(chǎn)能力和發(fā)酵條件進行 Production of2- phenylethanol, a flavor ingredient. by Pichia評價,為菌株改良,發(fā)酵與分離工藝的優(yōu)化,提高單fermentens L-5 under various culture conditions. Food位發(fā)酵液的目標(biāo)產(chǎn)率和分離提取的收率提供了有效 Research International.20134277-282的分析分離手段9) D Stark, T Munch, B Sonnleitner, I W Marison, U von參考文獻Phenylalanine by Saccharomyces cererisiae [] Biotechnol Prog[]達世祿色譜學(xué)導(dǎo)論M武昌:武漢大學(xué)出版社,1999320-3392002,18:514~523.[2]孫寶國,等香科與香精M北京:中國石化出版社20009-10[10] MM W. Etschmann, n Sell, J Schrader. Screening of孫寶國食用調(diào)香術(shù)M北京:化學(xué)工業(yè)出版社2003.98-99yeasts for the production of the aroma compound 2王艷萍櫪永清,韓英素反相高效液相色譫法測定發(fā)辭液 phenylethanol in a molasses- based medium []. BiotechnologyLetters,2003,25:531~536(上接第192頁)[]劉志皋食品營養(yǎng)學(xué)M北京:中國輕工業(yè)出版社,1991.78.參考文獻:L】2]趙國華,等米糠保健功能因子糧食與油19992):39[]陳正行,等米糠濃縮蛋白的提取及功能性評價食品與41.發(fā)酵工業(yè),20004):17-19「13]周惠明谷物科學(xué)原理[M,北京:中國輕工業(yè)出版社,2003,陽2]王辜工業(yè)發(fā)酵分析實驗指導(dǎo)[M]長春:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)(校276-284內(nèi)教材),2001,10-12.14」盧慶善高梁學(xué)[M]北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1999156-16313]朱文適,袁慶云胡蓉,等米糠生戶植酸和肌醇的工藝條件151中國農(nóng)業(yè)年鑒M北京:農(nóng)業(yè)出版社,199234[山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報1999,18(4):235-238.[l6胡國華黃紹華,曹樹穩(wěn)等米糠膳食纖雄的嬲備與性能4]葉在榮,單又諒,周開志,等粗植酸鈣的制備1提取條件研究門中國食品添加劑,199416-20.貴州農(nóng)學(xué)院學(xué)報,1994(2):51-53.[17] Saeman J L Humbert, E. S,et al. Properties of sunflower阿S葉在榮,單友諒周開志,等,粗植酸鈣的制備山沉波條件 memproeludes[J). Food sci,l974,39:368-37)]貴州農(nóng)業(yè)學(xué)報,1994(2):54-56[18] Yasutmasu, K, et al. Whipping and emulsifying properties6陳利根,等米楝中提取菲汀工藝條件的優(yōu)化上海第二 of soybean Products(Jl.Agric Biol Chem,1972.6719737工業(yè)大學(xué)學(xué)報1997(2):8-14[19 Frost I, et al. Objective characterization of hydrocolloid門]王洪倫,等紅珍血脂康膠寰的營養(yǎng)成分分析門分析測 organleptic properties[J]. Food Tec198438:1-120,技術(shù)與儀器,2003(9:165~168.「20]蔡東連,等.對米糠營養(yǎng)價值的再認識J中國食物與營無錫輕工大學(xué)與天津輕工業(yè)大學(xué)合編食品分析[M北京:養(yǎng),200231中國輕工業(yè)出版社,198~199[2l1]龔院生,等,米褲中活性因子γ-谷維醇降血脂功能性研⑨李澤紅,等雞內(nèi)金中氧基酸及營養(yǎng)元素含量的淜定J.究食與飼料加,200037-40基酸和生物資源,2002,24):20-21.[22]吳瑩姚忠愿,等米糠半纖維素降膽固醇機理的研究10]王立,陳正行,姚惠源,等,米糠蛋白提取的研究門食品工糧食與油200(15658業(yè)科技,2002(7):37-39