離子替代等相結(jié)合的方法。另外還可結(jié)合胞內(nèi)代謝產(chǎn)物扣[7] Bertaso F, Hendry BM, Donohoe p. Alterations in out ward K制的方法進(jìn)行通道分離和鑒別。再有就是基因篩選克隆并currents on removal of extemal Ca2+ in human atrial my[J]. Biochem Biophys Res Commun 2000 273 1 ):10表達(dá)不同通道亞基的方法能夠達(dá)到分離通道的目的如卵母[8] Koumi s. Backer CL, Arentzen CE. Characterization of in wardly細(xì)胞或人工質(zhì)膜表達(dá)可以作為膜片鉗技術(shù)的輔助手段。隨rectifying Knel in human cardiac myocytes. Alterations in著對(duì)離子通道門(mén)控特性和調(diào)控機(jī)理認(rèn)識(shí)的深入將有更多分channel behavior in myocytes isolated from patients with idio.離和鑒定方法得到應(yīng)用。thie dilated cardiomyopathy[ J ] Circulation, 1995, 92(2)8結(jié)語(yǔ)[9] Frazier CJ, George EG Jones SW. Apparent changes in ion selec膜片鉗技術(shù)以其實(shí)用、快速、靈敏、準(zhǔn)確及重復(fù)性好等技tivity caused by changes in intracellular K during whole-cellrecording J]. Biophys J 784): 1872術(shù)優(yōu)勢(shì)已經(jīng)在大量的研究中得到證實(shí)。這一技術(shù)發(fā)明至今[10] Zhou WG, Fontenot j, Liu s,et. Modulation of cardiac calcium已有20多年歷史國(guó)外20世紀(jì)80年代中期用此技術(shù)進(jìn)行hannels by propofo[ J ] Anesthesiology 1997 86 670研究并推廣國(guó)內(nèi)20世紀(jì)90年代初引進(jìn)這一技術(shù)。但國(guó)內(nèi)[11 Nygren A, Fiset C, Firek jw,n. Mathematical model ofatrial cell the role of K currents in repolarization目前由于多種原因用此技術(shù)進(jìn)行心血管藥物與心肌細(xì)胞離. Circ res,l9988x1)為3子通道的研究相對(duì)還多停留在動(dòng)物細(xì)胞階段。種屬及組織[12] Priebe l, Beuckelmann DJ. Simulation study of cellar electric差異使得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與人或臨床的聯(lián)系上還有一段距離亟待[13]ha￥, trom JA, Furukawa T Charact采用人體細(xì)胞進(jìn)行大量的研究這也是今后藥物研究(包括the sodium current in single human atrial myocyte J ]. Cric Res麻醉藥物舶一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域。隨著在分子水平上對(duì)心臟離子199271(3)535通道門(mén)控動(dòng)力學(xué)及調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識(shí),也將使進(jìn)一步揭示心肌[14] Schneider M Proebstle T Hombach V,et al. Characterization ofthe sodium currents in isolated human cardiocyte J]. Pfuegers細(xì)胞的生理和病理生理過(guò)程成為可能。Arch 1994 428 84參考文獻(xiàn)15 Renate H Frank S Stephan H et al. Single-channel properties of[1]方福德周呂,丁濂等.