江蘇農業(yè)科學2009年第1期肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影響因素研究吳海虹,玄國東2,劉春泉(1江蘇省農業(yè)科學院農產(chǎn)品加工研究所江蘇南京2100142山東省產(chǎn)品質量監(jiān)督檢驗研究院,山東濟南250100)摘要:以松果菊苷為標準品,采用紫外分光光度法測定了鹽生肉蓯蓉中苯乙醇苷類化合物的含量同時對影響肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取的反應溫度、乙醇體積分數(shù)料液比、提取時間以及提取次數(shù)等5個因素進行了分析確定了較佳工藝條件。結果表明肉蓯蓉中苯乙醇苷類化合物的較佳提取條件為溫度70℃,料液比1:10,乙醇體積分數(shù)80%,提取時間2h,提取次數(shù)2次。關鍵詞:肉蓯蓉;苯乙醇苷;影響因素;提取工藝中圖分類號:R284.1文獻標志碼:A文章編號:1002-1302(2009)01-0250-03肉蓯蓉屬多年生根寄生草本植物是名貴中藥材,具有補為40目,備用腎、益精、潤腸、抗衰老等功效,由于生長于沙漠環(huán)境,又有1.2.2松果菊苷測定波長的選擇稱取松果菊苷1.5mg“沙漠人參”之美譽。國內外學者對肉蓯蓉的化學成分進行置于50m容量瓶中用甲醇定容至刻度,搖勻在波長為230了大量研究迄今為止已經(jīng)分離出約近70種化合物包括苯-450m范圍內進行紫外掃描。如圖1所示,在波長為270乙醇苷類、環(huán)烯醚萜類、木脂素類化合物以及生物堿和糖類等400mm范圍內,松果菊苷均有紫外吸收,其中338m處紫其他成分。其中最主要成分為苯乙醇苷類化合物,以B-外吸收值最高因此在試驗研究中選定該波長進行松果菊苷葡萄糖為母核的含有酯鍵及氧苷鍵的天然糖苷,廣泛存在于標準曲線的繪制。雙子葉植物中,是由苯乙基咖啡?；投鄠€糖基組成的一類分子量較大、結構相似的水溶性物質2,根據(jù)其取代基的不同,可分為肉蓯蓉苷(A、B、C、D)、類葉升麻苷、松果菊苷等。Sao等“藥理學研究證明,類葉升麻苷肉蓯蓉苷A和C、松果菊苷等能顯著提高小鼠的性功能,并能增強記憶力。本試驗通過對鹽生肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇冋流提取的影響因素進行分析,找出了苯乙醇苷類化合物的較佳提取條件,為苯乙醇苷類化合物開發(fā)利用提供一定的科學依據(jù)。1材料與方法230263296329362428450波長(m)1.1材料、試劑與儀器圖!松果菊苷光譜掃描圖譜材料:鹽生肉蓯蓉內蒙古磴口縣產(chǎn)。1.23標準曲線繪制稱取松果菊苷標準品20mg,置50ml試劑:松果菊苷標準品(中國藥品生物制品檢定所純度容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度搖勻。分別吸取上述溶≥99%);D101型大孔吸附樹脂(天津南開大學化工廠);甲液0.20.40.6、0.8、1.0、12、1.4、16、1,8、2.0ml置于25醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯等均為國產(chǎn)分析純ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。以甲醇作測定空白,在主要儀器:TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通38mm波長測定紫外吸收度(圖2)。經(jīng)線性回歸處理得標用儀器有限責任公司);FW-100高速萬能粉碎機(北京中興準曲線:y=46.785x+1.1447。在該方程中,x表示吸光度值偉業(yè)儀器有限公司);FA2104型電子分析天平(上海恒平科(OD值),y表示松果菊苷含量(ug/ml)。該方程的回歸系數(shù)學儀器有限公司);標準分樣篩(浙江上虞道墟路達儀器廠);r=0.996,說明自變量與因變量之間存在高度的相關關系,HH-S恒溫水浴鍋(江蘇金壇恒豐儀器廠);YXJ-A高速大25「y=46785x+1.1447容量電動離心機(江蘇金壇環(huán)字科學儀器廠)。r=099931.2試驗方法1.2.1原料的預處理將烘干的肉蓯蓉進行粉碎粉碎粒度收稿日期:2008-11-25基金項目:江蘇省農業(yè)科學院科研基金(編號:6510605)作者簡介:吳海虹(1976—),女,江蘇儀征人,碩土,研究方向為天然產(chǎn)物研究與開發(fā)。E-mlil:wuhaihongl69@163.com。通訊作者:劉春泉,研究員。Tel:(025)84391255;E- mail: Icq@j,OD值圖2紫外分光光度法松果菊苷標準曲線吳海虹等:肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取影響因素研究251可以作為松果菊苷的標準曲線使用。