·論著·中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2014年1月第11卷第2期桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用研究唐秀能韋紅棉▲陸翠林周至品李建哲劉冠達(dá)廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院,廣西南寧530011摘要]目的觀察桂產(chǎn)薇香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用探討其作用機(jī)制。方法各自分別取60只合格昆明小鼠,隨機(jī)分為空白對(duì)照組阿司匹林組(0.4g/kg)、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高、中低劑量組,每組各12只。采用熱板法、扭體法和甩尾法來觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用,并測定熱板法小鼠血清丙二醛(MDA)、前列腺素E2(PGE2)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。結(jié)果①與空白對(duì)照組比較,桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能顯著提高熱板法小鼠熱刺激痛閾,在給藥后3060、90、120mn均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<001),顯著降低小鼠血清MDA和PGE2含量,提高SOD活性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<001)。②與空白對(duì)照組比較桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物均可顯著減少醋酸致痛時(shí)小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005或P<001),其中桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高、中和低劑量組(60、3.0、1.5gkg)扭體抑制率分別為4545%、3565%和15.66%。③無論是與空白對(duì)照組比較還是與本組給藥前比較桂產(chǎn)截香薊乙醇提取物在給藥后30、6090、120min能顯著延長小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<005或P<001)。結(jié)論桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物具有顯著的鎮(zhèn)痛作用,其機(jī)制之一可能與減少炎癥介質(zhì)釋放、清除氧自由基有關(guān)。[關(guān)鍵詞]柱產(chǎn)藿香薊乙醇提取物;鎮(zhèn)痛;機(jī)制[中圖分類號(hào)]R85文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1673-7210(201401(b)-0020-0Study on analgesic effects of ethanol extract of Ageratum conyzoides. Lfrom guangxiTANG Xiuneng WEI Hongmian LU Cuilin ZHOU Zhipin LI Jianzhe LIU GuandaRuikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning530011, China[Abstract] Objective To observe analgesic effects of ethanol extract of A geratum conyzoides L. from Guangxi and toexplore its analgesic mechanisms. Methods 60 Kunming mice were selected individually in hot-plate method, bodytorsion method and swinging-tail method, all of them were divided into blank control group, Aspirin group(0. 4 g/kg), A geratum conyzoides. L low dosage group, medium dosage group, high dosage groupmethod, body-torsion method and swinging-tail method were used respectively to investigate the analgesic effects ofethanol extract of A geratum conyzoides L from Gti, and then, the contents of malondialdehyde(MAD) and prostaglandinE2(PGE)and the activity of superoxide dismutase(SOD) in hot-plate mice serum were measured. Results Comparedwith blank control group, thermal stimulation threshold in hot-plate mice was enhanced by the ethanol extract of A ger-atum conyzoides. L. from Guangxi, the latency time of the mice's licking at 30, 60, 90, 120 min respectively were pro-longed, the differences were statistically significant(P<0.05 or P< 0.01). Meanwhile, MDA and PGE productions werereduced and SOD level in mice serum enhanced, the differences were statistically significant (P< 0.05 or P< 0.01)@2) Compared with model control group, mouse twisting munbers were remarkably reduced by Ageratum conyzoides. L.from Guangxi, the differences were statistically significant(P< 0.05 or P<0. 