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技巧全書(shū)(下冊(cè)IM]L-type calcium channels from failing human ventricle[ J ].Car-北京北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1995[16] Mewes T, Ursula R L-type calcium currents of human[2] Kitamura H Yokoyama M Akita H et al. Tertiapin potently andfrom ventricle of non-failing and failing hearts and from[J]. J Mol Cell Cardiol 1994 26: 130selectively blocks muscarinic K' channels in rabbit cardiac my- 17] Quadid H, Albat B, Nargeot J Calcium currents in diseased hiocyte[ J]. J Pharmacol Exp Ther 2000 293(1): 196[3 J Nenov NI, Crumb WJ, Pigott JD , et al. Quinidine interactionman cardiac cell J]. J Cardiovasc Pharmaco!, 1995 25282with human atrial potassium channels-developmental aspect[J]. [18] Li GR Feng JL, Wang ZG et al. Comparative mechanisms of 4.Circ res,998428):1224ninopyridine-resistant Ito in human and rabbit atrial myocyt[4]趙穎胡大一楊新春等肽類(lèi)血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑對(duì)心[J]. Am J Physiol, 1995 26 38 ): H463肌細(xì)胞離子通道的影響J中華心血管病雜志2008X1):[19] Li GR,Feng JN, Yue Lx et al. Transmural heterogeneity of adion potentials and Itol in myocytes isolated from the human rightventricl J]. Am J Physiol, 1998 275 2 Pt 2 ) H369[5] Hamill OP, Martty A, Neher E, et al. Improved patch-caI 20] Amos GJ, Wettwer E, Metzger F et al. Differences bet ween out-echniques for high-resolution current recording from cells andcell-free membrane patched J ]. Pfluegers Arch 981 39185ocyte[ J ] J Physiol. Lond ),1996A91 31electropharmacological studie[ J]. Pharmacol Res 2000 Ax 1): [21 Noma A ATP-regulate K' channels in cardiac muscle J ]. Notrel983305147(收稿日期2001-0305)藥物蛋白的聚乙二醇修飾姜忠義高蓉許松偉王艷強(qiáng)(天津大學(xué)化工學(xué)院天津30002)摘要淚目的較為系統(tǒng)地了解藥物蛋白的聚乙二醇修飾過(guò)程。方法根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)就聚乙二醇類(lèi)修飾劑選擇、修飾反應(yīng)原理與操作祭件、過(guò)程設(shè)計(jì)與產(chǎn)品純化、生物化學(xué)和生物學(xué)分析定性等問(wèn)題作出簡(jiǎn)要論述。結(jié)果與結(jié)論聚乙二醇修飾后的蛋白質(zhì)被賦予了許多新的物理化學(xué)和生物學(xué)特性以及臨床效果得到了明顯改善顯示了藥物蛋白的聚乙二醇修飾的良好應(yīng)用前景中國(guó)煤化工關(guān)鍵詞聚乙二醇沘學(xué)修飾藥物蛋白CNMHG中圖分類(lèi)號(hào)TQ464.7R977.6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼文章編號(hào)J2人作者簡(jiǎn)介姜忠義男博士副教授Tel(022)27890882Fax(022)3513454E-mailzhijiang@mail.zdnet.com.中國(guó)藥學(xué)泰握6月第37卷第6Chin Pharm /,2002 June, Vol, 37 No. 6.409蛋白質(zhì)藥物主要有蛋白質(zhì)激素和干擾素、血漿蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)類(lèi)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、黏蛋白、膠原蛋白mPbG-O-COCH: 000-N琥珀酰膠類(lèi)CH oc堿性蛋白、蛋白酶抑制劑和植物凝集素、白細(xì)胞介素、集落刺激因子等1。