1.2.4樣品測定稱取肉蓯蓉樣品10.00g(共4份),用70%乙醇回流提取3次,乙醇用量分別為30ml、20ml、20ml30每次1.5h。合并提取液減壓回收乙醇,膏狀物用水10ml混合,用水飽和的乙酸乙酯脫脂3次(每次乙酸乙酯用量為10m),水層再用水飽和的正丁醇萃取3次(每次正丁醇用量為10ml)。合并3次正丁醇萃取液減壓回收正丁醇所得稠膏用水5m溶解加入裝有15ml的D01的大孔樹脂柱頂端反應溫度(℃分別用水50m、甲醇50ml洗脫收集甲醇洗脫液45m,并用圖3反應溫度對肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物提取效果的影響甲醇定容至50ml。精密吸取02ml,甲醇定容至25ml,搖勻,為1:14時,苯乙醇苷類化合物濃度為34.18μg/ml,僅增加在338m處測定吸收值按松果菊苷問歸方程計算含量2.25μg/m。該結果說明比較適合的料液比應大于1:101.2.5肉蓯蓉苯乙醇苷乙醇回流提取蟛響因素研究但考慮到提取溶劑的用量及成本因素,認為料液比選擇1:10125.1反應溫度對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱比較適合。取5.0g肉蓯蓉干粉加入70%乙醇溶液70ml,于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃恒溫加熱回流提取2:0h,提取液經(jīng)濃縮分離之后測定苯乙醇苷類化合物的含量。25.2乙醇體積分數(shù)對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響5050稱取50g肉蓯蓉干粉,分別加入70m體積分數(shù)為50%60%、70%、80%、90%、95%的乙醇溶液,于70℃恒溫加熱回百爛能N撇流提取,提取時間及濃縮分離方法同上測定苯乙醇苷類化合物的含量1:61:81:101:12I:141.2.5.3料液比對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱取50g肉蓯蓉干粉,分別按料液比為1:6、1:8.1:10、1:12、田4料液比對肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物提取效果的影響1:14加入體積分數(shù)70%的乙醇70ml,提取時間及濃縮分離2.3乙醇體積分數(shù)對笨乙醇苷類化合物提取效果的影響方法同上,測定苯乙醇苷類化合物的含量圖5顯示,在乙醇體積分數(shù)為50%-80%范圍內,隨著1.z.5.4提取時間對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱乙醇體積分數(shù)提高提取液中苯乙醇苷類化合物濃度也增加取5.0g肉蓯蓉干粉,分別加入體積分數(shù)為70%的乙醇70濃度范圍為27.72-32.44ug/ml,且在該范圍內提取液中苯皿l,并于T0℃恒溫加熱回流提取L.0、1.5、,2,0、2.5、3.0、3.5、乙醇苷類化合物濃度的增加不明顯,說明乙醇體積分數(shù)為40h,濃縮分離方法同上測定苯乙醇苷類化合物的含量。50%-80%對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響不明顯。乙1.2.5.5提取次數(shù)對肉蓯蓉苯乙醇苷提取效果的影響稱醇體積分數(shù)超過80%之后,提取液中苯乙醇背類化合物濃度取5.0g肉蓯蓉干粉,分別加入體積分數(shù)為70%的乙醇70開始下降,至乙醇體積分數(shù)為95%時,提取液中苯乙醇苷類m,并于70℃恒溫加熱回流提取2h,提取次數(shù)分別為1次、2化合物濃度下降至18.27μg/ml,說明乙醇體積分數(shù)超過次3次4次,合并提取液濃縮分離方法同上測定苯乙醇苷80%之后對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響比較大。因類化合物的含量。此,乙醇體積分數(shù)選擇80%比較適合。2結果與分析2.1反應溫度對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響30如圖3所示,在反應溫度為40~70℃范圍內隨著反應溫度升高提取液中苯乙醇苷類化合物濃度也增加濃度范圍20為30.19~329μ/m,變化比較小,說明在該溫度范圍內反應溫度對苯乙醇苷類化合物提取的影響不明顯。但反應溫度超過70℃之后隨著反應溫度升高提取液中苯乙醇苷類化合物濃度降低。說明反應溫度超過70℃之后,不利于苯乙醇苷類化合物提取。