●科研開發(fā)食品與機(jī)械2002年第1期總第87期羊胎酶的水解工藝條件The enzymatic hydrolysate conditions of sheep placentas and embryos口蘇曄魏泓蔣作明敬璞Wei Hong Jiang Zuoming Jing Pu摘要研究了適用于羊胎水解的蛋白酶及其木瓜蛋白酶( Papain),Merk公司進(jìn)酶最適作用條件,8如表1所示。最適的酶解條件研究結(jié)果如下:以水解度和口分裝活力15×104u/g;氮收率為指標(biāo)通過中性蛋白酶、胃蛋白酶胃蛋白酶( Pepsin),無錫酶制劑廠→胰酶%胰酶和木瓜蛋白酶4種蛋白酶對羊胎蛋白質(zhì)30·木瓜蛋白酶%活力10×104u/g中性蛋白酶%水解效率的比較,選擇胰酶為水解羊胎的最1.2方法胃蛋白酶%關(guān)鍵詞羊胎蛋白酶水解工藝蛋白質(zhì)含量(總氮量)的測定:Abstract An optimum technology of enzymaticFim酚法。3drolysate of sheep placentas and embryos was游離氨基酸含量的測定:中性甲醛studied through uniform desi. The optimum滴定法。水解度(DH)的測定:以水解前后過to the DH% and receival of nitrogen degree,the濾液中氨態(tài)氮量和反應(yīng)體系中總氮量的時間/has selected as the optimal enzyme百分比(%)表示。(5圖1不同蛋白酶對羊胎的水解度一時from the neutral protease, pepsin, papain andDH%=氨基氮含量/總氮×100%間曲線pancreatin氮收率的測定:以水解過濾液中總90量和反應(yīng)體系中總氮量的百分比(%)80tease Hydrolysis Conditions表示。59胚胎和胎盤統(tǒng)稱為羊胎。胎盤俗氨基酸組成和含量的測定:氨基酸稱紫河車,具有滋陰養(yǎng)腎生精補(bǔ)血之功自動分析儀木瓜蛋白酶%效常用于婦女產(chǎn)后虛弱失血過多。也1.3水解工藝流程一中性蛋白酶胰酶%常被人們用來食補(bǔ)。已有的研究表明胚原料→加熱煮沸(10~15min)→適胃蛋白酶%胎及胎盤蛋白酶水解液中含有豐富的當(dāng)冷卻→調(diào)時為酶最適叫加酶術(shù)基酸、多肽及其它生物活性成分能明顯解→滅酶(90℃,10mn)→調(diào)pH至70地增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能,是當(dāng)前該類保健離心(8000r/min,離心15mn)→酶圖2不同蛋白酶氮收率一時間曲線補(bǔ)品中的主要成分之一0.2水解液從圖1、圖2及表2可以看出,胰酶羊胎經(jīng)蛋白酶不完全水解,生成多2結(jié)果與分析的水解速度最快,胃蛋白酶的水解度最肽及氨基酸的混合物其消化吸收率大2.1酶的選擇慢。對于氮收率來講,不同蛋白酶催化水解時蛋白質(zhì)回收率也是以胰酶最高大提高,利用價值提高。因此我們進(jìn)行分別選用胰了此方面的研究,以在保證氮收率的前酶、胃蛋白酶、木瓜表1不同蛋白酶水解羊胎的條件提下,盡可能提高蛋白質(zhì)的水解度。蛋白酶、中性蛋白蛋白酶種類酶用量底物含量溫度反應(yīng)時間1材料與方法酶,在各酶的最適6000451.1材料條件下水解羊胎蛋中性蛋白酶6000羊胎,市售白質(zhì),以水解度及木瓜蛋白酶6001557.0胰酶( Pancreat,sgm公司進(jìn)口氮收率作為評價指圍蛋白酶6000545255分裝活力10×10u/g;標(biāo)做出水解度一+為每g底物中酶活力單位U1398中性蛋白酶( neutral protease)),時間曲線和氮收率無錫酶制劑廠,活力10×104u/g一時間曲線,如圖表2不同蛋白酶對羊胎水解產(chǎn)物的感官評定1和圖2所示,同中國煤化工(蛋白酶胃蛋白酶重慶市2001年重點技術(shù)創(chuàng)新項目№o,147時兼顧水解液的感水解液〗和國家自然科學(xué)基金No.30070120官性狀。表2對不評定CNMHG腥味重什第三軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心博士,同蛋白酶水解羊胎水解液苦味5水解液外觀淡黃色渾濁淡黃色較清淡黃色渾濁淡黃色渾濁400038四川重慶所得水解液的感官評定6收稿日期2001-12-17性質(zhì)作了比較。各20FOOD& MACHINERY總第87期蘇曄等:羊胎酶的水解工藝條件●科研開發(fā)達(dá)8135%,木瓜蛋白酶次之。從水解以蛋白質(zhì)的水解度為指標(biāo)對水解結(jié)果2.3水解液游離氨基本酸組成及含量液感觀評定結(jié)果來看,以中性蛋白酶效利用“SAS"進(jìn)行回歸分析及尋優(yōu)計算的分析果最好。雖然胰酶本身有一種不愉快的找出水解的最優(yōu)條件。所得試驗結(jié)果見從表5中可以看出,水解液中含有味道,且水解液腥味較重,但這些在其后表3。19種組成蛋白質(zhì)的氨基酸游離氨基酸的工藝過程中都可以除去。