蛋白質(zhì)藥物由于具有作用專(zhuān)一、高效等特點(diǎn)PEG--O-C-N-C-C-OH而在人類(lèi)健康中發(fā)揮著日益重要的作用。蛋白質(zhì)藥物的原HN—PEG—OHmPEG-0-OOO-N異墻雙功能類(lèi)料有動(dòng)植物細(xì)胞和微生物細(xì)胞等非人體來(lái)源。若將非人體mPEG-O來(lái)源的藥物蛋白通過(guò)靜脈注射到人體后常常刺激機(jī)體的免甲酰胺類(lèi)疫系統(tǒng)使之產(chǎn)生特異免疫應(yīng)笞產(chǎn)生對(duì)該種蛋白的抗體。繼PEG-o-CH-CH-CHmPEG邳氧類(lèi)續(xù)注射該種蛋白就會(huì)產(chǎn)生過(guò)敏性反應(yīng)。即使不產(chǎn)生過(guò)敏反mPEG=CH3-(OCHCH)n-OH應(yīng)免疫應(yīng)答也會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)的失活或加快蛋白質(zhì)的代謝mPEG= CH3-(OCH, CH )n-OH從而降低藥物蛋白的療效2.蛋白質(zhì)藥物的療效不僅取決圖1常用的PEC類(lèi)修飾劑于蛋白質(zhì)特定的化學(xué)結(jié)構(gòu)而且還取決于其特定的空間結(jié)和修飾反應(yīng)形成的連接鍵類(lèi)型有:①羥基琥珀酰胺脂類(lèi)構(gòu)因此可以通過(guò)基因工程、化學(xué)修飾等手段部分或全部解(NHs酯酰胺鍵)環(huán)氧化類(lèi)(烷基鍵)洶羰基咪唑類(lèi)尿決蛋白質(zhì)藥物的缺陷其中化學(xué)修飾以其靈活多樣、簡(jiǎn)便易烷鍵)④硝基苯基碳酸酯類(lèi)尿烷鍵)⑤三氟乙基磺酸酯類(lèi)行的特點(diǎn)而得到了較為廣泛的應(yīng)用3烷基鍵)⑧醛類(lèi)(№末端κchif堿)1聚乙二醇類(lèi)修飾劑PEG修飾劑通過(guò)伯胺基團(tuán)與蛋白質(zhì)的反應(yīng)常常會(huì)形成化學(xué)修飾劑與蛋白質(zhì)的反應(yīng)主要有?；磻?yīng)、烷基化反不均一的偶合物。不均一主要是指蛋白質(zhì)分子中同一基團(tuán)應(yīng)、氧化和還原反應(yīng)、芳香環(huán)取代反應(yīng)等。代表性的修飾劑被某一修飾劑修飾時(shí)其化學(xué)反應(yīng)性不相同以及不同的基團(tuán)有醋酸酐、乙酰咪唑、乙二醛、右旋糖苷、肝素、葡聚糖、乙可以與同一種修飾劑發(fā)生同一性質(zhì)的反應(yīng)。為改進(jìn)修飾的酸/丙二酸的共聚物羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮聚1,不均一性對(duì)蛋白質(zhì)表面的其它官能團(tuán)進(jìn)行修飾的方法也有3-乙二醇次甲基醚、乙烯/順丁烯二酰肼共聚物、聚氨基酸、大量的研究報(bào)道。這些官能團(tuán)主要包括游離的半胱氨酸、寡多聚唾液酸壞糊精、聚乙二醇等其中以聚乙二暾PEG)糖羥基等。用作修飾特殊位點(diǎn)的PEC衍生物有①乙烯基修飾劑應(yīng)用最多磺酸修飾游離的半胱氨酸)¤碘乙酰胺修飾游離的半胱PEG是一種兩親性聚合物由重復(fù)的乙烯氧亞單元組氨酸):馬來(lái)酰膠修飾游離的半胱氨酸);正吡啶二硫化成每個(gè)乙烯氧亞單元的相對(duì)分子質(zhì)量為44。PEG活性較物修飾游離的半胱氨酸)⑤酰朓修飾寡糖):異氰酸酯低無(wú)毒而且末端有兩個(gè)能被活化的OH基團(tuán)。為了獲得(修飾羥基或氨基)單功能的PEG,一般將PEG的一端轉(zhuǎn)化為甲氧基或其它的2.2修飾反應(yīng)的影響因素14烷氧基。除了線(xiàn)形PEG還有星形PEG即通過(guò)中間物如賴(lài)影響PEG修飾過(guò)程的主要因素有蛋白質(zhì)濃度、蛋白氨酸、三嗪等將兩上或更多的PEG鏈連接在一起5。質(zhì)與PEG修飾劑的摩爾比灣修飾反應(yīng)的pH值和離子強(qiáng)PEG類(lèi)修飾劑與其他修飾劑相比毒性小無(wú)抗原性具度③修飾反應(yīng)溫度修飾反應(yīng)持續(xù)時(shí)間。有良好的兩親性且生物相容性已經(jīng)得到FDA認(rèn)證特別是通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得到適宜的修飾反應(yīng)條件。通過(guò)對(duì)當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過(guò)PEG類(lèi)修飾劑修飾后,修飾劑的許多優(yōu)良性個(gè)或多個(gè)操作因素的控制就可以得到所需的連有單個(gè)、質(zhì)也會(huì)隨之移植到修飾蛋白中。