綜合考慮各個因素之后,認為選擇反應乙醇體積分數(shù)(%圖5乙醇體積分數(shù)對肉蓯蓉苯乙酵苷類化合物提取效果的影響溫度70℃比較適合。2.2料液比對苯乙醇苷類化合物提取效果的彩響24提取時間對苯乙醇苷類化合物提取效果的形響圖4顯示,在反應料液比為1:6-1:14的范圍內,隨著由圖6可見,反應時間為1-4h范圍內隨著反應時間料液比的提高提取液中苯乙醇苷類化合物濃度也增加但在延長提取液中苯乙醇苷類化合物濃度也增加濃度范圍為1:6-1:10的范圍內提取液中苯乙醇苷類化合物濃度增加32.25-35.91g/ml,在整個反應時間范圍內提取液中苯乙比較迅速濃度為21.8-3193ug/ml;當料液比超過1:10醇苷類化合物濃度增加幅度很小,波動幅度僅為3.66之后提取液中苯乙醇苷類化合物濃度增加較緩慢至料液比μg/m。說明當提取反應超過1b之后對苯乙醇苷類化合物江蘇農業(yè)科學2009年第1期3結論鹽生肉叢蓉經(jīng)乙醇回流提取、濃縮、乙酸乙酯脫脂和正丁醇萃取有效成分等步驟,再經(jīng)大孔樹脂D0吸附,甲醇洗脫采用紫外分光光度法測定肉叢蓉中苯乙醇苷類化合物的含量。經(jīng)線性回歸處理得標準曲線為y=46.785x+1.1447。在該方程中x表示吸光度值(OD值),y表示松果菊苷含量提取時間(h)(μg/m)。該方程的回歸系數(shù)為0.9996,說明自變t與因變6提取時間對肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物提取效果的影響量之間存在高度的相關關系,可以作為松果菊苷的標準曲線提取效果的影響不大因此比較適合的提取時間為2h使用2.5提取次數(shù)對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響對肉蓯蓉苯乙醇苷回流提取影響因素的試驗研究表明由圖7可見,在提取次數(shù)為1~4次范圍內隨著提取次反應溫度選擇70℃、乙醇體積分數(shù)選擇80%,提取料液比選數(shù)的增加提取液中苯乙醇苷類化合物濃度增加比較顯著濃擇1:10、提取時間選擇2h提取次數(shù)選擇2次比較適合。度范圍為31.55-5229μg/ml,增加幅度為20.74g/ml。說考文獻明提取次數(shù)對苯乙醇苷類化合物提取效果的影響比較大,但過多的提取次數(shù)將消耗很多時間及能源,綜合考慮認為比較[1劉秀華,李蕓,張晶.肉蓯蓉屬植物的化學成分研究進展適合的提取次數(shù)為2次。J.蘭州醫(yī)學院學報,2004,30(3):96-97[2]靖會,佐建鋒,李教社.苯乙醇苷類化合物的藥理研究進展.時珍國醫(yī)國藥,2006,17(3):410-441[3]宋志宏屠鵬飛,趙玉英,管花內蓯蓉的苯乙醇苷成分[門.中草藥,2000,31(11):808-810.[4]Sato A, Kozima S, Kobayashi K. Pharmacological studies onhis herba. I Eects of the constituents of cistanchis herbaand leaming behavior in chronic stressed mice[J]. Yakugakuzasshi,1985,105(12):1134-113提取次數(shù)圖7提取次數(shù)對肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物提取效果的影響歡迎訂閱2009年《江蘇農業(yè)科學》郵發(fā)代號:28-10《江蘇農業(yè)科學》是由江蘇省農業(yè)科學院主辦的綜合性農業(yè)科技期刊為雙核心期刊(中國科技核心期刊全國中文核心期刊),榮獲第三屆國家期刊獎提名獎第二屆國家期刊獎百種重點期刊獎全國優(yōu)秀科技期刊、江蘇省雙十佳期刊江蘇省優(yōu)秀期刊全國農口學會優(yōu)秀期刊、華東地區(qū)優(yōu)秀期利等。主要刊登國內最新農業(yè)科技創(chuàng)新和研究成果方面的研究論文時效性強發(fā)表周期短適合農業(yè)科研人員、農業(yè)行政管理人員農業(yè)技術推廣人員、農業(yè)企業(yè)管理人員、生物與農業(yè)院校師生以及農民等閱讀。《江蘇農業(yè)科學》刊載的文章科學性強、論證嚴謹,在學術上多有新的見解與發(fā)展,而且通俗易懂,是您從事農業(yè)科研、農技推廣、農業(yè)管理跟蹤農業(yè)科技,實現(xiàn)科學致富的良師益友。工蘇農業(yè)科學)是雙月刊逢雙月15日出版大16開320頁。國內外公開發(fā)行,刊號:cN32-1418012(國際,郵發(fā)代號:28-0.每期定價20元全年10元半600地址:南京市孝陵衛(wèi)鐘靈街50號郵編:20014網(wǎng)址:hp:/ jsnykx.. Jaas. ac.cn電話:(025)8439028mail; nykx@ jaas, ac cn