01). Body twisting inhibition rate in highmedium and low dosage group (6.0, 3.0, 1.5 g/kg) were 45.45%, 35.65% and 15.66% respectively. @3 Not only com-pared with blank control group but also compared with former dose in each group, the latency of the tail flick responsein the mice at 30, 60, 90, 120 min were prolonged respectively after given the ethanol extract of A geratum conyzoidesL from Guangxi, the differences were statistically significant(P< 0.05 or P<0.01). Conclusion The ethanol extract ofA geratum conyzoides L. from Guangxi has significantly基金項(xiàng)目]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(編號(hào)anms maZ2011251)。be relate to its ability of scavenging oxygen free radicals作者簡介唐秀能(19714-),男,壯族,碩土,副主任藥師, and reducing t中國煤化工oki碩士研究生導(dǎo)師;研究方向:生化藥理學(xué)及臨床藥學(xué)Key wordsCN MH Gonyzoides L▲通訊作者AF CHINA MEDICAL HERALD Vol 11 No. 2 January 2014中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2014年1月第11卷第2期論著藿香薊屬于菊科植物藿香薊,又名勝紅薊、白花有痛閾值測定結(jié)束后,立即行小鼠眼球取血,3500rmin草、白花臭草、消炎草等,屬一年生草本植物,多以全離心15min,棄下層沉淀,留上清液。將上清液置草或葉及嫩莖入藥,傳統(tǒng)藥用功效為清熱解毒、止血、于-20℃冰箱保存,隨后按照試劑盒說明書的方法測止痛等,在亞洲、非洲、南美洲等地均廣泛使用2。我定前列腺素E2(PGE2)MDA的含量和SOD活性國多分布于廣東、廣西、云南、貰州、四川、江西、福建12對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響另取一批小等地,民間常用于治感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、疔瘡濕疹、鼠60只,體重(20±2)g,雌雄各半,分組及給藥同外傷出血、燒燙傷等。本研究采用野生于廣西田間荒“1.2.1”項(xiàng)下。末次給藥后1h,每只小鼠腹部注射地的桂產(chǎn)藿香薊進(jìn)行鎮(zhèn)痛作用研究,旨在探討其鎮(zhèn)痛0.6%醋酸溶液0,2mL,立即記錄注射后15min內(nèi)各作用及機(jī)制組小鼠的扭體反應(yīng)次數(shù),并計(jì)算扭體抑制率6。扭體1材料與方法抑制率(%)=[(空白對(duì)照組小鼠扭體均數(shù)-給藥組小1.1材料鼠扭體均數(shù))/空白對(duì)照組小鼠扭體均數(shù)]×100%。l1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康昆明種小鼠:體重(20±2)g;SPF123對(duì)甩尾法實(shí)驗(yàn)的影響另取一批小鼠,將小鼠尾尖級(jí)。動(dòng)物許可證號(hào):SCXK桂2009-000,廣西醫(yī)科大3cm滲入(48.0±0.5)℃恒溫水中,以小鼠第1次甩尾學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。反應(yīng)時(shí)間作為痛閾指標(biāo),所有小鼠在給藥之前均進(jìn)行1.1.2桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物的制備桂產(chǎn)藿香薊地測痛,以痛閾值10~30s為合格鼠,共60只。隨后分上部分陰干后粉碎,精確稱取2kg,加20倍量95%乙組及給藥同“1.21項(xiàng)下”。末次給藥后1h,測定小鼠痛醇浸泡1h后加熱回流提取Ih,置冷后過濾,留置第閾值,當(dāng)痛閾值大于60s時(shí)停止測試,按60s記痛閾1次濾液;藥渣加10倍量95%乙醇加熱回流提取1h,值。置冷后過濾,留置第2次濾液。合并2次濾液減壓回13統(tǒng)計(jì)學(xué)方法收乙醇,提取液減壓濃縮,再分別配成實(shí)驗(yàn)所需的相采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS130對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,正態(tài)應(yīng)濃度的桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物。分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較11.3藥物、試劑及儀器阿司匹林腸溶片,湖南新匯采用方差分析,兩兩比較采用LSD-檢驗(yàn)。以P<制藥股份有限公司,批號(hào)121104;鹽酸嗎啡片,青海0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。