常用PEG類(lèi)修飾劑見(jiàn)圖1。兩個(gè)、三個(gè)或多個(gè)PEG的蛋白質(zhì)偶合物。不同種類(lèi)的PEG修飾劑表現(xiàn)在都能較容易地合成出來(lái)或直2.3PEG修飾過(guò)程設(shè)計(jì)接購(gòu)買(mǎi)但不同的修飾劑化學(xué)反應(yīng)性和純度等均有所不同。蛋白質(zhì)的PEG修飾反應(yīng)可以在固相和液相中進(jìn)行據(jù)估計(jì)能阻礙腎和細(xì)胞清除的最佳PEG相對(duì)分子質(zhì)量為4萬(wàn)~6萬(wàn)6。PEG與蛋白質(zhì)偶合時(shí)有三種不同的方2.3.1液相反應(yīng)在典型的液相PEG修飾反應(yīng)中蛋白質(zhì)與PEG的摩爾比一般為1:3~5反應(yīng)pH值維持在7~8之式門(mén)單個(gè)大分子量PEG修飾蛋白質(zhì)的單一位點(diǎn)湦形PEG間溫度保持在4~8℃反應(yīng)持續(xù)8-16h然后用冰醋酸調(diào)兩個(gè)或更多的中等分子量PEG通過(guò)交聯(lián)連接在一起)修飾節(jié)pH值到4.5來(lái)終止反應(yīng)。反應(yīng)混合物用水稀釋后在陽(yáng)離蛋白質(zhì)的單一位點(diǎn)幾個(gè)小分子量PEG修飾蛋白質(zhì)的多個(gè)子交換柱上進(jìn)行吸附分離將剩余的PEG和反應(yīng)副產(chǎn)物洗位點(diǎn)。理論上因?yàn)樵谑荏w結(jié)合域內(nèi)受體與PEG結(jié)合的機(jī)掉。修飾蛋白與未修飾蛋白可以通過(guò)提高緩沖液中鹽的濃會(huì)減少單一位點(diǎn)被PEG修飾的蛋白質(zhì)應(yīng)該有較高的活性。多位點(diǎn)的PEG修飾或大分子量PEG的應(yīng)用往往會(huì)導(dǎo)致蛋白度來(lái)分離。典型的純化方法如下所示。質(zhì)部分或全部失去生物活性8-1V凵中國(guó)煤化工釋→陽(yáng)離子交換→洗濾2修飾反應(yīng)CNMHG2.1修飾反應(yīng)的類(lèi)型與途徑12-1312.3.2回相戊厘仕回相以PG修飾反應(yīng)中蛋白質(zhì)被吸附到離子交換柱上在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)PEG修飾劑不斷地循最常用的修飾反應(yīng)是親電活化的PEG修飾劑與賴(lài)氨酸的ε-氨基或蛋白質(zhì)N-末端的氨基反應(yīng)典型的PEG修飾劑環(huán)流過(guò)柱子。反應(yīng)結(jié)束后用緩沖液將過(guò)量的PEG和其它的副產(chǎn)物洗掉。當(dāng)未修飾蛋白仍被吸附在柱子上時(shí),可以改410.萬(wàn)摒。larm J, 2002 June, Vol 37 No 6中國(guó)藥學(xué)雜志2002年6月第37卷第6期變緩沖液中鹽旳濃度將修飾蛋白脫附下來(lái)。分析洗脫液確藥物蛋白被PEG修飾后在臨床應(yīng)用中顯示岀優(yōu)良性質(zhì)。具定蛋白質(zhì)的修飾度。柱子用相同量的未修飾蛋白再生以便體體現(xiàn)有物理和熱穩(wěn)定性的增強(qiáng)對(duì)酶降解敏感程度的降下次循環(huán)操作時(shí)能夠保持相同蛋白質(zhì)濃度。同上所述,低溶解度的增大在體內(nèi)循環(huán)半衰期、清除時(shí)間的增長(zhǎng)免EG再一次循環(huán)進(jìn)行修飾反應(yīng)然后再修飾蛋白脫附下來(lái)。疫原性和抗原性的降低及毒性的減小等。另外修飾的作用在固相PEG修飾過(guò)程中反應(yīng)、分離、提純能夠在同一根柱還表現(xiàn)在體內(nèi)活性提高而體外活性降低。該作用在集落刺子上進(jìn)行并且能重復(fù)多次。激因子GM-CSF白介素2(1L-2廂和白介素6(IL-6)腫瘤3修飾蛋白的分析與表征壞死因子TNFa)γ干擾素IFNy及其它生物分子上也得3.1蛋白濃度的測(cè)定151到了體現(xiàn)24類(lèi)似與普通的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定紫外分光光度法、PEG修飾后的蛋白還具有下述優(yōu)點(diǎn)生物分配行為變法、二寧可辛酸BCA法、 Bradford法或其它一些更可靠和準(zhǔn)化生物學(xué)性質(zhì)變化灣膜的滲透性提高。很小劑量就能確的氨基酸組成分析方法等均可用于修飾蛋白的濃度測(cè)定。取得持久臨床效應(yīng)從而提高了生命質(zhì)量降低了治療成本。3.2 SDS-PAGE分析般PEG偶合的生物大分子與未修飾的分子相比呈按照 Laemmle所敘述的方法進(jìn)行 SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)首現(xiàn)出不同的物理、化學(xué)性質(zhì)。