從水解效率根據(jù)試驗結(jié)果求出回歸方程總量為4537mg/ml,其中包括人體所來講胰酶水解度和氮回收率均最高,從8.3632-461441-必需的8種氨基酸。與酸水解相比,其原料來源及成本出發(fā),與其它幾種酶相0.1451X2+0.2709X1X2+0.99602X4氨基酸組成中增加了色氨酸和y氨基比胰酶國內(nèi)生產(chǎn)廠家較多價格也相對0.0732X2X3丁酸,提高了營養(yǎng)價值較便宜,因此選擇其作為水解羊胎蛋白復(fù)相關(guān)系數(shù)RC=0.93923結(jié)論質(zhì)的工具酶方程的F值檢驗F=3.087>(1)以水解度和氮收率為指標(biāo),通F(0.05)=0.過中性蛋白酶、胃蛋白酶胰酶和木瓜蛋表3均勻設(shè)計試驗實施方案U(7+)及結(jié)果4061白酶4種蛋白酶對羊胎蛋白質(zhì)水解效率試驗號量底物濃度水解溫度水解時間水解度方程的復(fù)相關(guān)的比較選擇膚酶為水解羊胎的最適酶系數(shù)較高,表明回(2)通過均勻設(shè)計法選得羊胎水解10.59.0505.026.32歸方程與試驗點擬的最適條件為酶用量25%(100g原料1.015.0354.527.98合情況較好,各方加胰酶2.5g),底物濃度509%100ml程的F值檢驗值水中加原料5.0g),反應(yīng)溫度40℃,反453.5均大于各自的F應(yīng)時間3h,此時水解度為3928%567552.532.48分布臨界值,說明(3)羊胎水解液中含有19種組成蛋2.02.8F值檢驗通過,回白質(zhì)的氨基酸包括人體所必需的8種氨歸方程有意義基酸其游離氨基酸總量為45.37mg/ml表4回歸方程及最優(yōu)解的驗證結(jié)果對實驗中最好參考文獻(xiàn)實驗號X1X2X3X的4號進(jìn)行預(yù)報預(yù)報值實驗值報值:X1,1謝鷺姚開秦.人胚作為實驗材料的應(yīng)用3.05.039.2838.3423.05.0403039283105X,x,X=2.0及其倫理學(xué)爭議,醫(yī)學(xué)與哲學(xué),1997,182.55.5403.537.33,03110,4.5,3.543.05.5403.538.043.13Y=37.742李寶才,聞克威,盛國英,等,羊胎水解液類脂化學(xué)組成的研究,食品科學(xué),2000,實測值:X1X2,X3,X4=2.0,表5水解液中游離氨基酸組成和含量3 Bradford MM. A rapid and sensitive method for11.0,4.5,3.5Y含量he quantitation o microgram quantities o pro-1=38.25tein utilizing the principle of proten dye binding纈氨酸val180半胱氨酸Cys2,01二者相差很Anal bachem,1976(72):248-2551.32酪氨酸Tyr1.06小,且該試驗點在4GBI09.399賴氨酸L242組氨酸Hs2.31各因變量的考察區(qū)5熊善柏,王啟明,趙山,烏雞肉蛋白質(zhì)分色氨酸Tp0.58精氨酸Arg85域內(nèi),因此在此號步酶解工藝與水解液澄清方法研究,食甘氨酸Gy6,48脯氨酸Pro試驗點的附近區(qū)品工業(yè)科技,200021(4):56~58苯丙氨酸Phe甲硫氨酸Met2,05域,求各因變量最熊明民,徐幸蓮陳伯樣,烏骨雞肉酶解條0.91丙氨酸Aa異亮氨酸le優(yōu)解為:件的研究,肉類研究197(3):16-19黃文濤胡學(xué)智.酶應(yīng)用手冊,上海:科亮氨酸Leu3.49氨基丁酸1.89學(xué)技術(shù)出版社,1989天冬氨酸Ap273游離氨基酸總和45.37403.08王璋.食品酶學(xué).北京:輕工業(yè)出版社Y=39.28%22酶作用最適條件的選擇1990在綜合因變量最優(yōu)解附近對回歸方9熊燕飛,王惠平,陳懷新,等.酶法水解蠶水解反應(yīng)的溫度、起始叫值、酶用程的預(yù)測值及最優(yōu)解進(jìn)行驗證,結(jié)果見蛋白制備多肽的工藝研究,胡北大學(xué)量底物濃度和反應(yīng)時間都是影響蛋白表4,表4結(jié)果與預(yù)測值基本相符說明學(xué)報,192(3:18-20酶水解反應(yīng)的重要工藝參數(shù)。因蛋白酶回歸方程具有一定的預(yù)見性最優(yōu)解也10方開秦,均勻設(shè)計與均勻設(shè)計表M在其最適作用值范圍內(nèi),值的變是可靠的因此得出膚酶飛化對酶促速度的影響不大1,.因此選擇白質(zhì)的最優(yōu)條件為酶用量中國煤化工國平,等.酶促水解酶用量(ES)%(100g凈蛋白質(zhì)所加酶原料加胰酶2.5g),底物CNMHG究,食品工業(yè)與發(fā)酵的克數(shù))底物濃度S%(100ml水中所(100ml水中加原料50g),反應(yīng)溫度1994(5):7-10加原料的克數(shù))水解溫度(T)C℃、水解0℃,反應(yīng)時間3h時間(t)h四因素,通過均勻設(shè)計法0FoOD& MACHINERY