制藥廠,批號(hào)20130317;冰醋酸、甲醇、氫氧化鉀均為2結(jié)果分析純;超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛2.1桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)的影響(MDA)試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供;與空白對(duì)照組比較,阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙GJ-8402型熱板測痛儀,浙江寧海白石電子醫(yī)藥儀器醇提取物高劑量組、中劑量組在給藥后306090120min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期(P<0.051.2方法或P<001),桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延1.21對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)的影響將雌性小鼠放在水溫長的趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本組給藥調(diào)節(jié)到55℃的恒溫水浴熱板上,以小鼠舔后足的時(shí)間前后比較,桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量為痛閾指標(biāo)。所有小鼠在給藥之前均進(jìn)行測痛,以痛組在給藥后306090、120min均能顯著延長小鼠舔閾值10-30s為合格鼠。將合格小鼠60只隨機(jī)分為足反應(yīng)的潛伏期(P<005或P<0.01),桂產(chǎn)藿香薊5組:空白對(duì)照組阿司匹林組(04gkg)、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延長的趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)乙醇提取物高、中、低劑量組(分別相當(dāng)于生藥60、意義(P>0.05)。見表1。30、1.5gkg),每組各12只。1次連續(xù)灌胃給藥7d,22桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)小鼠血清PGE3MDA末次給藥后0.5、1、1.5、2h各重復(fù)測定小鼠痛閾值,含量及SOD活性的影響當(dāng)痛閾值大于60s時(shí)停止測試,按60s記痛閾值。所與空白對(duì)照組比較,阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙表1桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)痛閾值的影響(s,x組別只數(shù)劑量(gkg)給藥前給藥后30min給藥后60min給藥后90min給藥后120min空白對(duì)照組19.21±4.0819.76±5.392108±7.051907±6.251936±596阿司匹林組12042236±5.5640.15±】1.67”▲4058±14.22“430.27±11.2825.73±9.05桂產(chǎn)藿香薊醇提物高劑量組122l.12±63131.28±11.60中國煤化工35851002桂產(chǎn)藿香薊醇提物中劑量組1222.25±52330.82±13.71TH37.36±11.08“4桂產(chǎn)藿香薊醇提物低劑量組1224.24±6.69CNMHG2979+1082注:與空白對(duì)照組比較P<005,"P<001:與同組給藥前比較,P<0.05,P<0.01;“-“表示未給藥CHINA MEDICAL HERALD Vol 11 No. 2 January 2014論著中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2014年1月第11卷第2期醇提取物對(duì)小鼠血清PGE2、MDA含量及SOD活性具醇提取物高劑量組、中劑量組均可顯著減少醋酸致痛有顯著的影響。阿司匹林組桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物時(shí)小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)(P<0.05或P<001),桂產(chǎn)高劑量組、中劑量組均能顯著降低小鼠血清PGE2、藿香薊乙醇提取物低劑量組有減少醋酸致痛時(shí)小鼠MDA含量,明顯提高小鼠血清SOD活性(P<0.05或扭體反應(yīng)的次數(shù)的趨勢(shì),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)P<0.01)。見表2見表3。23桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)醋酸誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)2.4桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)小鼠甩尾反應(yīng)的影響的影響與空白對(duì)照組比較,阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙與空白對(duì)照組比較,阿司匹林組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)小鼠甩尾反應(yīng)具有顯著影響。阿司匹林表2桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)小鼠血清PGE、MDA含量及SOD活性的影響(xs)組別只數(shù)劑量(g/kg)PGe(ng/mL)MDA(nmol/mL)SOD(U/mL空白對(duì)照組0.824±0.2154.16±0.3528.62±2.77阿司匹林組0426±0.187”2.05±0.264245±397”桂產(chǎn)藿香薊醇提物高計(jì)量組222220.528±0.179”264±0.28″桂產(chǎn)香薊醇提物中劑量組0.596±0.1952.79±0.31”37.11±3.06桂產(chǎn)藿香薊醇提物低計(jì)量組0642±0.1193.52±0.3830.51±299注:與空白對(duì)照組比較,P<0.05,"P<001;“-”表示未給藥;PGF;前列腺素E;MDA:丙二醛;SOD:超氧化物歧化酶表3桂產(chǎn)藿香薊乙醇提組別、6090、120min均能顯(gkg)次數(shù)(次,x土)(%)著延長小鼠甩尾反應(yīng)潛伏期(P<005或P<0.01),桂空白對(duì)照組396±9281204173±536-5631產(chǎn)藿香薊乙醇提取物低劑量組有延長的趨勢(shì),但差異桂產(chǎn)藿香薊醇提物高劑量組126021.6±6784545無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。