這些改變的性質(zhì)包括構(gòu)象、空先對(duì)凝膠進(jìn)行特異性染色針對(duì)PEG的染色方法采用改進(jìn)間位阻、靜電結(jié)合性質(zhì)、疏水性、賴(lài)氨酸的pK可用來(lái)衡量可的 Kurfurst方法。SDs-PAGE凝膠用蒸餾水淋洗后浸泡在反應(yīng)的完成程度和等電點(diǎn)。與受體連接的親和力經(jīng)常受5%的氯化鋇溶液10min再用蒸餾水將氯化鋇洗掉浸泡在到這些物理化學(xué)性質(zhì)變化的影響因而以細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外0.1molL-1 TitrisolTN(碘溶液)0min然后再用蒸餾水將活性檢測(cè)測(cè)得值有所降低。藥物蛋白在體內(nèi)的生物活性與Titrisoltn洗掉將凝膠浸泡在蒸餾水中裝入經(jīng)過(guò)熱密封的偶合的PEG量有著正比的關(guān)系。然而體外的生物活性卻Kapak/ Scotchpak袋中避光保存與偶合的PEG量呈反比見(jiàn)圖1。蛋白質(zhì)被PEG修飾后延由于PEG分子的反常泳動(dòng)性以蛋白質(zhì)的標(biāo)記物作為遲了它在腎臟中的清除反過(guò)來(lái)又延長(zhǎng)了它的循環(huán)半衰期。對(duì)照時(shí) SDS-PAEG分析得到分子量要比實(shí)際的分子量要在以細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外活性檢測(cè)時(shí)由于培養(yǎng)時(shí)間是固定高。為了避免這個(gè)問(wèn)題可以采用PEG作為標(biāo)記物同時(shí)進(jìn)的PEG修飾后的生物分子半衰期的提高并不能得到顯示。行針對(duì)PEG的凝膠特異性染色。在相對(duì)較短的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)PEG修飾后的蛋白質(zhì)與受體間的3.3分子量的測(cè)定和分析161親和力較低導(dǎo)致活體外生物活性降低。質(zhì)譜是確定不同種類(lèi)PEG修飾蛋白分子量的一種較為理想的方法。新近研究岀的基質(zhì)輔助激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜方泫英文縮寫(xiě) MALDI TOF MS不僅能夠研究PEG修飾蛋白的分子量還能分辨出修飾蛋白的具體種類(lèi)。3.4修飾位點(diǎn)和位置異構(gòu)體的檢澌1-1801020304050修飾位點(diǎn)和位置異構(gòu)體的檢測(cè)一般是各種技術(shù)綜合分PEG相對(duì)分子質(zhì)最/x103析的。這些技術(shù)包括離子交換液相色譜、分子排阻色譜、肽圖、 Edman序列、氨基酸分析及 MALDT TOF MS。PEG圖1體內(nèi)、外生物活性與PEG摩爾質(zhì)量的關(guān)系飾后的蛋白質(zhì)分子可能出現(xiàn)的位置異構(gòu)體可以用下列公式由未修飾的蛋白質(zhì)、偶合了單個(gè)、二個(gè)、三個(gè)和更多PEG計(jì)算的蛋白質(zhì)組成的混合物復(fù)配使用可能會(huì)更好。理論上修飾對(duì)于有N個(gè)位點(diǎn)可被修飾的蛋白質(zhì)假定一次修飾κ度越高吸附速率越低延長(zhǎng)了循環(huán)持續(xù)時(shí)間),受體的飽和個(gè)位點(diǎn)那么可能的位置異構(gòu)體數(shù)目等于N!I(N-K)!度越低。由于吸附速率的不同而導(dǎo)致的上述混合物呈現(xiàn)重K!3迭生物活性見(jiàn)圖2。3.5蛋白質(zhì)的PEG修飾的指導(dǎo)原則19~20制備蛋白質(zhì)的PEG修飾時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮以下幾點(diǎn):①出發(fā)原秈蛋白質(zhì)和PEG修飾劑〕的性質(zhì)要了解清楚灣PEG修飾后的蛋白質(zhì)是一種新型分子:它既不是蛋白質(zhì),也不是PEG而是兩者的雜合物PEG修飾位點(diǎn)和化學(xué)計(jì)量關(guān)系應(yīng)該確定④應(yīng)保持制備過(guò)程的批次一致性修飾劑和修中國(guó)煤化工飾蛋白的制備應(yīng)該通過(guò)認(rèn)證CNMHG4修飾蛋白的生物學(xué)特性4.1生物活性21-2212耦合不同PEG數(shù)目(0,123個(gè))蛋白質(zhì)的體內(nèi)生1977年, Abuchowski等231經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明,PEG修飾后的物活性重疊示意蛋白質(zhì)作為藥物比未修飾蛋白更有效迄今為止已有許多42藥動(dòng)學(xué)中國(guó)藥學(xué)泰志chin Pharm J, 2002 June Vol, 37 No6.411將PEG修飾后的蛋白質(zhì)注射到動(dòng)物體內(nèi)時(shí)呈現(xiàn)出比[10] Rameshraja P, Huashan W Anil G. Current aspects in pharmacol未經(jīng)PEG修飾的蛋白質(zhì)更好的藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)。