本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定鮮食玉米中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量的方法。
   本標(biāo)準(zhǔn)適用于乳熟后期至蠟熟初期收獲的鮮食玉米中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量的測(cè)定。？[第1頁(yè)] ICS65.020.01 B22 備案號(hào)： DB32 江 蘇 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) DB32/T 2265—2012 鮮食玉米中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量的測(cè)定 雙波長(zhǎng)分光光度法 Determination of amylase and amylopectin content in fresh corn Dual-Qavelength Spetrophotometry 2012-12-28發(fā)布 2013-02-28實(shí)施 發(fā)布 江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 [第2頁(yè)] DB32/T 2265—2012 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T 1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》的要求編寫(xiě)。 本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所、國(guó)家農(nóng)業(yè)科技華東（江蘇）創(chuàng)新中心農(nóng)產(chǎn) 品加工工程技術(shù)研究中心。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：宋江峰、劉春泉、李大婧、林美娟、劉春菊、吳海虹、牛麗影、崔莉、江寧。 [第3頁(yè)] DB32/T 2265—2012 鮮食玉米中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量的測(cè)定 雙波長(zhǎng)分光光度法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定鮮食玉米中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量的方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于乳熟后期至蠟熟初期收獲的鮮食玉米中直鏈淀粉和支鏈淀粉含量的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB 7648-1987 水稻、玉米、谷子籽粒直鏈淀粉含量的測(cè)定 GB/T 6682-2008 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 原理 根據(jù)雙波長(zhǎng)比色原理，若試樣溶液在兩個(gè)波長(zhǎng)處均有吸收，則兩個(gè)波長(zhǎng)的吸光差值，與溶液中待測(cè) 物質(zhì)的濃度成正比。從待測(cè)樣品液中的直鏈淀粉、支鏈淀粉分別與碘生成絡(luò)合物的吸收?qǐng)D譜中，可以確 定測(cè)定波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)。淀粉與碘能形成螺旋狀結(jié)構(gòu)的碘-淀粉復(fù)合物，它具有特效的顏色反應(yīng)，其中 直鏈淀粉與碘生成純藍(lán)色復(fù)合物，而支鏈淀粉與碘依其分枝程度生成紫紅-紅棕色復(fù)合物。因此兩種淀 粉與碘作用時(shí)會(huì)產(chǎn)生不同的光學(xué)特性，從而表現(xiàn)出特定的吸收譜及吸收峰。 4 試劑 除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和 GB/T 6682-2008中規(guī)定的水。 4.1 直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品 直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品的制備參照 GB 7648-1987中附錄Ａ（參考件）操作。 4.2 支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品 支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品的制備參照 GB 7648-1987中附錄B（參考件）操作。 4.3 鹽酸（HCl）。 4.4 氫氧化鉀（KOH）。 4.5 石油醚（沸點(diǎn)30 ℃ ～ 60 ℃）。 4.6 碘（I2）。 4.7 碘化鉀（KI）。 4.8 碘試劑 稱(chēng)取 2.0 g碘化鉀，溶于少量蒸餾水，再加 0.2 g碘，待溶解后用蒸餾水稀釋定容至 100 mL。每 天用前現(xiàn)配，避光保存。 4.9 直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)貯備液 稱(chēng)取0.1000 g直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品，置于 50 mL容量瓶中，加入 1 mol/L 氫氧化鉀溶液 10 mL，在熱 1 [第4頁(yè)] DB32/T 2265—2012 水中待溶解后，取出用蒸餾水定容至刻度，搖勻并靜置，制備2 mg/mL直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)貯備液。 4.10 支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)貯備液 稱(chēng)取0.1000 g支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品按（4.9）法制備 2 mg/mL支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)貯備液。 5 儀器和設(shè)備 5.1 雙光束分光光度計(jì) 帶波段掃描。 5.2 分析天平 感量為0.01 g和0.1 mg各一臺(tái)。 5.3 pH計(jì) pH計(jì)精度為 ± 0.01，使用前校正。 5.4 索氏抽提器。 5.5 恒溫水浴鍋。 5.6 鼓風(fēng)干燥箱。 5.7 組織搗碎機(jī)。 