桂產(chǎn)藿香薊醇提物中劑量組123025.1±71336653討論桂產(chǎn)藿香薊醇提物低劑量組121.5334±8.06注:與空白對(duì)照組比較,“P<001;“-“表示未給藥及無數(shù)據(jù)熱板法和甩尾法是兩種較為典型的物理刺激致痛模型,扭體法致痛模型中較為典型的化學(xué)剌激模組、桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物高劑量組、中劑量組在給型。本實(shí)驗(yàn)采用物理刺激致痛模型和化學(xué)刺激致痛模藥后30、60、90、120min均能顯著延長小鼠甩尾反應(yīng)型的方法來觀察桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠潛伏期(P尸<0.05或P<0.01),桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取的鎮(zhèn)痛作用,結(jié)果顯示,桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能顯物低劑量組有延長的趨勢(shì),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>著提高熱板法小鼠熱刺激痛閾,在給藥后3060、90表4桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)小鼠甩尾潛伏期的影響(s,xs組別劑量(g/kg)藥前給藥后30mn給藥后60給藥后90mn給藥后120min空白對(duì)照組23.46±43724.36±5.282465±6.1724.56±7.232464+6.25阿司匹林組1225.68±59243.89±10.24▲41.26±13.21”443923+946·3006±955桂產(chǎn)藿香薊醇提物高劑量組12602421±6023561±901*36.48±11.8242.15±10.3640.27±11.36▲桂產(chǎn)藿香薊醇提物中劑量組2561±5873348±9623421±12243966±9984068±12.58桂產(chǎn)藿香薊醇提物低劑量組2532±49625.53+6852867±8.1031.36±88930.33±8.41注:與空白對(duì)照組比較;P<005,P<00與本組給藥前比較,4P<0,4<001;“-表示未給藥120min均能顯著延長小鼠舔足反應(yīng)的潛伏期和小鼠他炎癥、疼痛介質(zhì)的協(xié)同作用。MDA是自由基引甩尾反應(yīng)潛伏期,能顯著減少醋酸致痛時(shí)小鼠扭體反發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物,在外周和中樞氧自由基應(yīng)的次數(shù),統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果比較具有顯著性差異。說明桂均有致痛作用。SOD是自由基有力的清除劑,可通過產(chǎn)藿香薊乙醇具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。減少自由基的大量產(chǎn)生而達(dá)到鎮(zhèn)痛作用。本研究結(jié)果產(chǎn)生疼痛的主要原因大多由PCE2、白三烯和氧顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物能降低實(shí)驗(yàn)小鼠血清中自由基過多引起明。PGE2是一種非常重要致痛介質(zhì),PGE2和MDA含量,提高小鼠血清SOD活性,提示桂可直接作用于神經(jīng)末梢引起疼痛,下調(diào)痛覺感受器的產(chǎn)藿香薊乙醇提取物鎮(zhèn)痛作用可能與減少炎癥介質(zhì)痛閾值,提高其對(duì)其他致痛因子的敏感性,也可啟動(dòng)釋放、清除氧中國煤化疼痛所介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在外周和中樞都有重要有文獻(xiàn)CNMHG底反應(yīng)不僅僅的作用01,同時(shí)能增強(qiáng)組胺、5-羥色胺緩激肽等其是脊髓反應(yīng),而且可能和高級(jí)中樞有關(guān),而對(duì)冰醋22: CHINA MEDICAL HERALD Vol 11 No. 2 January 2014中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)2014年1月第11卷第2期論著酸引起小鼠疼痛的扭體法實(shí)驗(yàn)可能外周鎮(zhèn)痛有關(guān)叫,endothelial interaclions by teactive metabolites of oxygen本實(shí)驗(yàn)顯示桂產(chǎn)藿香薊乙醇提取物對(duì)熱板法和扭體and nitrogen relevance to ischemic heart disease J]. Free法實(shí)驗(yàn)小鼠均有明顯的鎮(zhèn)痛作用,可以推測桂產(chǎn)藿香Radic bio med,1998,25(4-5):404-433薊乙醇提取物的鎮(zhèn)痛作用與中樞和外周均有關(guān)系。[10] Flodgren GM, Crenshaw AG, Alfredson H, et al. Glutamate[參考文獻(xiàn)and prostagland in E2 in the trapezium uscle of female[1] Okunade AL. Ageratum conyzoides L (Asteraceae)[].Fisubjects with chronic uscle pain and controls deter-toterapla,2002,73(1):1-16mined by microdialysis [J]. Eur J Pain, 2005, 9(5): 511[2]Chah KF, Eze CA, Emuelosi CE, et aL Antibacterial and wound In] Heinricher MM, Neubert MJ, Martenson ME Prostaglandinhealing properties of methanolic extracts of some NigerianE2 in the midbrain periaqueductal gray produces hypermedicinal plants [. J Ethnopharmacol, 2006, 104(2): 164algesia and activates pain-modulating circuitry in therostral ventromedial medulla [J]. 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