由于血清循環(huán)gy of modified hemoglobin[ J]. Adv Drug Deliv Review 200:85半衰期和血漿保留時(shí)間都比未修飾的蛋白質(zhì)高得多因而生[11]印春華張敏蛋白質(zhì)和多肽類(lèi)藥物的PEG結(jié)合物物活性保持時(shí)間更長(zhǎng)。新型給藥系統(tǒng)J]中國(guó)藥學(xué)雜志2001365)2924.3免疫原性12 J Zalipsky S, Menon-Rudolph S. Hydrazide derivatives of polyPEG修飾后的蛋白質(zhì)的免疫原性會(huì)有顯著地降低當(dāng)(ethylene glycol and their conjugates[ A ]. In: Harris JM edl ethylene glycol )Chemistry Biotechnical and Biomedical飾度超過(guò)一定值時(shí)免疫原性會(huì)消失。Application M 1. 2nd ed. New York: Plenum press 1998:3194.4毒性341PEG修飾后蛋白質(zhì)的毒性一般都比未修飾后的蛋白質(zhì)13 Abuchowsky A Coy JR Palezuck CN et al. Alteration of immu-ical properties of bovine serum albumin by covalent attachment的毒性低。但是使用低分子量的PEG作為修飾劑時(shí),修飾of poly ethylene glycol I J]. J Biol Chem 1997 2 3578蛋白有時(shí)還是存在一定毒性。靜脈注射或肌內(nèi)注射少量14 J Nathan A Zalipsky S, Kohn J Strategies for covalent attachmentof doxorubicin to poly( PEG-Lys ) a new water soluble polPEG時(shí)并未觀察到毒性。只有長(zhǎng)期和大量地使用PEG時(shí)(ether urethane I J ]. J Bioact Comp Pol,19949 239才有可能引發(fā)毒性。所以PEG修飾蛋白如細(xì)胞素、酶、荷爾[15] Habeeb AFSA. Determination of free amino groups in proteins by蒙一般不會(huì)呈現(xiàn)毒性。trinitrobenzensulphonic acid J]. Anal Biochem 1966, 14 328[16] Gotoh Y, Tsukada M Minoura N. Chemical modification of silkfibroin with cianuric chloride-activated poly ethylene gly-col經(jīng)過(guò)PEG修飾的藥物蛋白不僅較高地維持原藥的生物analyses of reaction site by H-NMR spectroscopy and conforma-tion of the conjugate J ] Bioconjug Chem, 1993 A 554活性而且能夠有效地降低或消除其免疫原性和毒性。同[17] Veronese FM Sacca B Schiavon O ,et al. PEG-Peptide and Pω-時(shí)由于分子量和交聯(lián)度的增加修飾后的藥物蛋白的循環(huán)半衰期顯著延長(zhǎng)。從而顯示了藥物蛋白的PEG修飾的良好的應(yīng)用前景[18 Snyder SL ,Sobocinsky PZ. An improved 24 6-trinitroben-ne參考文獻(xiàn)phonic acid method for the determination of amined[ J ]. Anal[1]周文孝袁慶輝聚乙二醇在生化藥物化學(xué)修飾中的應(yīng)用J1Biochem 1975 64 284中國(guó)藥學(xué)雜志19973X3)13219 Bovara R Ottolina G Carea G ,et al. Modification of lipase from[2]畢愛(ài)華醫(yī)學(xué)免疫學(xué)M]北京人民軍醫(yī)出版社,99593acryloyl morpholine and study ofts catalytic