6 試樣制備 將鮮食玉米籽粒樣品用組織搗碎機(jī)搗碎，置于 60 ℃鼓風(fēng)干燥箱中烘干，使其水分含量降低到10 % 以下，過(guò)孔徑為 0.25mm試樣篩。稱(chēng)取 1 g的烘干樣品放入索氏抽提器中，加入 35 mL石油醚，加熱回 流脫脂4 h，然后放入鼓風(fēng)干燥箱中烘干，揮去殘余的石油醚。 7 檢驗(yàn)步驟 7.1 提取 準(zhǔn)確稱(chēng)取脫脂樣品0.1000g，置于 50 mL容量瓶中，加 1 mol/L 氫氧化鉀溶液 10 mL，在 75 ℃水 浴中充分溶解20 min，冷卻后用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，靜置 15 min后過(guò)濾。 7.2 測(cè)定 精取5 mL濾液，置于50 mL容量瓶中，加25 mL蒸餾水，以0.1 mol/L 鹽酸溶液調(diào)pH至3.0，加0.5 mL 碘試劑，用蒸餾水定容至刻度。于室溫靜置25 min后，以樣品空白液為對(duì)照，用1 cm比色杯，分別測(cè)定 樣品液λ 1、λ 2、λ 3、λ 4的吸收值A(chǔ)λ 1、Aλ 2、Aλ 3、Aλ 4，得到△A樣直，△A樣支，再與標(biāo)準(zhǔn)化系 列比較定量。 7.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制 7.3.1 選擇直鏈、支鏈淀粉測(cè)定波長(zhǎng)、參比波長(zhǎng) 分別吸取 1.0 mL、5.0 mL直鏈和支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)貯備液置于 50 mL容量瓶中，加蒸餾水 25 mL，以 0.1 mol/L 鹽酸溶液調(diào) pH至3.0，加0.5 mL碘試劑，并用蒸餾水定容。室溫下靜置 25 min。以蒸餾水 為空白，用雙光束分光光度計(jì)進(jìn)行可見(jiàn)光全波段掃描繪制直鏈和支鏈淀粉吸收曲線(xiàn)。根據(jù)原理（3）確 定直鏈淀粉和支鏈淀粉的測(cè)定波長(zhǎng)λ 1、λ 2，參比波長(zhǎng)λ 3、λ 4。 7.3.2 雙波長(zhǎng)直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制 分別吸取0.3 mL、0.5 mL、0.7 mL、0.9 mL、1.1 mL和 1.3 mL直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)貯備液，置于 50 mL 2 [第5頁(yè)] DB32/T 2265—2012 容量瓶中，加25 mL蒸餾水，以 0.1 mol/L 鹽酸溶液調(diào) pH至3.0，加 0.5 mL碘試劑，用蒸餾水定容。 室溫下靜置 25 min后，以蒸餾水為空白，用 1cm比色杯在λ 1、λ 3兩波長(zhǎng)下分別測(cè)定 Aλ 1、Aλ 3， 即得△A直= Aλ 1-Aλ 3，以△A直為縱坐標(biāo)，直鏈淀粉濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，制作雙波長(zhǎng)直鏈淀粉 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。 7.3.3 雙波長(zhǎng)支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制 分別吸取 2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL、3.5 mL、4.0 mL、4.5和 5.0 mL支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)貯備液，置于 50 mL容量瓶中。以下操作同（7.3.2）。以蒸餾水為空白，用1cm比色杯在λ 2、λ 4兩波長(zhǎng)下分別測(cè) 定Aλ 2、Aλ 4，即得△A支= Aλ 2-Aλ 4，以△A支為縱坐標(biāo)，支鏈淀粉濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，制作 雙波長(zhǎng)支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。 8 結(jié)果計(jì)算 每100克鮮食玉米籽粒中直鏈淀粉和支鏈淀粉的含量分別按式（1）和式（2）計(jì)算。 C ？50？10？(1？ W？ W ) 1 1 2 ………………………………………………………………（1） Y？ ？100 1 M？1000 C ？50？10？(1？ W？ W ) 2 1 2 …………………………………………………………………（2） Y ？ ？100 2 M？1000 式中： Y1——試樣中直鏈淀粉的含量，單位為克每百克（g/100g）； Y2——試樣中支鏈淀粉的含量，單位為克每百克（g/100g）； C1——標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查得的樣品液中直鏈淀粉的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）； C2——標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查得的樣品液中支鏈淀粉的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）； M——測(cè)定用脫脂樣品的質(zhì)量，單位為克（g）； W1——試樣中水分含量，單位為克每百克（g/100g）； W2——試樣中粗脂肪含量，單位為克每百克（g/100g）； 計(jì)算結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后 2位。 9 方法測(cè)定低限和允許差 9.1 本方法對(duì)鮮食玉米籽粒中直鏈淀粉和支鏈淀粉的測(cè)定低限為0.1g/100g。 9.2 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。 3 [第6頁(yè)] DB32/T 2265—2012 附錄A （資料性附錄） 直鏈淀粉與支鏈淀粉參比波長(zhǎng)分析 A.1 直鏈淀粉與支鏈淀粉參比波長(zhǎng)分析 1 直鏈淀粉吸收曲線(xiàn) 1.0 2 支鏈淀粉吸收曲線(xiàn) 0.9 1 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 2 0.2 0.1 λ 2 λ 1 λ 3 λ 4 0.0 400 450 500 550 600 650 700 750 800 波長(zhǎng)/nm 圖A.1 直鏈淀粉與支鏈淀粉參比波長(zhǎng)分析 4 吸光值/Abs