properties in orgamic solvents[ J ]. Biotechnol LettMatsushima A Hiroto M et al. Pegylation of protein[5/problems and solutiond J ] Biomaterials 2001 22# "iew w 20] Kozlowski A arris JM. Improvements in protein PEG ylatioand bioactive substances for medical and technical applicati[J]. Prog Polymer Sci 1998 23: 1233pegylation interferons for treatment of hepatitis a J].J Con Rel[4] Veronese FM. Peptide and protein PEG ylation: A re200l,7221721] Abuchowski A, Van ET, Palczuk NC, et al. Alteration ofPasacal B, Wolfgang B Polyethylene glycol-conjugated pharmamunological properties of bovine serum albumin by covalent attical protein J]. PSTT, 1998, 8)352tachment of polyethylene glycol[ J ]. Biol Chem,1977,252ith poly ethyl3578and other polymers. Altering properties of proteins to enhance [22 J Hershfield MS Biochemistry and immunology of poly( ethylenetic potentia[ J]. Adv Drug Deliv Rev, 1993, 10glycol ) Modified adenosine deaminase[ A ] In Harris JM . Zalipsky eds S-Pol( ethylene glycol ) Chemistry and Biological Ap-[7] Monfardini CS Branched monomethoxypoly( ethylene glycol )forplication( M ]. Washington: A merican Chemical Society 1998protein modification J ] Bioconj Chem 1995 622145~15[8] Veronese fm, Morpurgo M. Bioconjugation in pharmaceutical[23]洪民宋文俊聚乙二醇大分子化豬血紅蛋白對(duì)其攜氧特性的chemistr[J]. Inter J Phat影啊J]生物工程學(xué)報(bào)2000,(1)22.[9] Zalipsky S Chemistry of poly ethylene glycol )conjugates with 24 Farruggia B, Nerli B, Nuci HD et al. Thermal features of thebiologically active molecule J]. Adu Drug Deliv Rev 1995 16bovine serum albumin unfolding by polyethylene glycol! J]. Inter Biological Macromol .1999126 23收稿日期2001-01-18)醫(yī)藥信息裕隆世紀(jì)文化傳播中心擁有龐大的醫(yī)療資訊數(shù)據(jù)庫(kù)能夠?yàn)槟峁┽t(yī)藥特別是生物醫(yī)藥全方位的信息咨詢(xún)服務(wù)。內(nèi)容包括藥物研究發(fā)展動(dòng)態(tài)信息國(guó)外有關(guān)生物制藥公司產(chǎn)品、市場(chǎng)分析數(shù)中國(guó)煤化工研究報(bào)告醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展分析報(bào)告醫(yī)藥研究成果資料知識(shí)產(chǎn)權(quán)信息包括醫(yī)藥產(chǎn)品專(zhuān)利信息CNMHG專(zhuān)項(xiàng)生物醫(yī)藥研究發(fā)展項(xiàng)目咨詢(xún)服努包括項(xiàng)目論證、醫(yī)藥產(chǎn)品研究發(fā)展立項(xiàng)、市場(chǎng)調(diào)研等。聯(lián)系電話(huà)(010)2117390}13641032621手機(jī))朕系人杜云[本刊訊]萬(wàn)方揚(yáng)m J, 2002 June, Vol. 37 No, 6中國(guó)藥學(xué)雜志2002年6月第37卷第6期